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我是新手做细胞培养,谁能给我指点一二?

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1楼2016-03-16 09:38回复
    描述:刚开始学习培养细胞,以下是我做的一个简单的总结,请各位大神帮我指点一二,谢谢啦


    2楼2016-03-16 09:44
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      正文:
      细胞培养前期准备
      1、培养基、血清、胰酶、PBS、培养瓶、滴管、离心管 ;
      2、100ml玻璃瓶10个(用于分装血清,配成10%培养液);25-50ml玻璃瓶2个(装胰酶);500ml玻璃瓶2个(分装PBS);
      3、所有玻璃器皿洗净烘干泡酸再洗净烘干消毒;塑料或橡胶塞则洗净烘干蒸馏水煮30min 烘干消毒;
      4、酒精灯、镊子、剪刀、广口玻璃瓶、消毒用酒精、棉球、吸耳球、酒精喷壶、橡胶手套
      细胞培养基本技术
      1、建立细胞冻存库,细胞冻存库应该分主细胞库和工作细胞库,当需要做实验时从主细胞库中复苏细胞建立工作细胞库。每一个冻存标本都应明确记录细胞的性质、代数及有无污染。
      2、进行详细的实验记录,包括细胞系的种类及来源、有无污染、细胞代数和倍增时间、以及选择性突变。经过连续传代培养的细胞与它较早代数的冻存细胞相比,随着培养时间的延长,细胞在适应环境的过程中,其生物特性已发生了改变。培养的细胞由若干生长速度及活力各异的亚群组成。随着培养时间的延长生长速,度快及活力高的细胞亚群逐渐占优势这种选择性,趋势会影响整个细胞群的生物特性。应用不同代数的细胞连续进行实验则结果会发生偏差。建立细胞冻存库就能避免这种影响通过复苏相同代数的细胞,人们就能在较为均一的条件下重复实验。
      3、为了避免细胞被外界污染物污染以及操作过程中产生的飞沫限制在超净工作台中。超净工作台需要合理的布置和维护,工作台内减少物品,使用时采用垂直气流比水平气流安全。
      4、为了避免细胞发生污染,在同一个实验室内培养不同的细胞系所使用的培养基应分开使用。


      3楼2016-03-16 09:46
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