回复：转基因食品的最大问题是慢性剧毒持久毒害人体健康

续上补充：
材料与方法
农杆菌属菌株。用根癌农杆菌菌株EHA101带有一个二元向量pLAN411或pLAN421（图1）。质粒pLAN411含有nptII基因连接CaMV 35S启动子和nopaline胭脂碱合成酶(NOS)终结子。而质粒pLAN421含有nptII基因连接NOS启动子和NOS终结子，在两种质粒中，GUS基因连接35S启动子和NOS终结子。
植物材料制备。种子是从在市场上购买的品种“Hayward”的水果中收集的，在自来水下被洗得很好以去除果皮。然后将其浸泡在2%氯化钠溶液中，用力摇晃25分钟，用消毒水冲洗10次。灭菌的种子被镀在MS(Murashige和Skoog 1962)培养基上，没有植物生长调节剂，用0.8%琼脂凝固。大约一个月后，被延长到3到4厘米的下胚轴被切割成5毫米的线段，感染根癌农杆菌。
茎扦条的制备如下。1989年6月，新伸长的枝条从田间种植的树收集，品种海沃德'Hayward'，种植在名取农场(山梨县)。茎被切至约5厘米长，其表面被中性洗涤剂洗净。插条浸泡在中性洗涤剂溶液中5分钟，用水冲洗5分钟，用70%乙醇浸泡5分钟。他们用1%的低氯酸钠溶液进行了两次10分钟消毒，用消毒过的水冲洗了三到四次。经灭菌后的插条被切成3毫米厚的部分，并被感染根癌农杆菌。
根癌农杆菌感染和嫩芽再生。根癌农杆菌菌株EHA101 / pLAN411和EHA101 / pLAN421生长在5 ml的LB(Sambrook等人1989)培养基中，其中含有50 μg/ ml卡那霉素、25 μg/ ml氯霉素和50 μg/ ml的壮观霉素，在30℃过夜，然后用20 ml无菌蒸馏水稀释。将下胚轴或茎段放入农杆菌悬浮液中，用力摇动20分钟，通过筛网过滤，将其与农杆菌悬浮液分离。
节段被涂在消毒纸巾上，并在不含抗生素的情况下被镀上培养基。对两种培养基进行了检测，其中一种培养基为MS4PU，其中含有1.0 mg/l N-(2 -氯- 4-吡啶基)-N- 苯基脲(4PU)，而另一种培养基B5Z则由B5(Gamborg等人1968)培养基组成，含有3 .0mg/l 玉米素。本研究中用于组织培养的所有介质均以0.2%的凝胶固化。
在与根癌农杆菌共同培养一天后，片段被转移到MS4PU或B5Z培养基上，每一个培养基都添加了500 μg / ml的头孢氨噻肟(头孢噻肟钠，赫司特公司)，以去除细菌。
共培养一周后，片段切割面开始形成愈伤组织。在含头孢噻肟钠培养基的两周培养后，所有的片段被转移到选择培养基，MS4PU或B5Z，辅以25 μg /ml 卡那霉素和500 μg / ml的头孢噻肟钠。在选择培养基上培养两周后，下胚轴段再生嫩芽，培养4周后产生茎段。
再生芽长度达到约5mm时，它们被从愈伤组织或片段切断，转移到新制备的选择培养基。4个或5周后，嫩芽生长到1cm左右，然后转移到另一个由MS培养基组成的培养基中，其中含有25 μg / ml卡那霉素和100 μg/ ml的头孢噻肟钠，没有植物生长调节剂。在新制备的培养基上，每隔4周或5周就会有再生嫩芽，这是一种半强度的MS培养基，有25 μg / ml卡那霉素和100 μg / ml的头孢噻肟钠。在再生芽生根时，将植株移植到无菌蛭石上进行驯化。所有的培养都保持在25℃，16小时在荧光灯下。
NPTII活性分析和GUS分析。根据McDonnel等人.(1987)对NPTII活性进行了斑点杂交分析。根据杰弗逊(1987年)的研究，使用4 -甲基伞状细胞(4 -MUG)的荧光测定法检测了GUS的活性。用5 -溴- 4 -氯- 3- indolylglucuronide(葡萄糖苷酸)组织化学检测(Jefferson 1987)对转化植物中GUS表达定位进行了评价。叶片、叶柄或茎部分切割用剃须刀片进行切割，并与反应物的缓冲液一起孵育(0.1 M磷酸钠缓冲液，pH7.0)含10 mM葡萄糖苷酸在37℃过夜。GUS表达被检测为蓝色沉淀，当叶绿素掩盖观察时，切片被浸泡在70%乙醇的30分钟后，GUS反应脱色的叶绿素，然后在显微镜下观察。

