活体成像技术是在生物体存活状态下，运用影像学手段对生物过程实施组织、细胞及分子层面的定性与定量分析的科学方法。该技术涵盖生物发光（bioluminescence）、荧光（fluorescence）、同位素成像(isotopes imaging)以及X光成像(X-ray imaging)等多种方式。具体而言，生物发光利用荧光素酶基因对细胞进行标记；荧光技术则通过荧光报告基团所表达的荧光蛋白，如GFP、EGFP、RFP、YFP，以及荧光染料等进行标记，随后借助专业仪器进行检测分析。
02标记原理
①实验目标：旨在观测小鼠体内特定荧光标记物的分布情况、表达强度及其动态变化趋势。
②实验材料与设备：采用转基因荧光小鼠（其体内目标蛋白与荧光蛋白已融合表达）或经荧光探针注射的野生型小鼠作为实验对象。利用小动物活体荧光成像系统等先进荧光成像设备进行观测。同时，准备吸入麻醉剂（如异氟醚或等效麻醉药物）以确保实验过程中小鼠的稳定状态，以及4.70%乙醇或氯己定用于实验前的消毒处理。
03实验操作流程
①动物预处理：依据实验设计，采用尾静脉注射、皮下或原位移植等手段，将已标记的细胞或组织接种至小鼠体内。建模时需细致考量实验目标与荧光标记特性，例如，短波长荧光标记穿透力有限，故不适用于深部脏器接种及体内转移观察，但适宜于皮下肿瘤监测及解剖后脏器直接成像；而深部脏器与体内转移研究则倾向于采用荧光素酶标记。
②荧光标记应用或转基因小鼠筛选：• 若采用转基因小鼠，直接挑选表达目标荧光蛋白的个体。• 若选用野生型小鼠，则依据实验需求，选定适宜的荧光标记物，并遵循厂家指南或既有文献推荐的剂量进行注射。
③小鼠麻醉：• 利用吸入麻醉剂（例如异氟醚）使小鼠达到充分麻醉状态，保证成像过程中小鼠的稳定。
④成像参数配置：• 根据荧光标记物的光学属性及成像系统要求，精确设置激发波长、发射波长、曝光时间等成像参数。
⑤实施成像：• 将麻醉后的小鼠安置于荧光成像装置内，调整其体位以优化荧光信号捕获。• 启动成像，记录并分析荧光信号在小鼠体内的分布与强度。
⑥数据解析：• 运用成像系统内置软件或专业图像处理工具，对获取的荧光图像进行深度分析。• 可量化荧光信号的强度、覆盖面积及分布模式，并进一步进行统计学处理。