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丙二醛含量试剂盒的操作步骤及MDA含量计算

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丙二醛含量试剂盒(微量法)
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0025
规格:100T/96S
产品简介:
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成红色产物,在532nm有最大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定600nm下的吸光度,利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存;
注意事项:
临用前注意试剂一是否完全溶解,如未溶解,可以70℃加热,并振荡以促进溶解。


1楼2017-05-26 10:22回复
    操作步骤:
    一、 MDA提取:
    1、 细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
    2、 组织样品的制备:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
    3、 血清(浆)样品:直接检测。
    二、 吸光值测定:
    1、 吸取0.3mL 试剂一于1.5mL离心管中,再加入0.1mL样本, 混匀。
    2、 95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g,25℃,离心10min。
    3、 吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中,测定532nm和600nm处的吸光度,记为A532和A600。
    三、 MDA含量计算(石英比色皿):
    1、血清(浆)中MDA含量的计算:
    MDA含量(nmol/ mL)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷V样=25.8×(A532-A600)
    2、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算
    (1)按照蛋白浓度计算
    MDA含量(nmol/ mg prot)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样)=25.8×(A532-A600) ÷Cpr
    (2)按照样品质量计算
    MDA含量(nmol/ g 鲜重)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)=25.8×(A532-A600) ÷W
    (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
    MDA含量(nmol/104)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500)=0.0516×(A532-A600)
    V反总:反应体系总体积,0.4×10-3 L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103 L/mol/ cm;V样:加入样本体积,0.1 mL;V样总:加入提取液体积,1mL;d:比色皿光径,25px。Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。 W:样品质量,g。500:细胞或细菌总数,500万。


    2楼2017-05-26 10:22
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      MDA含量计算(96孔板):
      1、 血清(浆)中MDA含量的计算:
      MDA含量(nmol/mL)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷V样=51.6×(A532-A600)
      2、 细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算
      (1)按照蛋白质含量计算
      MDA含量(nmol/ mg prot)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样)=51.6×(A532-A600) ÷Cpr。
      (2)按照样品质量计算
      MDA含量(nmol/ g 鲜重)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)=51.6×(A532-A600) ÷W。
      (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
      MDA含量(nmol/104)=[(A532-A600)×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)=0.1032×(A532-A600)
      V反总:反应体系总体积,0.4×10-3 L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103 L/mol/ cm;V样:加入样本体积,0.1 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;d:96孔板光径,12.5px。Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。 W:样品质量,g。500:细胞或细菌总数,500万。


      3楼2017-05-26 10:23
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        http://www.solarbio.com


        4楼2017-05-26 10:23
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          有没有相关数据 急需 谢谢


          来自Android客户端5楼2017-06-04 10:10
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