讨论
本文所述结果的主要结论是，两株单独的猕猴桃植株的转基因成功地由后代遗传和表达。对苹果的研究已经证明了木本多年生植物后代的转基因的遗传(James等人. 1996)。
两种遗传基因的转基因植物在Southern杂交的基础上，都含有大量的T-DNA插入。这些插入的精确结构没有确定，但遗传证明至少有一些拷贝在不同的基因位点上被整合。可能已经发现了高TDNA拷贝数，因为只有两种植物被详细分析，或者可能是转化实验中使用的特定载体和共同培养条件的结果。随后产生的其他转基因植物，都是猕猴桃和它的二倍体祖种，它包含更简单的整合事件，更典型的是其他物种的农杆菌介导转化(MacDiarmid 1993;Fraser等人1995;Whittaker1997)。除了这些T-DNAs的多拷贝性质外，还出现了大量的重排。例如，用nptll进行的BamHI消化研究预计会给出一个单一的内部片段;然而，得到的附加条带只能从删除或重新排列的T-DNA衍生物中得到。在载体中使用的T-DNA的大尺寸(假设整个载体从单个边界转移)可能导致了重新排列的次数。
详细分析了两种杂交组合的转基因表型的意想不到的分离模式，卡那霉素抗性和GUS表达在子代中独立分离。对于含有nptll和uidA转基因的T-DNA，这两种表型的共分离是可以预期的。在转基因苹果系的子代中也观察到独立的分离，在这条线上，卡那霉素和GUS表达独立分离(James等人. 1996)。
以下是对这种行为的两种解释，即沉默和删除T-DNA拷贝，如下所述。
uidA报告基因的表达在9株成年植株中被监测，这些植物来自5个独立的转基因植株，这些植物在体外生长时都表达了GUS。在这五个株系中，有三个株系，在野外生长的植物中转基因继续被表达。例外的是在培养中表现出弱和变化的两个株系(见图2F,Janssen & Gardner 1993)。
在过去的几年里，显然，植物转基因的不一致表达是以合理的频率发生的，这种现象被称为沉默或共抑制(见Matzke & Matzke 1995;描述，Depicker & van Montagu 1997)。在原植体中GUS的不规则表达与在沉默的植物中观察到的表达模式相似(van der Krol等人1990;Jorgenson等人)，1996年。我们观察到的在子代之间的表达的变异性，并且观察到GUS表达在高等植物下部植物叶片中的含量较低，也是很典型的沉默(de Carvalho Niebel 等人. 1995)。我们建议在这里分析的猕猴桃植株中基因沉默。导致基因沉默频率高的主要因素很可能是整合事件的复杂性(Cluster等人. 1996;Jorgenson等人. 1996年)。

中和转基因胡萝卜(胡萝卜属 胡萝卜L.)-衍生麻疹病毒血凝素的免疫原性
Neutralizing immunogenicity of transgenic carrot (Daucus carota L.)-derived measles virus hemagglutinin
E. Marquet-Blouin, F.B. Bouche , A. Steinmetz和C.P. Muller
1分子生物研究所植物CNRS，12街General Zimmer，67084斯特拉斯堡，法国；
2麻疹免疫部门和WHO世卫组织麻疹协作中心，国家健康实验室，20A，Auguste Lumiere街，1011卢森堡;这些作者对这项工作贡献相等
2001年12月7日收到；2002年7月6日接受修订版
关键词：胡萝卜、胡萝卜属胡萝卜、血凝素蛋白、麻疹病毒、中和、疫苗
摘要
尽管可食用的疫苗似乎是可行的，但人类病原体的抗原大多是在植物中表达的，除非它们被煮熟，否则它们对人类的消费没有吸引力(如土豆)。煮沸可降低许多抗原的免疫原性。最近，改造水果和蔬菜的技术也得到了完善。我们将胡萝卜植株用根癌农杆菌转化(可以生吃)，从而获得麻疹病毒的免疫显性抗原转基因，这是人类的一种主要病原体。血凝素(H)糖蛋白是麻疹的中和抗体和保护性抗体的主要目标。用Southern印迹证实了H转基因的拷贝数，并通过RTPCR证实了特异性转录。用蛋白印迹法western blot检测胡萝卜转化植株膜蛋白中的H蛋白。重组蛋白的分子量似乎比病毒蛋白质低8%。虽然这表明了一种不同的糖基化模式。用叶片或根部提取物对小鼠进行免疫接种，引起IgG1和IgG2a抗体的高滴度，这种交叉反应与麻疹病毒有强烈的反应，并在体外中和病毒。这些结果表明，转基因胡萝卜植株可以作为一种高效的表达系统来产生高度免疫原性病毒抗原。我们的研究可能为可食用麻疹疫苗铺平道路，这可能是目前的减毒疫苗的补充。
