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预染蛋白Marker的准确性问题一

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预染蛋白Marker,染料的标记反应和蛋白质的其它标记反应一样,其实际标记效率由于各种各样的因素而波动于一个合理的区间,不是一个确定的常数。在预染蛋白Marker的生产过程中,染料标记效率的波动将直接影响到最终标记产物的分子量大小。因此厂商都有一套优化的条件来实现相对稳定的染料标记效率。即使如此,标记效率的稳定性仍然不可能达到一个稳定的常数,仅能将其控制在一个比较小的波动范围。其结果是,染料标记的蛋白质产物的分子量在不同批次间会存在一定的波动。这就是我们俗称的分子量准不准的问题。由上述原理可知,没有哪家公司的预染蛋白Marker具有绝对的准确性。正如Thermo在其产品说明书中明确写道,预染蛋白Marker仅用作为蛋白质分子量的近似参考,不同批次产品间具有不大于5%的批间差异。
不同的蛋白质(不考虑修饰) ,即使分子量相同,也有可能(比例较小)由于氨基酸组成的不同等因素,而表现出泳动迁移率的差异。实践中,这种看起来似乎不符合电泳原理情况常常会出现,相信做实验比较多的小伙伴可能也曾遇到过。
同一蛋白Marker产品的谱型在不同体系的电泳中,也会出现不同的泳动行为。例如下图。


IP属地:上海1楼2022-11-23 17:05回复