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核酸纯化只测OD值的那你就损失大了

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机器真的可以直接测量核酸的真实纯度和浓度吗?
你还在以为不跑电泳,机器测量od值换算的浓度就一定是真实的核酸浓度吗?你还在以为测量od比值就能知道核酸的全面真实纯度吗?大错特错了,不要再为这个错误概念损失惨重了。

让我们一起来看看这个质粒提取后-琼脂糖凝胶电泳结果分析实验的对比
从结果分析:从抽提的质粒浓度上来看,T公司试剂盒提取的质粒浓度要普遍高于Aidlab的试剂盒。但在质粒跑胶的亮度对比上,两者抽提的质粒跑胶亮度没有较大差距。
所以T公司试剂盒提取的结果检测的OD值实为虚高。
真实情况是分光光度计包括Nanodrop是无法通过测量OD比值来判断核酸的全面纯度的,od260:280比值判断的只是蛋白残留的纯度,od260:230比值判断的只是盐离子的纯度,而核酸里面还有其它各种杂质可能残留,这些杂质,机器是没法测量出来的,但是杂质也有吸光值OD,就会干扰机器的正确检测核酸浓度。
机器测量的是样品的总吸光值,然后换算成浓度,如果样品是100%纯的核酸,机器确实可以把所有的吸光值换算成浓度,这才是真实的浓度。但是如果样品里面有杂质呢?机器测量的总吸光值里面还含有杂质的吸光值,但是机器无法区分,还是会把总吸光值换算成浓度,这个时候测量的浓度还包括了杂质带来的吸光值的浓度,最后导致机器测量的浓度比真实核酸浓度高,OD值实际是虚高了。


IP属地:浙江1楼2024-01-04 17:15回复