缩写:CaMV，花椰菜花叶病毒；H，血凝素蛋白；IP，腹腔；MABs，单克隆抗体；MV，麻疹病毒；OD，光密度；RT，反转录；TEV，烟草腐蚀病毒；wt,野生型
介绍
基因转化技术的发展使得外源基因在越来越多的植物物种中的得以表达。20世纪90年代初，首次报道了用于生产可作为实验性免疫原蛋白的利用植物生产外源抗原蛋白(Cardineau和Curtis，1990年;Mason等人.,1992)。从那时起，一些病毒和细菌抗原在多种植物种类中被表达(McGarvey等人，1995年;Thanavala等人.,1995;Carrillo等人.,1998;Gomez等人.,1998;Modelska等人.,1998;Tacket等人.,1998;Wigdorovitz等人.,1999)。尽管在转译处理过程中的差异，病毒和细菌抗原在植物保留了它们的免疫原性和诱导杂交反应，有时中和抗体和保护抗体。因此，植物可能是一种廉价的抗原来源，可以很容易地纯化用于肠外接种(Thanavala等人.，1995;Gomez等人.,1998)。此外，口服摄入高水平表达抗原的植物也有可能具有食用疫苗的潜力。(Kong等人.，2001)。
基于强效粘膜佐剂的策略，如霍乱毒素和大肠杆菌的不耐热肠毒素(Haq等人.，1995;Arakawa等人，1998a,b)可能为口服免疫铺平道路。
关于食用植物疫苗的研究主要是在很大程度上不适合人类食用的植物种类(例如烟草，烟草烟叶，Thanavala等人，1995年;Mason等人 .,1996;Huang等人 .,2001;烟草benthamiana，Modelska等人，1998年;拟南芥，Carrillo等人，1998年;Gomez等人,1998)。对于大多数在可食用植物中表达的人类病原体的蛋白质，土豆被使用，通常在食用前煮沸(Mason等人，1996;Arakawa等人,1998;Richter等人,2000;Kong等人,2001)。可以预料到，许多抗原不会在不变性的情况下抵抗烹饪，而且煮熟的植物材料的免疫原性要低于生植物(Kong等人，2001)。因此，有必要开发其他更合适的转基因植物物种。
作为食用疫苗。包括水果和蔬菜在内的其他转基因可食用植物的技术进一步完善(Schenk等人，2001;Brodzik等人. 2000年)。我们选择改造转基因胡萝卜，这种胡萝卜可以在世界上大部分地区种植，既可以生吃，也可以煮熟，是婴儿早期饮食的一部分。
目前的麻疹减毒活疫苗通常在9到15个月的年龄常规发放。单次注射后，血清转化率高，并发症少，保护持久。这些优势与其他实验性麻疹疫苗很难匹配。然而，在25年之后，50%的接种疫苗被认为已经失去了保护性的抗体水平(Mossong等人，1999)。用口服疫苗进行再接种可以提高残余免疫力，这将是一种可取的策略，因为它可以自我管理，需要较少的卫生工作者的培训，并避免针注射所带来的风险。
已经证明了一些病原体潜在的注射用药物/口服优先级增强计划 (Kong等人, 2001; Mantis等人, 2001).。在口服疫苗后，这样的时间表可能不太容易出现虚弱和变化反应的问题。一种以口服疫苗为基础的战略对发展中国家大规模加强免疫接种具有特别的作用，因为在这些国家，需要提供注射用药物疫苗可能妨碍根除工作。
本研究的目的是（1）探讨胡萝卜作为一种适合人类食用的抗原表达系统的潜力，以及（2）检测麻疹病毒血凝素糖蛋白是否能保持该系统中和免疫原性。虽然已经完成了一些转基因胡萝卜愈伤组织细胞的研究(Brodzik等人，2000)，这是第一个关于成熟胡萝卜中表达转基因抗原的报告，表明在这种植物中产生的糖蛋白可以诱导高水平的病毒中和抗体。

