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组胺含量的测定方法

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组胺是一种有机含氮化合物,是组氨酸在脱羧酶的作用下产生的。在皮肤组织,肺和肠粘膜的肥大细胞中就含有大量的组胺,它具有舒张血管的作用。化学式为C5H9N3,广泛的存在动植物体内。当机体受到刺激的时候,就会使细胞膜通透性发生改变,释放出组胺。
检测组胺含量的方法,有比色法,高效液相色谱(HPLC)法,酶联免疫吸附(ELISA)法等。
1.比色法
样品中的组胺,可以用正戊醇和三氯乙酸来提取,当组胺遇到偶氮试剂的时候,显示橙色。通过标准曲线,可以定量测出样品中的组胺含量。偶氮试剂是对硝基苯胺的盐酸溶液,加上亚硝酸钠溶液,现配现用。

2.高效液相色谱(HPLC)法
色谱条件(仅供参考):C18的色谱柱,让人爱不释手。甲醇-乙酸铵为流动相,流速1.0ml/min。紫外检测器,波长为254nm。根据检测的情况,选择是否要衍生化处理。在很多药物研究过程中,对组胺的检测,一般会采用LCMS/MS或UPLC-MS的方法。

使用HPLC测定含量,大多数情况下,采用的方法是外标法,也就是标准曲线。
3.酶联免疫吸附(ELISA)法

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被组胺(HIS)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组胺(HIS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。


IP属地:上海1楼2024-11-15 15:45回复