先用化学方法合成这个DNA，再酶切连接T载体，转化大肠杆菌。再培养一段时间，测序看看质粒做好了没有，然后提质粒，再酶切，连接表达载体，转大肠杆菌，就可以iptg诱导产蛋白了，我实验当时就这么做的，不知道行不行。

第二个问题：先超声波破碎菌液，再超速离心去掉各种杂质，我们当初是加了GST标签的，就可以亲和层析了，就拿到蛋白质了

…

看不懂

我来说说看好了 先化学合成DNA，这个是生物公司做的，你就得到低浓度的DNA了，这个时候得先跑PCR，这个PCR跑完了就会在产物两端各挂一个A 然后你开始用“T载体”，T载体上面有Ecor 1和Sal 1两个酶的切割位点，还有一个特点就是它两端都长出了1个T，得名T载体

你的目的基因是两边多A，载体两边多T，这样粘性末端刚好搭配起来，得到一个质粒，质粒转进感受态细胞，把大肠杆菌养起来，提质粒，你的质粒就会有很多

得到了质粒就要酶切它，刚才说过这个有两个酶切位点，你把你的质粒切了，再换另一个载体，这个载体叫“表达载体”，这个载体是有启动子和很强的增强子的，它容易转录翻译蛋白质的。我们不是学过乳糖操纵子吗？我们手上的质粒酶切产物就挂到lac Z基因

的上面，把lac Z顶掉，细菌就开始生产我们的蛋白质了，根据操纵子的知识，要提高转录频率要加别乳糖的，我们改成聚丙基硫代半乳糖苷，（iptg）这个是别乳糖类似物，作用和别乳糖一样，不过这个东西细菌分解不了，就一直刺激它表达蛋白质

细菌表达了这个蛋白质，但是细菌不能分泌它，就待在细菌里面，你等到细菌长的差不多了就去用超声波把细菌打碎，蛋白质是溶解的，你一离心细菌的细胞膜什么的都变成渣滓沉底下去了，就取清液，蛋白质就在这里面了，不过和一些别的蛋白混合在一起

现在回到第一步，合成DNA，你的DNA不仅仅是目的蛋白的碱基序列，你要处理一下，比如说，在蛋白质是序列后面挂8个HIS的碱基，这样做出一个带8个组氨酸的目的蛋白，这8个His的氨基酸残基序列会和镍结合的，你就可以亲和层析把它洗脱下来了

不好意思说错了，应该是6个His残基，后来似乎可以把这段氨基酸序列给减掉的，应该是有搭配一起用的酶来剪吧。
不过看到你的题目是发酵。。。。做酵母的人很少吧，我们当时是做一个转录因子对基因表达的影响的，真核生物的转录因子也用细菌来做的，似乎是不用化学修饰的蛋白质都可以拿大肠杆菌做

我其实当年也学艺不精，大概知道了些这个，错了还望大神们指出来呀！