为了排除这一活性可能是由于部分变性的重组蛋白，血清还进一步检测了抗体与MV-重复感染WMPT细胞(图6A)和H-转染的melo - juso细胞(图6B)表达的完整的原生蛋白。流式细胞仪数据显示，所有接种过转基因叶片或根部提取物的小鼠都能独立地与原生蛋白发生杂交反应，而不是病毒感染或H蛋白转染细胞。抗体水平与哺乳动物细胞中产生H蛋白免疫的小鼠相似，而野生型植物诱导无杂交反应性抗体。

除了强病毒杂交反应外，所有的血清都显示出高水平的中和抗体，在一个标准的血小板减少中和试验中。在对叶片提取物进行免疫接种的组中，观察到10700(500 - 22 500)的平均中和滴度，而根部提取物明显降低了滴度(3000;范围800 - 7400)。在未转化的植物提取物中，小鼠的所有血清都有滴度 < 64，被认为是阴性。
一般来说，叶片的杂交反应和中和滴度都高于根部。这可能反映出表达上的差异或提取过程中产量的差异。
讨论
虽然可以食用的疫苗似乎是可行的，但很少有抗原在适合人类消费的植物中表达(Modelska等人，1998年;Kapusta等人,1999;Sandhu等人,2000)。例如，马铃薯已经被用来表达人类病原体的抗原(Mason等人，1996;Arakawa等人，1998a,b;Richter等人,2000;Kong等人,2001)。然而，生土豆并不是很有吸引力，烹饪可以大大降低疫苗的免疫原性(Kong等人，2001)。这是在成熟的胡萝卜(可以被人类生吃)和老鼠的异种蛋白的抗原和免疫原性的一种抗原蛋白表达的第一个报告。利用根癌农杆菌获得CaMV 35S双启动子的MV-H基因的基因组整合。
Southern杂交分析表明，所有再生转基因植物分析集成了转基因的单一拷贝，并随机在胡萝卜基因组中整合。在所有克隆中，可以通过RT-PCR扩增出具体的期望尺寸的特异性转录本。
荧光显微镜下，一种含有绿色荧光蛋白的MV-H融合蛋白(GFP)在烟草保护膜中表达了与质膜(未显示数据)的主要关联。胡萝卜细胞膜组分在免疫印迹却产生了一个强烈的信号2µg湿重的特异每克蛋白质。有趣的是，在SDS-PAGE中，转基因蛋白的迁移速度比哺乳动物细胞中相同的蛋白质要快，这意味着大约6 kDa的大小差异。狂犬病病毒糖蛋白G在植物中表达时也有类似的观察结果。(McGarvey等人，1995)。c -末端融合的GFP的表达表明H蛋白被完全翻译，其外观大小的差异很可能是由于转录后修饰。在病毒中，Edmonston菌株H蛋白在预测的5个N-糖基化位点(Hu等人，1994)中的4个位点发生糖基化。研究表明，哺乳动物蛋白的糖基化在植物中是有效的，但通常不同的碳水化合物侧链被利用(Bardor等人，1999)。植物的复杂糖链通常比动物的要小，部分原因是它们缺乏唾液酸(Faye等人，1993)。在同样缺乏唾液酸的昆虫细胞中，重组H蛋白的体积缩小是由于糖基化的差异(Vialard等人，1990)。真实的后转译修饰，如糖基化和胱氨酸桥的形成，被认为对细胞内的贩运很重要(Hu和Norrby,1995)以及H蛋白的抗原构象(Hu等人，1994;Hu和Norrby,1995)。
最近，黄等人(2001)报道了烟草叶中H蛋白的表达。在这个系统中，本地的H蛋白是无法检测到的。在增加了一个内质网的保留信号后，ELISA对兔和人的多克隆血清可以检测到低水平的蛋白质。与单克隆抗体的反应甚至更弱或阴性，表明构象可能不太理想。
H蛋白的免疫原性对于诱导抵抗病毒感染和疾病的抗体至关重要。构象依赖的单克隆抗体证实了胡萝卜中产生的转基因蛋白的正确抗原结构;而只确认变性蛋白的单克隆抗体 BH1没有反应活性。
在接种免疫了转基因胡萝卜的提取物后，发现了高水平的病毒中和抗体，使用世界卫生组织WHO推荐的噬菌斑中和试验(Miller等人，1995)。这些滴度与哺乳动物细胞衍生的H蛋白提取物具有可比性。抗体同类型亚类表明，与哺乳动物起源的H蛋白(主要产生Th2(或抗体主导)反应)相比，植物蛋白诱导Th1 / Th2平衡反应，表明体液和细胞反应。这对于预防非典型麻疹可能是很重要的，当这种疫苗被用于未启动的个体时。
在许多国家，胡萝卜是成年人和儿童饮食的组成部分，食用植物中稳定的抗原转基因可以在未经进一步处理的情况下生吃，这可能使最贫穷的人能接触到疫苗。虽然植物可以作为高效的生物反应器来生产抗原，但当免疫原性可以在口服摄入后表现出来时，植物性疫苗的全部潜力就变得明显了。植物性疫苗的一个常见问题是口服后的反应是不一致的和可变的。有时，即使是低水平的抗原，也能在小鼠(Mason等人，1996;wigdorovitz等人，1999)和人类(Kapusta等人，1999)口服给药后产生有效的反应。
在其他病例中，黏膜佐剂改善了黏膜免疫(Arakawa等人，1998b; Kong等人，2001)。黄等人(2001)的研究表明，口服转基因烟草后的免疫反应很弱，即使在联合管理的高水平(3倍1 mg)的CTB中。
然而，当实验性口服疫苗在肠外注射后，其结果比单独口服免疫后更一致(Kong等人，2001;Mantis等人,2001)。因此，当对当前(可注射的)活减麻疹疫苗免疫时，用口服疫苗的主要加强计划可能是一个有吸引力的选择。需要进一步的研究来证实胡萝卜株在这种情况下表达麻疹抗原的功效。

转基因番茄果实表达呼吸道合胞病毒-F蛋白的口服免疫反应引起机体免疫反应
Oral immunization of mice with transgenic tomato fruit expressing respiratory syncytial virus-F protein induces a systemic immune response
Jagdeep S. Sandhu, Sergei F. Krasnyanski, Leslie L. Domier, Schuyler S. Korban, Mark D.Osadjan,∗& Dennis E. Buetow,∗∗
1分子与综合生理学系;∗现在地址:环境系,人口和分子生物学,科罗拉多大学博尔德CO80309
2自然资源与环境科学系
3美国农业部，农业研究局和作物科学部，伊利诺伊大学，厄巴纳，IL 61801
1999年9月13日收到;2000年3月6日修订;2000年3月10日接受
关键词:可食用疫苗，免疫球蛋白G和A，呼吸道合胞病毒，转基因番茄
摘要
呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿时期最重要的病原体之一。本文通过对转基因番茄植株的RSV融合蛋白基因的表达，研制出了一种以果实为基础的可食用亚单位疫苗。结果表明，番茄果实在果实特异性E8启动子的控制下成熟。成熟的转基因番茄果实对小鼠进行口服免疫，诱导血清和黏膜RSV-F特异性抗体。在免疫反应中产生的免疫球蛋白亚类的比值提示，一种T型辅助性细胞免疫应答是优先诱导的。当免疫小鼠暴露于灭活的RSV抗原时，血清抗体显示滴度增加。
RSV-F片段从pBlueScript II KS中分离出来，并与XbaI和SstI进行分离，并将其连接到二元植物载体pBI121(Clontech,美国)中，取代了gusA基因并产生pJSS3(图1)，2.2 kbp E8启动子来自番茄(Deikman 等人，1992)。(来自加州大学伯克利分校的博士费希尔(Dr.R. Fischer))用来自pUC118质粒EcoRI和BamHI分离，并连接到pBlueScript II KS，在这些限制位点开放。这为E8启动子的5‘端提供了一个HindIII位点。在pJSS3中RSV-F基因的CaMV35S启动子上游(图1)被HindIII和BamHI消化去除，并由E8启动子取代给pJSS4(图1)。

