1.培养基灌装测试的前提条件


1.1管理方面


·检验室得以验证，包括检验室环境、仪器设备及人员操作。生产线上所有的样品最终都会送至检验室检验进行结果判定，如果检验室给出的结果有误，就会使得整个验证进度停滞不前走向错误的检查方向。
·制定详细的验证方案、操作要点。一份实施性强的验证计划才能保证所有人、事向既定方向迈进，保证验证的最终结果。配置培养基的数量是否足以灌装足够的瓶数、灌装频率、测试过程中灌装环境的杀菌周期、成品的培养条件及培养方式等均关系到培养基灌装测试的结果。
·提前制定并详细列出有效的、切实可行的可接受标准。
·品控、检验及操作人员通过无菌工艺及无菌验证相关培训灌装。

1.2人员方面


·具有资质合格的无菌检查、分析人员。检验人员的无菌意识及操作技能需要通过考核，并且考虑一定的检验误差（一般要求考虑百分之一）。
·单机操作人员能够熟练操作单机，并能解决生产运行过程中的常见问题。
·相关人员掌握无菌启动程序及步骤。

1.3设备方面
·生产线各单机工况正常。
·生产线运行流畅（吹瓶机、风送道、灌装机联线运行效率达到80%以上）。
·各无菌线单机通过无菌检测及验证实验。
·联线无菌水包测试通过。

2. 培养基的选择


PET瓶饮料无菌灌装工艺验证选择LG培养基（LindenGrain Medium），因为它可以给潜在的污染源，如酵母、霉菌、病毒等各种微生物提供一个敏感、养分充足的温床；PH可调节至与生产线所产饮料的PH一致；它是澄清透明的淡黄色液体很容易目视检查；所有微生物污染均可被发现，因为它反映迅速，变化程度高。使用前，建议在检验室进行模拟测试，以检查培养基的稳定性。

3.培养基的灭菌
LG培养基在线灭菌条件需足够安全以保证其无菌性。一般行业内对中性LG培养基使用的杀菌温度均为135—142℃，时间均不低于30s。

4.培养基的灌封操作


按照既定生产程序获得至少30000瓶培养基。这些瓶子将在30℃或环境温度下储存14天。之后，储存的瓶子将在光源下作视觉检验，以验证微生物影响（混浊、菌丝生长）。灌封过程要求按照既定程序进行，详细记录生产过程，完整进行取样及分析。

任何灌装的产品都应该在培养前进行检查，发现任何不合格品（如容器密封性存在问题或完整性不好）时，都应该被剔除并记录（还包括检查后被损坏的，如向培养箱中转移的过程中出现的）。在下游输送链上倒瓶或掉下输送链的产品也应被剔除。

储存培养用的产品须完整装箱，避免放在框内严重挤压；瓶子须垂直摆放，最多堆放两层；保温室须临近车间。结果检查时，必须由有经验的QC人员负责检查每瓶培养基是否被污染。培养期间定期对灌装培养基进行目检，记下每次检出的污染瓶数及出现污染菌的相应跺板号。培养结束，逐瓶检查有无微生物生长或变浑浊，记录出现污染的瓶数和被检查的总瓶数。检查时将每瓶培养基在明亮光源下仔细目测，透明、澄清、无浑浊的培养基判为无微生物生长；如培养基浑浊或有悬浮的菌丝或菌落，则需作进一步的微生物生长检查，以确定培养基是否正在染菌。

培养基灌装测试指标远远高于饮料生产要求，属于绝对无菌的标准，而饮料生产只需达到商业无菌。培养基灌装合格标准为通常约定的在95%的置信度下中性LG培养基实际污染率不高于万分之一。

5.破损产品的排除
瓶、盖密封不良导致的污染最为普遍，这类培养基不列入污染瓶数。如何排除密封不良导致的污染是培养基灌装测试成功的要素之一。目前普遍使用的是加压法检测（图1所示）及导电法检测（图2所示）。导电法用烧杯配置浓盐水并将样品瓶半腰割开，保留瓶子的上半部分，倒掉里面液体，装入适量（不要过满）盐水，并将其倒置，使瓶口浸没于盐水中；万用表调到欧姆档，将一个表头置于样品瓶的盐水中，另一个置于烧杯的盐水中读数；72h后再测一次；若密封不良，万用表即会测出电阻。由于加压法为破坏性测试，一般先用导电法检测后再用加压法且前者更为灵敏。