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游离氨基酸检测方法

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所谓氨基酸,就是一种含有氨基和羧基的有机化合物。游离氨基酸是什么呢,是没有形成肽的氨基酸。如果氨基酸中的氨基和羧基结合在同一个碳原子上,那么这种氨基酸就称为α-氨基酸。天然的游离氨基酸大多数就是这种α-氨基酸。

既然研究游离氨基酸,那么它到底有什么作用呢?游离氨基酸就是不合群的氨基酸,不能和其他氨基酸形成化学键。在生物体内,游离氨基酸能够促使蛋白质的合成。当机体内需要新的蛋白质的时候,就通过吸收外来的蛋白质,在酶的作用下降解为游离氨基酸,游离氨基酸再通过转运蛋白运输到细胞内,根据需要形成新的蛋白质。除此之外,还能够为细胞提供能量,促进肌肉生长,调节酶的活性。在医学领域,可以增强免疫力。

检测样品中的游离氨基酸含量,可以通过分光光度法、液质联用法等来进行,这里先简单介绍一下分光光度法,如果需要了解LCMS检测,需要有专业的知识和技能,并结合实际情况进行分析。
游离氨基酸的游离氨基能够和水合茚三酮作用,产生蓝紫色的化合物。这个产物的颜色深浅,跟游离氨基酸含量成正比,在分光光度计的570nm波长处可以测定其含量。因此,检测游离氨基酸含量,用这种方法来测定是比较快捷的,但需要注意的是,在检测之前要将样品中的蛋白沉淀剂去除掉,以免影响到测定结果。

在检测中需要用的试剂有:水合茚三酮溶液,乙酸-乙酸钠缓冲液,氨基酸标准溶液,0.1%抗坏血酸(现配现用),10%乙酸。
下面,就要做标准曲线了。取6个试管,1号为空,2-6管依次为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0。用蒸馏水稀释补足2.0,并分别加入3.0水合茚三酮,0.1抗坏血酸。加塞子密封,在沸水中加热15分钟,等拿出来后放到冷水中快速冷却,等试管中的溶液呈现蓝紫色的时候,用60%的乙醇定容至20ml,摇匀后在570nm波长下测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标,以氨基氮ug为横坐标,绘制标准曲线。检测样品中游离氨基酸的吸光度值,可以多次几次求取平均值,然后结合标准曲线,计算出样品中的游离氨基酸含量。
来源:上海优选生物。


IP属地:上海1楼2024-06-13 14:03回复