讨论
在转基因番茄果实中表达的RSV-F抗原，在喂食后在BALB / c小鼠中产生血清和粘膜免疫反应。这表明，利用目前的方法生产一种可食用的疫苗对RSV和其他哺乳动物病毒也有可能。在番茄果实成熟过程中(Lincoln等人，1987)和其组成的CaMV 35S启动子(Benfey等人，1989)被用来驱动RSV-F基因表达。E8启动子与CaMV 35S启动子(图2)一样，在成熟果实中是有效的，而转基因植物则包含E8启动子，产生足够的抗原刺激小鼠血清和黏膜抗体的产生(图4A,B)。这一结果与最近的研究表明，植物衍生的微生物抗原，例如，结合亚基的大肠杆菌(LT-B) (Haq等人，1995)和霍乱毒素B亚组(Arakawa等人，1998)，成功地成为小鼠可食用疫苗的来源，在加强免疫接种后，对抗体效价增加。

直接基因转移到植物
Direct gene transfer to plants
Jerzy Paszkowski,Raymond D.Shillito,Michael Saul,Vaclav Mandak,Thomas Hohn,Barbara Hohn and Ingo Potrykus
Friedrich Miescher-研究所,邮政信箱2543，CH4002巴塞尔、瑞士
EMBO杂志第3卷第12期2717 - 2722,2722, 1984
提出了直接、基因介导的烟草烟叶Nicotiana tabacum植物细胞稳定遗传转化的证据。在花椰菜花叶病毒基因VI表达信号的控制下，将Tn5氨基糖苷类磷酸转移酶II基因的蛋白质编码区组成的选择表杂交基因引入植物原生质体中，作为埃希氏菌属质粒的一部分。该基因可稳定地整合到植物基因组DNA中，并在选定的、耐药的、原生质体的细胞克隆中表达。外源基因在植物基因组中的整合模式类似于对哺乳动物细胞DNA转染的观察。由转化细胞株再生的植物具有表型正常和生育能力，并在生长发育的器官中维持和表达外来基因。小孢子，生长在花药培养中，发育成耐药和敏感的单倍体植株。对其中一种转化植物的遗传杂交分析显示，在F1代中，卡那霉素耐药在孟德尔式的流行中存在一种显性特征。
关键词:选择标记基因/植物原生质转化/重组DNA /植物组织培养
引言
直接基因转移在细菌、真菌和动物细胞的基因调控和功能研究中起着重要作用。在植物中，唯一可用的遗传转化方法是基于土壤细菌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的迁移能力，并将其遗传物质的一部分整合到基因组DNA中(例如，Bevan和Chilton,1982)。这个复杂的自然转换过程也被用于将功能性外源基因整合到植物基因组(Herrera-Estrella等人,1983 a,1983 b;Bevan等人,1983;Fraley等人,1983;Horsch等人,1984;Murai等人,1983)。此外，将分离Ti质粒直接转化进入原生质体中(Davey等人，1980;Krens等人，1982)证明了外源DNA可以被植物细胞吸收并整合到基因组中，但并没有排除Ti质粒特定功能对这个转化过程至关重要的可能性。这里我们给出了的证明农杆菌独立的直接基因转移到植物中，并用孟德尔模式把外来基因传给有性生殖的后代。
结果与讨论
可选择杂交基因的构造和性质
部分细菌转座子Tn5编码的氨基糖苷磷酸转移酶II[(APH3 ')II]基因(Rothstein 和Reznikoff,1981)。这种蛋白质编码的氨基糖苷类抗生素(新霉素、卡那霉素、G-418)被磷酸化，从而使细菌对其产生抗性(Rao和Rogers,1979)，真菌(Hirth等人,1982年)，哺乳动物细胞(Colbere-Garapin等人，1981)和植物细胞(Herrera - Estrella等人，1983a,1983b;Bevan等人,1983;Fraley等人,1983)。为了获得高真核细胞中APH(3 ')II基因的表达，必须提供相应的表达信号。我们已经构建了一个功能混合标记基因的蛋白质编码序列的APH(3)II基因的控制下花椰菜花叶病毒(CaMV)VI基因表达的信号,因为这个基因表达在植物细胞在病毒感染在非常高的水平(熊等人,1982)。基因VI mRNA编码区域的侧翼序列是典型的真核启动子和终止信号(Hohn等人,1982)。
我们构建了一对质粒:pABDI与APH(3 ')II基因对基因VI启动子区和多聚腺苷酸化位点的正确方向;而pABDII具有相反的方向(图1)。图1的图例描述了构造的细节。由混合基因(pABDI)预测的蛋白产品将APH(3 ')二氨基末端融合蛋白，23个氨基酸残基比原来APH(3 ')长。对APH(3 ')II基因产物的修饰(Beck等人，1982)表明，这种融合可能对磷酸化活性影响不大。我们已经证明了这种特殊的杂交基因的生物活性及其在选择中的应用，通过整合到T-DNA中和标准的跟农杆菌联合培养处理，将其引入到烟草细胞中。(Paszkowski等人，在准备阶段)。因此，该系统似乎适合通过分离原生质体的转化，直接基因转移到植物基因组中。

