实验步骤
1、细胞种板:将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化,配制成细胞悬液,每孔加入100 μl,使每孔细胞密度1000-5000个,边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2,37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。
2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。
3、处理结束后,每个孔中分别加入10 μl CCK-8溶液,轻轻敲击培养板混匀,培养箱中孵育1-4小时。
4、使用酶标仪测定450nm光吸收值,按公式计算药物对细胞的抑制率。
注意事项
(1)如果暂时不测定OD值,可向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1%SDS(w/v)溶液,室温避光保存,在24h内测定, 吸光值不会发生变化。
(2)如果待测物质有氧化性或者还原性,可在加CCK-8之前除去旧培养液,并用培养基洗涤两次,然后加入新鲜培养基,以去除影响。
结果分析
实验组:实验组细胞和CCK-8溶液的吸光度值
阴性对照:对照细胞和CCK-8溶液的吸光度值
空白对照:培养基和CCK-8溶液的吸光度值
增殖率(细胞活力)= (实验组-空白对照)/(阴性对照-空白对照)×100%
抑制率(细胞毒性)= 1-(实验组- 空白对照)/(阴性对照-空白对照)×100%
1、细胞种板:将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化,配制成细胞悬液,每孔加入100 μl,使每孔细胞密度1000-5000个,边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2,37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。
2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。
3、处理结束后,每个孔中分别加入10 μl CCK-8溶液,轻轻敲击培养板混匀,培养箱中孵育1-4小时。
4、使用酶标仪测定450nm光吸收值,按公式计算药物对细胞的抑制率。
注意事项
(1)如果暂时不测定OD值,可向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1%SDS(w/v)溶液,室温避光保存,在24h内测定, 吸光值不会发生变化。
(2)如果待测物质有氧化性或者还原性,可在加CCK-8之前除去旧培养液,并用培养基洗涤两次,然后加入新鲜培养基,以去除影响。
结果分析
实验组:实验组细胞和CCK-8溶液的吸光度值
阴性对照:对照细胞和CCK-8溶液的吸光度值
空白对照:培养基和CCK-8溶液的吸光度值
增殖率(细胞活力)= (实验组-空白对照)/(阴性对照-空白对照)×100%
抑制率(细胞毒性)= 1-(实验组- 空白对照)/(阴性对照-空白对照)×100%