西北农林科技大学的老师，南昊，以诈骗的形式骗取公司一些生物质粒和菌株产品，谎称后续会入订单，结果一直不入单，再联系就以各种理由拖延，拉黑。真丢一个科研工作者的脸，这种人就不适合在科研团队里，卑鄙无耻。满嘴谎言，油嘴滑舌，为了几千块钱，各种卑鄙无耻的谎言和承诺。

细胞培育是一项细致且高度技术性的任务，涵盖了细胞的增殖、繁衍、传代及冷冻保存等多个步骤。每一步骤均需谨慎操作，以保障细胞的健康状态和实验的精确度。今日，小曼将为大家阐述细胞从复苏至传代再到冷冻保存的流程里，一些或许被忽视却至关重要的细节。 1、如何挑选细胞培养基？ 若所购细胞来源于ATCC或其他细胞库，可直接咨询供应商或查阅相关文献资料；培养基的种类繁多，其中最为常用的有四种——MEM、DMEM、1640、F-12。具体可参

免疫荧光（immunofluorescence, IF）技术通过标记抗体以荧光基团，生成荧光抗体作为检测工具，用以识别细胞或组织内的特定抗原（即靶蛋白）。借助荧光显微镜，可观测到荧光信号在细胞或组织中的分布，进而明确抗原的性质及其定位。优势在于能精确确定蛋白表达位置，并辅助评估蛋白表达量。 具体操作步骤 IF染色流程精炼为八大环节： 脱蜡至水；过氧化氢实现通透；抗原修复；羊血清进行封闭；一抗孵育；复温；二抗孵育；封片。以下是对各步骤

原始细胞指的是从生物体组织（例如人类组织、小鼠组织、大鼠组织及兔组织等）通过蛋白酶或其他技术手段分离得到的单一细胞，并在实验室条件下模拟体内环境进行培养的细胞，这些被称为原始细胞。 通常认为，初次培养的细胞以及经过传代但代数在10代以内的细胞，均被归类为原始细胞培养。在人为控制的环境下，促使这些原始细胞存活、增殖、繁衍及传代，以便对细胞生命周期、细胞恶变、细胞工程技术等课题展开研究。 那么，对于原始细

Western Blot（WB）技术是一种广泛应用的蛋白质研究手段，在生物医学领域中占据重要地位。然而，在实验执行过程中，研究者常会面临背景过高的挑战，这不仅削弱了实验结果的精确度，还可能引发对数据的错误理解。 背景过高的成因复杂多样，例如封闭不完全、抗体浓度超标、膜材料选择不当等均可能是诱因。接下来，我们将围绕这些问题展开探讨，并提出相应的应对策略，助力研究人员获取更为清晰、准确的实验结果。 一、完善封闭流程 1. 封闭

ICC实验流程涵盖细胞培养与固定、通透、封闭、一抗孵育、二抗孵育及封片观察6个关键步骤，每一步都至关重要，任何疏忽都可能导致实验失败。 01 细胞培养与固定：作为ICC实验的基石，细胞状态直接影响实验结果。无论是悬浮还是贴壁细胞，均需关注：细胞形态、密度是否正常；特定抗原是否需要药物或胁迫诱导表达；细胞传代次数对特征的影响；以及爬片是否经Poly-lysine等处理以促进细胞附着。 固定剂选择同样关键，交联试剂保护细胞结构但可

一、实验基础原理 1、BCA法概述 BCA法，全称为二喹啉甲酸检测法，是一种被广泛应用于蛋白质浓度测定的方法。它的基本原理在于，铜离子（Cu2+）在碱性条件下会与蛋白质中的多肽链发生反应。 具体而言，铜离子会与含有硫的氨基酸（例如半胱氨酸）以及含有氮的氨基酸（如赖氨酸）进行一系列复杂的化学反应。这一过程中，铜离子被还原为Cu+，这是整个实验的关键转化环节。 随后，还原态的铜离子（Cu+）会与BCA试剂发生反应，生成一种呈现紫色的

我们做的一个科研实验，酒精性脂肪肝小鼠的TC上升，而TG却下降了，有大佬知道为什么嘛

无论新人还是老手，在细胞培养过程中都可能遇到细胞污染的情况。那对于细胞污染，最重要的是预防，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会变差，进而影响实验结果，所以先来讲讲如何预防。 无论新人还是老手，在细胞培养过程中都可能遇到细胞污染的情况。那对于人源细胞或鼠源细胞的污染，最重要的是预防，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会变差，进而影响实验结果，所以先来讲讲

