笔者：采集福建省部分地区农户自制的12种腌菜, 并分离出26 株乳酸菌, 并通过乳酸菌的计数、分离纯化、革兰氏染色、过氧化氢酶实验、API 50CHL 试剂鉴定、电镜检验和DNA 测序方法记录乳酸菌的种类和多样性。结果 腌菜中分离、鉴定出3株乳杆菌种, 分别为FJAT-46739 Lactobacillus.brevis(短乳杆菌)、FJAT-46744Lactobacillus.fermentum(发酵乳杆菌)、FJAT-7926 Lactobacillus.plantarum(植物乳杆菌)。为益生菌的研究和发展提供了潜在的优良菌株和数据支撑。
1 腌菜样品中乳酸菌的菌落计数和形态特征
每种腌菜样品中含有的乳酸菌菌落总数及乳酸菌株数见表1。其中腌菜梗(豆豉红菜梗)、腌红心萝卜和腌大头菜(芥菜头)所含的乳酸菌数较高, 在3×104~4×104 CFU/g，且每种的腌菜样品所分离出的乳酸菌菌株数不一致。从采集不同地区腌菜中分离出乳酸菌26 株，除了两个样品分离出1株外其余分离出2株以上菌种。研究表明：此次采集的腌菜优势菌群为杆菌。26种菌株均为革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，圆形，菌落边缘光滑，湿润，乳白或乳黄色，有些有凸起，有些无凸起，符合乳酸菌特性。
2.API 试剂鉴定乳酸菌及电镜扫描结果
26种菌株挑选分项再次纯化处理，处理后的每个菌株分别做API 50CHL碳水化合物生理生化检测鉴定，鉴定出的菌株分别标签为FJAT-46739 Lactobacillus.
brevis(短乳杆菌)；FJAT-46744 Lactobacillus.fermentum(发酵乳杆菌); FJAT-7926 Lactobacillus.plantarum(植物乳杆菌)。电镜扫描如图1所示。表3如下：
3. 细菌DNA 提取、PCR 扩增和16S rDNA 序列
数据分析测序结果通过Ezbiocloud上进行同源性序列比对。图2为构建的系统发育树。由系统发育树可知，这些菌株确定属于乳酸菌属(Lactobacillus)。通过基因序列同源性比对，这些菌株最终鉴定为株菌FJAT-46739、FJAT-46744 和FJAT-7926, 分别为Lactobacillus.brevis(短乳杆菌)，Lactobacillus.fermentum( 发酵乳杆菌)和Lactobacillus. plantarum(植物乳杆菌)。与API 50CHL鉴定结果一致。
4. 结论与讨论
本研究采集福建部分地区、不同种类的12种腌菜，从形态特征、生理生化反应等表型特征鉴定细菌为乳酸菌，对其中的乳酸菌进行计数等相应的实验。从腌菜中分离出26株乳酸菌通过革兰氏染色和过氧化氢酶反应实验，鉴定全部为杆菌形态。
的最终确定还使用16s rDNA分子生物学技术对其基因型特征进行鉴定，得出FJAT-46739、FJAT-46744和FJAT-7926菌株，分别为Lactobacillus.brevis
( 短乳杆菌)、Lactobacillus.fermentum( 发酵乳杆菌) 和Lactobacillus.plantarum(植物乳杆菌)。为益生菌的研究和发展提供了潜在的优良菌株和数据支撑。
参考文献
[1]邓元源等. 福建省腌菜中乳酸菌的分离与鉴定[J]. 食品安全质量检测学报,2018,9(3):481-490.
[2] Senthong R, Chanthachum S, Sumpavapol P.Screening and identification of probiotic lactic acid bacteria isolated from Poo-Khem, a traditional salted crab[J].Int Proc Chem Biol Environ, 2012, 39(5):111-115.
