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根据实验要求，自己随机设计的模板序列，比较短，40nt，去年一直都能跑出来标准曲线，但是今年跑的效果一直都不好，PCR孔终浓度10fm，1fm以及背景都集中在24-25左右，已经排除了试剂污染，气溶胶污染，真的要崩溃了，实在找不到原因了，请路过的大神帮帮忙。 如果实在不行，换个思路，有哪位大佬有关于40-50的扩增效果比较好的模板序的也行 跪求#pcr#

贴友们有愿意交换群的吗？

这个证书现在行业普遍需要双证才能工作 双证是指医学检验士/师资格证+pcr证书

吉林省的PCR上岗证怎么考呀？有没有人能进去吉林省临床检验中心官网呀？

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为啥没官网的报名渠道，全都是中介，中介百分之99都是骗子，别被骗了

3周培训时间 下证入国家临检资源库 略贵，贪便宜勿扰

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五月份报的名，然后一直拖着不给办钱也不退.应该不只我一个吧 有的话就都加一下微信建个群。人多了好办事

因为在做重复，做到第三次之后，怎么p都是这种拖带，反应体系和条件都和之前一样，rna也重新提过。连阴性对照都拖带…

请问一下，胶孔为什么这么亮，是没跑下来吗

赛文cDNA 逆转录试剂盒 SevenClever First Strand cDNA Synthesis Kit(with dsDNase) 适用于各种RNA的逆转录 试剂稳定 自己用的 亲测好用 已跑出结果 没用多少 实验做完了 大概还能用70-80次 保质期剩余一年半 可以赠送GAPDH、U6引物 原价965买的 便宜出#qpcr#

图中的md 5值，是不是要g bff文件格式，有大神知道gbff是啥不

宝子们，后台收到大家的诸多留言，有想了解“胃、结直肠癌淋巴结转移模型；对乙酰氨基酚肝损伤模型；高脂模型“等等，小编均已收到，也登记在册，大家不要着急，小编会一一输出干货内容”。今天事情比较多，来不及整理以往的实验案例，今天咱们说说PCR实验中引物的话题吧~ 今天给小伙伴们分享的是PCR引物设计的8大原则，直接上干货，设计引物的时候，我们都需要考虑哪些因素呢？ PCR引物设计的目的是确保PCR反应能够有效、特异性地扩增

普济生物是高通量PCR技术全球开创者，首创的高通量PCR解决方案包含了高通量PCR仪器系统以及针对不同症候群开发的多靶标高通量检测试剂系统，并搭配自主开发的高通量PCR自动分析算法;突破传统PCR检测信号数量级，兼具检测信息量多和检测灵敏度高的双重优势，解决了分子诊断行业长期痛点;打造了“多快好省”的下一代分子诊断平台，可简便、快速、经济地实现原本需要复杂设备才能完成的临床应用，支持IVD入院和普及下沉。 现诚招代理，诚邀您

有没有老哥会这个，教教我呗

1、引物最好在模板cDNA 的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在15~30 碱基之间 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3、引物GC 含量在40%~60%之间， Tm 值最好接近72℃ GC含量（composition）过高或

有人会修7500吗

PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 1、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 2、PCR试剂的污染: 主要是由于在PCR

PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 1、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 2、PCR试剂的污染: 主要是由于在PCR

在学习过程中，我们经常会遇到各种PCR字眼，什么qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR，你了解PCR这个大家族吗？还在傻傻分不清吗？ 一、什么是PCR？ PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时

今天，我们聊一聊dPCR技术，首先，我们先了解下什么是dPCR？ dPCR：数字PCR（Digital PCR，dPCR），通过将待测样本进行极限稀释，使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子，然后加入荧光信号进行PCR扩增，可以检测到低至一个拷贝的突变。 dPCR检测原理：数字PCR是一种核酸检测和绝对定量的新方法。同传统PCR以及qPCR相比，数字PCR增加了一步分液(partitioning)的操作，将几十微升的已经配好的包含有引物、模板、buffer、酶等组分的PCR反应体系分隔

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提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

Ct值是什么？ qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。所谓“一定产物量”后续作进一步解释。 Ct值有什么作用？ 1.指数扩增、模板量与Ct值的关系 理想情况下，qPCR中的基因经过一定的循环数被指数扩增而积累，扩增循环数和产物量之间的关系是：扩增产物量=起始模板量×（1+En）循环个数。

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 1、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 2、PCR试剂的污染: 主要是由于在PCR

有没有懂哥

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试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。 操作步骤：匀浆处理 a、植物组织 以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol。 b、动物组织 以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%。 c、单层培养细胞 直接在培养板中加入Triz

PCR产物跑胶后测序老是有点突变怎么办？提高些温度能行吗？

如图 第一次遇到这种奇怪的曲线 请问各位大佬是什么原因形成的呢

求助，荧光定量中标准品Ct值波动太大，4个标准品，S1定量时每次实验的Ct值会有差别，S2.3.4每次的Ct值都比较稳定，想问问这种情况下，不改变反应体系用量，增加S1的加样量可以降低Ct值吗？目前是每孔2μl标准品+18μl反应体系，如果换成2.3μl标准品+18μl反应体系，可否降低S1的Ct值？

新手求助

有大佬知道可以批量设计kasp引物的软件或者网站么，本人做小麦的，用过poly Marker，但是返回的引物都是非特异的，引物设计效率很低。

1、PCR PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，体系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、扩增增强因子，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。 2、热启动PCR 常规PCR的扩增开始时间并不是放进PCR仪，运转程序才开始扩增。当体系配置完成的时候，扩增就开始了，这可能会引起非特异性扩增出现，热启动PCR可

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核酸（" RNA ")，适合用于多重 RT - PCR 协议检测 人类呼吸道病原体（如甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒）病毒 FLUAH1,FLUAH3，腺病毒，副流感1病毒，副流感2病毒，副流感3型病毒副流感4型病毒呼吸道合胞病毒人类 偏肺病毒， SARS - CoV -2及其变种） ⭕️ 美国临床报告显示，#百泰克 各项指标都是第一，优于雅培，西门子，BD等国外大牌有FDA CE，#无锡百泰克 Bioteke VX:litingxxzj Including 2019-nCoV， influenza A virus，influenza B virus，respiratory syncytial