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RNA甲基化修饰和定量?惊呆了我和小伙伴们!!!--new

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RNA甲基化修饰试剂盒(货号:A-P-9003)
最新报道,5-甲基胞嘧啶(5-mC)不仅广泛的存在于基因组DNA中,在RNA中也普遍存在。但是,RNA甲基化的功能仍不清楚。有些研究认为RNA甲基化在翻译调控中起着重要作用,而有些研究认为其在RNA的稳定性及结构中起着重要作用。在人类中, 5-mC会出现在各种不同形式的RNA分子上,包括tRNAs,rRNAs,mNRAs,非编码RNA(ncRNAs)等。至少有10275个的5-mC候选位点被发现在mRNAs和ncRNAs,它覆盖了10.6%残留在转录组的总胞嘧啶。5-mC似乎浓缩在某些类型的ncRNA,但相对缺乏mRNAs。然而,绝大多数(83%)的候选位点中发现在mRNAs。在这些转录组上, 5-mC似乎耗尽在蛋白质编码序列,且浓缩在5’和3’UTRs。两个不同的甲基转移酶,NSUN2和DNMT2已知催化5-mC修改在真核生物的RNA。最近强有力的数据表明,RNA胞嘧啶甲基化作用影响着调节各种生物过程,如RNA稳定性与信使核糖核酸(mRNA)的翻译。此外,损失5-mC在vault RNAs导致异常的处理成Argonaute-associated小RNA片段,可以作为小分子核糖核酸(即microRNA)。因此,受损的处理的vault ncRNA可能与导致人类疾病的病因NSUN2-deficiency人类疾病相关。亚硫酸氢盐转化RNA,紧接着是RT-PCR扩增、克隆和可信的测序分析,来收集可靠的关于RNA胞嘧啶甲基化状态的信息,变得尤为重要。由于RNA的不稳定性,导致对于RNA的研究十分困难。为此,我公司给您强烈推荐RNA甲基化修饰试剂盒,解决了如上的问题。该产品包括了进行修饰所有必要组件,独特设计的混合液配方包含了RNA的保护剂,以防降解。这样有效保证了胞嘧啶转化成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶几乎不受影响。无毒的RNA紧紧的结合在离心柱基质上, RNA可以有效去除残余的亚硫酸氢和盐,得到纯净的修饰RNA。洗脱后的RNA可以用于做qMSP(即RT-PCR),MS-HRM和测序分析(如:焦磷酸分析和深度测序)等各种RNA甲基化后续实验分析。
m6A RNA甲基化定量检测试剂盒(货号:A-P-9005/900X)
众所周知,在真核生物中,m6A (N6-methyladenosine)是在RNA分子中最常见的和丰富存在的。这种修饰是由m6A催化甲基转移酶复杂METTL3和最近发的m6A RNA 去甲基转移酶如FTO和ALKBH5,这种 m6A RNA去甲基是以α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和Fe2+-方式进行的。结果表明, 在许多生物过程中,如从生命发展和代谢生育,METTL3,FTO和ALKBH5扮演着重要角色。超过80%的m6A是以RNA 甲基化的形式存在于不同的物种。m6A主要分布在mRNA和也发生在非编码RNA(ncRNA)如tRNA,rRNA和snRNA。相对丰富的m6A在mRNA转录时已经表明影响核糖核酸代谢过程,如拼接,核出口,翻译能力和稳定性,RNA转录。异常甲基化水平的m6A诱导缺陷甲基化酶和m6A RNA去甲基酶可能导致RNA功能障碍的和疾病发生。例如,异常低水平在正常m6A目标由于增加患者FTO活动、FTO基因突变,通过迄今还未通路,导致了肥胖和相关疾病的发作。动态和可逆化学m6A修饰,在RNA中也可以作为一种新颖的表观遗传标记的生物学,意义深远可以预见。因此,更多的有用的信息,更好理解m6A RNA甲基化水平和分布对RNA转录、诊断和治疗疾病非常有益。
该产品中,总RNA必将结合在微孔板上,使用一种高特异性的RNA溶液方案。使用特异性较强的捕获抗体和检测抗体来分析m6A。检测产生的增强信号,然后通过读取在微型板分光光度计波长为450 nm处吸光度进行比色定量。m6A的数量与测量的OD值强度是成正比的。在这个试剂盒中包括阳性和阴性对照。绘制标准曲线 (范围:0.02到1 ng的m6A)或单点对照的m6A可以用作阳性对照。因为m6A的含量,在不同的组织,正常和病变的部位,或在处理过以及未处理的条件下,我们建议运行2份样品,以确保信号生成的可信心性。这套解决方案将允许研究人员选择定量一个绝对数量的m6A或确定相对m6A RNA甲基化状态的两个不同的RNA样品。
该款产品拥有一套完整的优化缓冲液和试剂体系,可以采用比色或荧光法来定量总RNA中的 m6A (N6-methyladenosine)。对于总RNA(从哺乳动物,各种组织或细胞样本如像培养瓶和培养皿培养的细胞,新鲜和冷冻的组织,石蜡包埋组织,血液,体液,植物,真菌,细菌和病毒等任何样本中提取的) 中m6A直接定量检测甲基化状态是非常理想的。


1楼2014-02-18 17:30回复