细胞转染（Transfection），是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。目前常用的转染方式是脂质体转染法。
原理
脂质体作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。
293T细胞转染实验步骤
1、细胞培养
以293T细胞转染前一天（20-24小时）~0.4×10E6个细胞（具体细胞数取决于细胞大小和细胞生长速度），接种到六孔板中，使其达到70-90%次日转染时汇合。
2、在接下来的转染步骤之前更换新鲜的细胞培养基
培养基的体积约为2ml。
3、轻轻混合Lip脂质体转染试剂
4、取无菌离心管，在250μl DMEM 溶液中加入4μg质粒，用移液器轻轻混匀
这里需要注意两点：
a. 抗生素、谷氨酰胺等对 LipoGene 转染或Lipofectamine没有影响。如果 Lip转染试剂表现出对靶细胞毒性作用 ，建议从转染系统中去除抗生素。
b. 如果有必要，DMEM可以更换为其他培养基，如1640、MEM、F12等，这对Lip转染试剂的转染效率没有影响。质粒的量可在0.1μg～4μg范围内适当调整，Lip的量通常为4～8μl（质粒体积/LipoGene体积=1:1～1:2）。由于细胞类型、培养条件、转染参数等会极大地影响转染效率，因此需要在推荐范围内优化质粒体积/Lip转染试剂体积。对于其他培养板或培养容器，各试剂用量可参照转染试剂相关说明表进行换算。
5、取另一个无菌离心管，在250μl DMEM 溶液中加入6μl LipoGene，用移液管轻轻混匀，室温孵育5分钟
6、用移液管将步骤 4 中的 DNA 溶液与步骤5中的 LipoGene 溶液轻轻混合。这个过程中需要注意不要涡旋或离心
7、在室温下孵育 LipoGene-DNA 混合物20分钟
可能会出现絮状沉淀，属于正常现象，不会影响转染效率。
8、将 500 μl LipoGene-DNA 混合物加入六孔板的一个孔中，无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，然后轻轻摇晃并混合成“8”字形
注意：对于贴壁细胞，如上所述，只需将 LipoGene-DNA 复合物添加到细胞中并孵育 6 小时，然后再更换溶液。如果转染悬浮或半悬浮细胞，建议使用平角离心法，在细胞培养皿中加入适量的 LipoGene-DNA复合物后（步骤8），密封密封膜，放入平角离心机，低速 (200 g) 离心1.5小时，然后放入培养箱中6小时，然后更换培养基。
9、培养6-12小时后，用完全培养基更换培养基，继续培养
注意：当与细胞一起孵育 6 小时时，Lip试剂转染后的混合物通常足以产生高转染效率。大多数细胞与 LipGene型转染试剂一起培养长达 72 小时，没有明显的细胞毒性。但是，转染后6小时更换新鲜培养基可以提高一些生长较快的细胞的转染效率。对于一些容易转染的细胞，如HEK-293T细胞，是否更换转染液主要 取决于细胞的生长状态，细胞生长快转染效率就高。
10、细胞转染后的操作
1）基因表达，24-40小时后可检测转染效率。可以用荧光显微镜观察 GFP 或其他荧光基因的表达。
2）构建稳定细胞株，转染后24小时可加入合适的筛选药物如G418或嘌呤霉素筛选稳定细胞株。
原理
脂质体作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。
293T细胞转染实验步骤
1、细胞培养
以293T细胞转染前一天（20-24小时）~0.4×10E6个细胞（具体细胞数取决于细胞大小和细胞生长速度），接种到六孔板中，使其达到70-90%次日转染时汇合。
2、在接下来的转染步骤之前更换新鲜的细胞培养基
培养基的体积约为2ml。
3、轻轻混合Lip脂质体转染试剂
4、取无菌离心管，在250μl DMEM 溶液中加入4μg质粒，用移液器轻轻混匀
这里需要注意两点：
a. 抗生素、谷氨酰胺等对 LipoGene 转染或Lipofectamine没有影响。如果 Lip转染试剂表现出对靶细胞毒性作用 ，建议从转染系统中去除抗生素。
b. 如果有必要，DMEM可以更换为其他培养基，如1640、MEM、F12等，这对Lip转染试剂的转染效率没有影响。质粒的量可在0.1μg～4μg范围内适当调整，Lip的量通常为4～8μl（质粒体积/LipoGene体积=1:1～1:2）。由于细胞类型、培养条件、转染参数等会极大地影响转染效率，因此需要在推荐范围内优化质粒体积/Lip转染试剂体积。对于其他培养板或培养容器，各试剂用量可参照转染试剂相关说明表进行换算。
5、取另一个无菌离心管，在250μl DMEM 溶液中加入6μl LipoGene，用移液管轻轻混匀，室温孵育5分钟
6、用移液管将步骤 4 中的 DNA 溶液与步骤5中的 LipoGene 溶液轻轻混合。这个过程中需要注意不要涡旋或离心
7、在室温下孵育 LipoGene-DNA 混合物20分钟
可能会出现絮状沉淀，属于正常现象，不会影响转染效率。
8、将 500 μl LipoGene-DNA 混合物加入六孔板的一个孔中，无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，然后轻轻摇晃并混合成“8”字形
注意：对于贴壁细胞，如上所述，只需将 LipoGene-DNA 复合物添加到细胞中并孵育 6 小时，然后再更换溶液。如果转染悬浮或半悬浮细胞，建议使用平角离心法，在细胞培养皿中加入适量的 LipoGene-DNA复合物后（步骤8），密封密封膜，放入平角离心机，低速 (200 g) 离心1.5小时，然后放入培养箱中6小时，然后更换培养基。
9、培养6-12小时后，用完全培养基更换培养基，继续培养
注意：当与细胞一起孵育 6 小时时，Lip试剂转染后的混合物通常足以产生高转染效率。大多数细胞与 LipGene型转染试剂一起培养长达 72 小时，没有明显的细胞毒性。但是，转染后6小时更换新鲜培养基可以提高一些生长较快的细胞的转染效率。对于一些容易转染的细胞，如HEK-293T细胞，是否更换转染液主要 取决于细胞的生长状态，细胞生长快转染效率就高。
10、细胞转染后的操作
1）基因表达，24-40小时后可检测转染效率。可以用荧光显微镜观察 GFP 或其他荧光基因的表达。
2）构建稳定细胞株，转染后24小时可加入合适的筛选药物如G418或嘌呤霉素筛选稳定细胞株。
