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血清跑WB样本处理及实验方法

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现在实验需要检测45KD左右的蛋白分子,想用WB检测,是新手,想请问下血清该如何处理,要煮沸吗?要去除白蛋白吗?另外和组织样本相比,血清样本做WB还需要注意些什么啊?内参这块的话是不是要用到膜再生?请大家帮帮忙!


1楼2022-09-14 23:01回复
    不需要特别的处理,
    将血浆或血清用PBS适当稀释上样即可。另外就是要注意防止蛋白降解
    此外需要了解该蛋白在血浆中的丰度问题,以方便选择适当的上样质量,(最好能在预实验的时候做几个上样量的梯度进行观察)
    还有一个需要注意的问题就是 loading control的选择,由于血浆或血清中很难找到一个稳定表达的蛋白,常见的在组织中比较常用的内参蛋白如肌动蛋白,GAPDH等,严格讲并不适合血浆或血清,故loading control需要认真考虑
    可以考虑用立春红染色 或考染做loading control(这种方法在不少文献中都有报道,是大家认可的)


    IP属地:上海来自Android客户端2楼2022-09-18 13:24
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