原生质体的转化和卡那霉素耐药细胞系的筛选
烟草tabacum c.v. Petit Havana clone SRI(Maliga等人，1973)原生体被选为基因转移的受体系统，因为(i)它们是全能的;(二)镀效率高，重现性好;而且(iii)它们有良好的生存能力，有利于DNA的吸收。用杂交质粒pABDI和pABDII处理新分离的叶肉原生质体，采用Krens等人(1982)改良的DNA吸收过程。在三个独立实验中，我们从涉及pABDI(TableI)的处理中恢复了耐药克隆。在所有涉及> 10^8原生质体(包括实验验证选择过程)的控制治疗中，没有发现耐药性菌落。一种新的培养体系(Shillito等人，1983)基于琼脂糖珠的使用，证明其明显优于其他经过测试的选择制度(即:液体培养基、琼脂固化培养物)(图2a)。

将材料输送到活的细胞和组织中的方法及其装置
METHOD FOR TRANSPORTING SUBSTANCES INTO LIVING CELLS AND TISSUES AND APPARATUS THEREFOR
发明者:John C. Sanford，日内瓦;Edward D.Wolf,伊萨卡岛;Nelson K. Allen,Newfield, all of NY。
[73]受让人:康奈尔研究基金会,Inc .,伊萨卡,纽约
[]注意:本专利的部分在2007年7月31日之后被取消。
[21]应用编号：394899
[22]归档:1989年8月17日

摘要
惰性或生物活性粒子在细胞中以一种速度加速或推进，这样粒子就能穿透细胞表面，并融入到细胞内部。该过程可用于标记细胞或组织，或生物化学影响组织或原位的组织，以及体外的单个细胞。还公开了加速或推动粒子朝向靶细胞或组织的装置。还公开了一种附着在转子装置上的粒子的释放方法。
图1展示了利用加速粒子将生物物质引入细胞的四种方法。
在图1a中，一个惰性微球被一种生物物质包裹，加速，穿透目标细胞后，微球从其表面释放物质。
在图1b中，目标细胞被一种生物物质包围，并被一个未涂层的惰性微球轰击，它将生物物质带入细胞中。
在图1c中，一种干燥的细菌被用来作为抛射体，在其内部携带DNA，在穿透和细菌裂解后被释放到靶细胞中。
在图1d中，噬菌体颗粒被用作抛射体，其内部的DNA在穿透和噬菌体涂层破裂后被释放到目标细胞中。
图1：

玉米在食品、饲料和工业用途的意义
Corn: its importance in food, feed, and industrial uses
作者 FR Senti ， WC Schaefe
出版源 《Cereal Science Today》 , 1972 , 68 (4)

玉米(Zea mays Linnaeus)通常被认为是西半球的土著，在那里它成为了世界上早期文明的主要食物。新大陆的第一批欧洲定居者继续种植玉米。它成为他们主要的主食，为他们的成功定居作出了重大贡献。与此同时，新大陆的欧洲探险者带着玉米回到了旧世界，在那里它迅速传遍欧洲，从那里传到亚洲和非洲。因此，玉米由于其大粒径、良好的产量、易于种植、多功能性和贮存特性等特点，在世界上许多地方被迅速接受为主食。在美国，玉米从一种不可缺少的主食谷物变成了主要的动物饲料谷物。它在每5英亩的美国农田里生长。表一表明,玉米在美国其他主要谷物的种植面积、亩产量、产量和农场价值上占主导地位（1）。在表二中,在世界范围内，玉米产量与其他主要谷物产量相比(2)。本文综述了美国和世界粮食、饲料和工业用玉米的利用情况。


玉米的食品用途
美国的玉米消费趋势如图1(1)所示。从1955年到1970年的15年期间，在使用多年后，玉米的粮食消费量平均每年增长3.5%。1970年的食品消费量为2.19亿蒲式耳。这相当于当年玉米产量的5%。

玉米进入美国饮食形式的产品来自干磨和湿磨产业玉米。玉米干磨的主要产品是玉米渣、粉和面粉。这些产品的主要食品用途如图2所示。这些产品的人均消费从1961年的10.5磅下降到现在的11.6磅。在过去的20年里，谷类早餐的人均消耗量增加了50%。现在是每年2.3磅

玉米湿磨工业提供淀粉、糖浆和葡萄糖，供食品使用。淀粉在食品中至少有九种不同的改性用途，如图3(4)所示。在过去的30年里，食品中淀粉的人均消耗量一直保持稳定在1.8磅。

