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唾液DNA提取

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求教:如何在唾液中抽提细菌DNA?有具体的操作方法步骤吗?感谢


IP属地:浙江1楼2019-03-18 17:01回复
    可以使用kit提取的,有用过BIOG效果还是挺好的,分享如下:1. 请自行准备:无水乙醇、离心管。2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇。b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。3. 取300μL唾液至离心管中,加入4μLDNA Carrier混合均匀,加入200μL 裂解液及20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。4. 加入1000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液;6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 min,离去残留的洗涤液。10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-60 μL 洗脱液,静置3 min,12,000 rpm 4℃ 离心2 min,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。


    2楼2019-03-19 11:21
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