分子互作蛋白调控目的蛋白IPTKB的分子机制

TRIM25是一种泛素连接酶，是否参与调控ITPKB蛋白稳定性积累呢？
证据1：研究人员发现敲低Trim25，显著增加ITPKB蛋白积累；Trim25过表达则相反抑制其积累（图1a-b）。
证据2：加入蛋白酶体抑制剂MG132后，Trim25过表达诱导的ITPKB水平降低效应被逆转（图1c），表明Trim25通过蛋白酶体途径降低ITPKB的稳定性。
证据3：采用放线菌酮(CHX)追逐实验，发现Trim25敲低增加ITPKB蛋白的半衰期，Trim25过表达则相反（图1d-e）。
证据4：耐药细胞内源Co-IP分析显示Trim25敲低显著降低ITPKB的多泛素化（图1f）。外源Co-IP分析，Trim25过表达增加ITPKB多泛素化（图1g）。
证据5：泛素化修饰类型研究。研究人员分别用Ub-K48、Ub-K63进行Co-IP泛素化分析，表明ITPKB被Ub-K48广泛泛素化（图1h）；用Ub-K48、Ub-K48R进行Co-IP泛素化分析，表明Ub-K48R组的ITPKB多泛素化被消除（图1i）。表明Trim25介导ITPKB的K48链泛素化。
证据6：ITPKB泛素化修饰位点确认。网站预测ITPKB的K793和K818可能是Trim25结合域附近的潜在泛素化位点。构建ITPKB的K793R、K818R和2KR突变体，Co-IP分析单位点突变(K793R或K818R)对多泛素化没有影响，两个位点突变2KR消除ITPKB中K48链的多泛素化（图1j-k）。细胞实验也显示ITPKB野生型(而不是2KR突变型)增加细胞的存活率和ROS的降低（图1l-m）。
这些结果表明：TRIM25通过泛素修饰系统，参与ITPKB的蛋白稳定性调控。
全文分享可查阅：【国刊之光《STTT》：磷酸化与泛素化碰撞！Trim25靶向降解ITPKB 的能力，被磷酸化水平拿捏，从而触发胶质瘤TMZ耐药】。
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