相比之下，近年来玉米糖浆和葡萄糖的使用量稳步增长。年人均消耗量为16磅糖浆和4.9磅葡萄糖(3)。玉米甜味剂的使用量增加一直是近年来美国玉米食物利用总体增长的主要因素。玉米甜味剂在美国传统上比蔗糖有价格优势;在过去20年里，随着蔗糖价格的上涨和糖浆价格的下降，玉米糖浆的优势显著增加。玉米糖浆的最大用户是糖果工业，它是生产优质硬糖的基本原料。在某些糖果使用中，葡萄糖甜度较蔗糖低。然而，如果需要更大的甜度，含有果糖的玉米糖浆是用葡萄糖异构酶来生产的。
玉米油是从玉米胚芽中提取出来的，它是湿法和干法制粉工业的副产品。大约85%的美国玉米油来自湿磨坊;其余的，来自干磨坊(5).每年生产近5亿磅。大约一半的油用于烹饪和色拉油。在过去的15年里，越来越多的人意识到多不饱和脂肪酸在饮食中的重要性，这导致了对人造奶油玉米油的使用急剧增加。少量的玉米油被用来起酥油。总的来说，对玉米油的需求变得如此之大，以至于美国一家主要的加工企业都在承包农民种植高油玉米，以获得更高的价格。
图4(6)总结了全球玉米的消费情况，世界上一半的玉米是在亚洲大陆消费的，中国大陆占消费总量的近三分之一。非洲的消费占世界近四分之一。

玉米在世界不同地域的饮食中的相对重要性见表三，这是对玉米食品人均消费量的总结。中美洲和南非在人均消费方面远远领先于世界其他地区。在中美洲，玉米很可能是作为一种主食而产生的，而用碱处理过的玉米制成的面粉被用来制作玉米粉圆饼、玉米卷饼和墨西哥玉米卷等食品。玉米也以无酵饼或馅饼的形式被食用，叫做arepas，和****les。肯尼亚的基库尤人以一种叫做pasha的面团状粥的形式食用玉米，和chenga，一种类似于煮熟的大米的产品。在南非共和国，玉米被用来生产发酵玉米粥，一种非酒精的，酸性饮料以及一种传统的酒精饮料——班图啤酒(Bantu beer)，通常是在积极发酵的状态下饮用。(7)。
在以玉米为主食的国家，蛋白质缺乏的问题就会出现，因为现在的玉米品种中蛋白质含量不高，而氨基酸赖氨酸和色氨酸则缺乏蛋白质。在过去，这一缺陷只能通过包括豆类和动物产品等富含蛋白质的食物来克服。现在可以“设计”食品以满足特定的需求。例如，混合食品CSM是一种由玉米粉，大豆粉、脱脂奶粉、维生素、矿物质以速溶的形式混合而成的混合食品，由USA在世界各地的食品援助项目中定期制作并分发。两种商业蛋白质强化玉米食品是南非的ProNutro和哥伦比亚的Incaparina。
另一种解决蛋白质缺乏问题的方法是通过开发新品种来改善籽粒中的蛋白质。在1969年，第一个用opaque-2玉米制成的商业食品产品在哥伦比亚上市(8)。该产品和以及一些蛋白质强化的玉米产品，现在都有相当于牛奶蛋白的相等的蛋白质，具有营养价值。如果开发出含有15%或更多蛋白质的opaque- 2玉米菌株，这些菌株将有资格成为儿童的完整食物(8)。
玉米的饲料利用
在美国作为玉米的最大市场，家畜饲料在近年来平均消耗了国内消费的93%。玉米作为饲料谷物有很多优势。其消化率较高;在营养均衡的混合饲料中，它是动物的美味。它是一种经济的饲料成分，因为每英亩的产量很高。图5显示了喂给不同种类的家畜的玉米(10)所占的比例。
图6显示了谷物生产与红肉产量之间的关系，即牛肉、小牛肉、羔羊肉、羊肉和猪肉（1）。这张图表显示，在过去的35年里，玉米生产的趋势与肉类生产的稳步增长是一致的。

玉米作为饲料谷物的地位在世界各地差别很大。表四显示了玉米主要用于动物饲料的国家(6)，中美洲和南部非洲的玉米饲料消费量因国家而异，在巴拿马的玉米总消费量中最多占43%。亚洲和非洲的饲料消费量普遍较低。从本质上讲，亚洲15个国家的动物都不吃玉米，占亚洲人口的22%，非洲的18个国家也没有，占非洲大陆人口的19%(6)。
玉米的工业用途
在美国玉米淀粉来自于湿磨工业，而玉米粉则来自于干磨行业。尽管玉米的同类出口仅占全年作物产量的2%左右，但由于它们对市场价格的影响，即使是很小的边际产量也很重要。
工业用途的淀粉消费量稳步增长。工业上使用的淀粉大部分用于造纸和纺织工业。图7显示了这些工业中玉米淀粉的平均年使用量和5年期间的工业总使用量，以及1969年的估计数(12)。1969年的估计总量为24亿7000万磅(112万公吨)，其中16亿磅用于造纸和纸制品，3.5亿磅用于纺织工业，5.2亿磅用于其他工业用途。纺织业的份额在下降，而造纸工业的份额在第二次世界大战后有所增加。其他工业用途包括粘合剂、建筑材料、铸造粘合剂、洗衣淀粉、炸药、油井泥浆和其他采矿应用。淀粉被用作稀煮、改性、预糊化淀粉的形式，以及糊精、玉米糖浆和葡萄糖的形式。