巨噬细胞（macrophage，mφ）是由Elia Metchnikoff在1882年首次在海星幼体中发现的先天免疫细胞。基于对吞噬作用的解释，揭开了先天免疫系统的神秘面纱，Elia Metchnikoff和Paul Ehrlich一起获得1908年诺贝尔奖(生理学和医学奖)。 mφ是天然免疫系统特化的，存活时间长，具有吞噬作用的细胞，是第一道防线的重要组成部分。 mφ参与细胞碎片和病原体的识别、吞噬和降解。mφ还在向T细胞提呈抗原以及诱导其他抗原呈递细胞表达共刺激分子等方面发挥作用，从而启

培养细胞不贴壁 可能原因 1.胰蛋白酶消化过度； 2.支原体污染； 3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）； 4.细胞老化； 5.接种细胞起始浓度太低或太高。 解决方法 1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度； 2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物； 3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2； 4.启用新的保种细胞； 5.调节最佳接种细胞浓度。 悬浮细胞成簇 可能原因 1.培养液中含钙,镁离子； 2.支原体污染； 3.蛋白

为了排除某些因素对PCR结果的影响，PCR实验需要对照实验。PCR的阳性对照是Marker，推测PCR产物长度，判断PCR产物是否是目的片段。PCR的阴性对照是PCR的空白管，除了模板不加之外，其成分与其他管一样，证明没有其他模板污染。 由于目前所用的PCR仪器自动化程度较低，操作步骤较为繁杂，人为因素大，这就不可避免地会出现不同程度的误差。轻微的污染、加量的误差等均可导致结果较大的差异，甚至阳性和阴性出现两种迥然不同的结果。在分析测定

前言：最近中科院遗传所许同学有个疑问：他提出来的RNA仪器数据很好，就是荧光定量做不出来，是什么原因呢？ 我建议他跑电泳后再聊，下面是对应的电泳图： 完全降解！这样的RNA质量能做出来荧光定量才怪呢 所以：不跑电泳就谈RNA质量好坏的，都是耍流氓！因为仪器NarnoDorp2000不能区分DNA和RNA，完全降解的RNA也能读出高纯的OD比值和高浓度数据，所以仪器数据在RNA电泳图合格的前提下才有参考意义！ 下面只从RNA电泳图，谈谈如何判断RNA的质量：

表观遗传调控因子对基于组蛋白修饰的基因表达有重要影响。组蛋白H2AK119单泛素化(H2AK119Ub)是转录抑制的一个成熟标志，受Polycomb抑制复合体1 (PRC1)和核小体去泛素酶(包括主要的人类USP16和Polycomb抑制去泛素酶(PR-DUB)复合体的相反活性的动态调节。最近，多亚基PR-DUB复合物的催化机制已经被描述，但单亚基USP16如何识别H2AK119Ub核小体并切割泛素(Ub)仍然未知。 2024年6月25日，上海交通大学潘漫、清华大学刘磊共同通讯在Nature Structural & Molecular Biology（IF=12.

细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。然而，细胞株在体外培养的过程中会出现一些问题，比如：细胞株无法在培养皿上贴壁生长，细胞株生长缓慢，细胞株死亡等。解决预防处理措施参照如下： 一、细胞株无法在培养器皿上贴壁生长 1.细胞株胰酶消化过度：缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。 2.支原体污染：隔离细胞株，检测是否感染支原体；清洗通风

巨噬细胞具有多种与它们的适应性相关的特征，这种特征对于响应广泛的危险信号并在所有器官中维持组织稳态至关重要。 在肿瘤微环境（TME）中，它们的表型多样性使它们能够与多种细胞类型相互作用，包括但不限于肿瘤细胞、T细胞、内皮细胞和成纤维细胞，最终通过促进免疫逃避和肿瘤进展来促进恶性肿瘤。 巨噬细胞的多方面促进癌症的功能以及它们在TME中的丰富性使它们成为有吸引力的治疗靶点，尤其是考虑到它们的遗传稳定性，可以防止获