在工业上使用的干磨玉米产品的数量很少。近年来，它们的利用率至少和淀粉的增长速度一样快。对某些工业应用的玉米粉和面粉的目前使用情况的估计是表五。
玉米淀粉和面粉的工业应用是基于功能特性，如粘度、成膜、粘附性能和悬浮颗粒的能力。工业应用的增长部分是由于化学家通过改变其粒状组织或其分子大小和结构或制备化学衍生物来适应特定的工业需求。最近的商业产品有羟乙基淀粉、阳离子淀粉、二醛淀粉、淀粉醋酸酯、氰乙基淀粉、羧甲基淀粉和淀粉磷酸盐和硫酸盐。
美国农业部正在开发淀粉黄原酸酯及其相关产品，作为橡胶(13)的增强剂，以及用于制备可塑化或挤压成型的粉末塑料(14)。该部门还在开发由将有机单体嫁接到淀粉骨干形成淀粉接枝共聚物(15-19)。共聚物可以在各种各样的结构中制备，具有满足特定工业需求的特性。淀粉也通过基因改造被用于工业用途，其结果是直链淀粉含量高的淀粉被商业化生产。
葡萄糖是多种工业产品的原料，由化学合成和发酵转化而成。一种叫做黄原胶的水溶性多糖，目前正通过葡萄糖发酵生产。“口香糖的特性是这样的，它正在进入新的使用领域，而不是1969年的淀粉本身”
玉米在欧洲、亚洲和西半球的25个国家用于工业用途。图8显示，美国占了总数的65%;17个欧洲国家使用29%;剩下的6%由亚洲、中美洲和南美洲的7个国家消费。图9显示了玉米的全球消费量，除了用于种子和损失的**(6)。这张图显示，虽然玉米最初被用作主食，但现在主要用于动物饲料。这种用途广泛的谷物对人类食物仍然很重要，它的工业用途正在迅速发展，因为科学家们正在寻找新的方法来适应这种低成本、现成的原材料来满足特定的需求。

续上：

巴西食品工业中的木薯淀粉
Cassava starch in the Brazilian food industry
作者：Ivo Mottin DEMIATE1*, Valesca KOTOVICZ2
表1：

淀粉甜味剂的生产、性质和用途
Sweeteners fromStarch: Production,Properties and Uses
作者：Larry Hobbs
1811年，俄罗斯化学家G.S.C. Kirchoff发现酸催化淀粉水解产生了甜味物质。到1831年，一个美国糖浆厂，能够利用这种新技术每天生产30加仑（115升）的糖浆;150年后，140个美国工厂用玉米、小麦、马铃薯和大米生产淀粉。
图21.1提供了该行业自1910年以来发展的生动表现。使用玉米的美国玉米炼油业增加到14亿蒲式耳(39 x10 ^ 6吨,36 x 10 ^ 9公斤)在1999年,大约占总收成的15%。从这一生产中得到了330亿磅(15 X 10 ^ 9公斤)的甜味剂,超过是这本书最后一期出版的1984年2.5倍。
为了讨论行业中发生的变化及其驱动力，首先需要定义所涵盖的甜味剂的类型。

2。定义
葡萄糖当量(DE)是在干重基础上以D-葡萄糖计算的总还原糖的一种测量方法。采用的方法是测定硫酸铜溶液的还原滴定法。未水解淀粉的DE值为0，无水D-葡萄糖的DE值为100。葡萄糖/玉米糖浆的范围从20到95 DE。
麦芽糖糊精是可食用淀粉制成的糖的干燥产物或纯化的水溶液，其葡萄糖当量小于20。在美国之外，这些产品可能被称为糊精;只有美国官方定义了麦芽糊精。
葡萄糖糖浆，也就是美国的玉米糖浆，是纯化的水溶液，从食用淀粉中得到的营养糖，其葡萄糖当量为20或更多。
干玉米糖浆或玉米糖浆固体是葡萄糖/玉米糖浆，大部分水都被去除了。
高果糖糖浆是由可食用淀粉获得的营养糖的纯化水溶液，其中葡萄糖(d -葡萄糖)的部分(至少42%)被异构化为果糖。
结晶果糖是含不少于98.0%果糖和不超过0.5%葡萄糖的结晶产品。
葡萄糖一水合物是一种纯化的葡萄糖，结晶葡萄糖含有一分子结晶水的葡萄糖分子。
无水葡萄糖纯化，结晶葡萄糖无结晶水。
波美Baume(Be)的单位是由一个任意的流体测量系统来决定的，以确定一个解决方案的具体重力。在玉米精炼工业中，Baume通过以下方程与比重相关:

数值145的模量是由比重计和水压计阀杆的单位比例尺长度所取代的容积所取代的总体积比。玉米糖浆是市售的波美度值为42、43和44。
聚合度(DP)是寡糖或多糖中的葡萄糖(糖)单位的数量。DP1是单糖，DP2是指双糖等。
折射率(RI)是一种测量光的折射的量度，因为它们从一个溶液间接地传递到另一个不同密度的溶液中。折射率通常用来测量固体的甜味剂含量。甜味剂的折射率是碳水化合物剖面、灰分、固体水平和溶液温度的函数。
退变是在它们的原生状态或在糊精或低的水解产物中溶解的淀粉聚合物的重新组合，导致不溶性沉淀。糊精是一种解聚淀粉，它是用稀释的盐酸加热淀粉，或在气态氯化氢的作用下加热潮湿的淀粉，直到形成一种冷水溶性的产物。
还原反应是还原糖形成二级和高级低聚糖的缩合反应。