今天为大家带来一篇发表于Nat Rev Mol Cell Biol.期刊中，关于铁死亡综述的一篇文章。 铁死亡是一种由铁依赖的磷脂过氧化驱动的独特细胞死亡方式，受到多种细胞代谢事件的调节，包括氧化还原平衡、铁处理、线粒体活性以及氨基酸、脂质和糖的代谢。铁死亡在治疗耐药癌症、缺血性器官损伤和其他与脂质过氧化相关的退行性疾病方面具有巨大的潜力。 文章首先介绍了铁死亡的概念和历史背景，然后详细讨论了铁死亡的分子机制和调节网络，包括GPX4

2024年1月18日，在CELL上发表了一篇题为“Cell death”的重磅综述。 这篇Cell杂志综述深入探讨了细胞死亡的多种途径及其在疾病发生发展中的作用。文章从线虫模型出发，回顾了细胞凋亡（Apoptosis）的发现历程，并详细介绍了哺乳动物细胞凋亡信号通路中关键蛋白的功能和相互作用。随后，文章扩展到其他细胞死亡形式，包括外源性凋亡、坏死性凋亡（Necroptosis）、焦亡（Pyroptosis）和铁死亡（Ferroptosis），并分析了这些途径的信号机制、疾病相关性以及

内参基因的表达水平在不同样本间相对稳定，因此可以用来标准化样本，校正实验数据，消除实验中因上样量不同，操作不同等实验操作产生的误差，确保实验结果的准确性。 让我们透过一个实验案例来探究内参基因与相对定量分析之间的联系。 评估肝癌细胞中A基因的表达量与正常肝细胞的相对变化。通过荧光定量检测，我们得知：肝癌细胞的A基因CT值为25，而正常肝细胞的A基因CT值为26。据此，利用表达量倍数的计算公式，我们得出肝癌细胞的A基

今天聊下玄学实验-Western blot，如果在实验中没有观察到阳性条带或者条带较弱，可能有多种原因导致这种情况。以下是一些可能的原因及其解决方法： 1 蛋白质表达量低：目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限，导致条带弱或不可见。 解决方法：使用更多的细胞或组织样本，或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体：使用的一抗或二抗可能特异性不强，或者稀释比例不当。 解决方法：验证抗体的特异性，优化抗体稀释比例。 3 样本处理不当：样

通过研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用，我们能更好的了解细胞的生命活性，揭示隐藏在表象下的调控机理。 我们的团队在蛋白质相互作用领域具有丰富的研究经验。采用IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down等实验技术以在生物学和分子生物学研究中研究蛋白质的相互作用、DNA与蛋白质的结合以及RNA与蛋白质的相互作用。 这些实验技术可以从检验的出发点来区分：co-IP、ChIP、RIP是利用已知的蛋白去检测机体内的相关蛋白、DNA、RNA，并通过蛋白抗体免疫沉淀

1.处理材料 a.如提取材料为血液，可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200μl可加缓冲液GA补足； 注意： 如需处理更大体积血液，如300μl-1ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300μl血液加入900μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm(~11,500×g)离心1min（若离心机最高转速不允许，可3000rpm(~3,400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀

Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中最常用的一种实验方法，WB的原理很简单——各电泳分离的细胞或组织蛋白转移到PVDF/NC膜上，用特定抗体结合蛋白抗原，再结合标记的二抗似化学发光的方式可视化地将蛋白表达情况呈现在人们面前。 常见问题举例分析：1、蛋白电泳条带异常 “微笑”条带 条带拖尾 条带模糊 原因:凝胶不充分;电压过高;温度过高;电泳速度过快 建议:待充分凝胶后再电泳;降低电压;低温电泳:减慢电泳速度 原因:凝胶浓度

“出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，这两种情况需要分开讨论： 第一种情况：蛋白转录及翻译后的修饰，该因素是引起杂带的最常见原因。转录后，由于选择性剪切的作用，同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白，这类蛋白称为该蛋白的剪接体。在UniProt查询蛋白时，可以在“Sequences ”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms。在进行实验前，需要比对每个剪接体造成的变化是否影响了目标蛋白的对应结构域，进而 判断本研究种涉及的蛋白到底应该

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析。PCR检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。 PCR为最常用的分子生物学技术之一。至今在世界范围内都有广泛的应用，作为生物学实验的一个重要的方法，其有着不可估量的作用。 简单来说分为以下三个步骤： ✦ DNA变性，加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。 引物与靶DN