牛磺酸又称β-氨基乙磺酸，最早由牛黄中分离出来，故得名。牛磺酸是一种含硫的非蛋白氨基酸，在动物体内以游离状态存在，不参与体内蛋白的生物合成，但与胱氨酸、半胱氨酸的代谢密切相关。（饲料液相色谱仪哪家好？中仪盟一站式供应链平台）
目前牛磺酸的测定方法主要有中和滴定法、离子色谱法、分光光度法、电位滴定法、高效液相色谱法、薄层色谱法、液相色谱串联质谱法、氨基酸自动分析仪法等。其中分光光度法是传统方法，操作复杂，所需试剂较多，结果有偏差故而不能广泛应用，氨基酸自动分析仪法对仪器和人员的要求较高，在一定程度上增加了检测的成本。本方法在大量实验基础上优化了牛磺酸的高效液相色谱法测定条件，以期为基层检测机构及饲料生产企业的检验人员提供参考。
◆材料与方法◆
1.实验材料
高效液相色谱仪，配紫外检测器；分析天平；电热恒温干燥箱；超声波；离心机；混匀器。
牛磺酸标准品(纯度≥99%)；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)、醋酸钠(优级纯)、碳酸氢钠(分析纯)、磷酸二氢钠(分析纯)、N，N-二甲基甲酰胺(分析纯)、亚铁氰化钾(分析纯)、乙酸锌(分析纯)；2，4-二硝基氟苯(DNFB)；实验用水为蒸馏水、高纯水。
2.实验方法
（1）溶液的配制
亚铁氰化钾溶液： 150g/L；乙酸锌溶液：30g/L；磷酸盐缓冲液(pH=7)：称取磷酸二氢钠3.4g于500 mL容量瓶中，加入0.1 moL/L氢氧化钠145.5mL，用水定容；醋酸钠缓冲液(0.05moL/L)：称取3.4 g醋酸钠，加入800 mL超纯水，10mLN，N-二甲基甲酰胺，用20 %冰醋酸调pH至6.4，经0.45μm滤膜过滤，即得。
（2）标准溶液的配制
牛磺酸标准贮备液(1mg/mL)：准确称取100 mg牛磺酸标准品于100 mL棕色容量瓶中，用水溶解定容，摇匀配制成标准贮备液，4℃密封避光保存，有效期6个月。牛磺酸标准使用液：分别移取一定体积的牛磺酸标准贮备液于100 mL棕色容量瓶中，用水定容，配制成2.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0μg/mL系列标准工作溶液，现用现配。（饲料液相色谱仪哪家好？中仪盟一站式供应链平台）
（3）样品前处理
△样品溶液的制备。精密称取样品适量(精确到0.0001 g)，置于100 mL容量瓶中，加70 mL水，超声提取20分钟，放冷，加1mL亚铁氰化钾溶液，混匀，再加入1mL乙酸锌溶液，混匀，用水定容至刻度，摇匀，取上清液以4000 r/min离心10min，备用。
△衍生反应。精密吸取标准溶液和样品溶液各10μL于杜氏小管中，抽干，依次加入0.5 moL/L碳酸氢钠溶液20μL、1% 2，4-二硝基氟苯(DNFB)乙腈溶液20μL，混匀，置于60 ℃电热恒温干燥箱中避光衍生35min，取出，稍冷，加入磷酸盐缓冲液(pH=7)160 μL，混匀，用微孔滤膜过滤，取10 μL进样。
△色谱条件。色谱柱：C18 柱，长250 mm，内径4.5mm，粒径5μm；流动相：酷酸钠缓冲液：乙腈(85：15， V：V)；流速：1.0 mL/min；检测波长：360nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
△计算公式：X=c✖V/m
式中：X-样品中牛磺酸的含量，mg/kg；
c一由标准曲线得出的试样溶液中牛磺酸的质量浓度， μg/mL；
V一试样定容体积，mL；
m一试样质量，g。
◆结果与分析◆
1.前处理条件的优化
（1）衍生试剂的选择。本研究在选择衍生试剂时，比较了2，4-二硝基氟苯(DNFB)、丹磺酰氯、邻苯二甲醛等几种衍生试剂的特点，其中邻苯二甲醛是测定游离氨基酸最常用的一种衍生化试剂，其灵敏度高，但是存在衍生物不稳定、衍生化时间要求苛刻等缺陷。在考虑到实验误差的问题上，选用了2，4-二硝基氟苯(DNFB)作为衍生试剂，3组不同衍生试剂的特点见表1。
（2）衍生时间的选择。本研究选择衍生时间时，比较了15min、35min、60min三种不同时间的衍生结果，衍生结果排序为60min≥35min>15min，在考虑到实验效率的问题上，选用了35min作为衍生时间，3组样品不同衍生时间的回收率及相对标准偏差结果见表2。
（3）流动相的选择。本研究比较了醋酸钠缓冲液：乙腈(85：15，V：V)、醋酸钠缓冲液：乙腈(60：40，V：V)、酷酸钠缓冲液：乙腈(40：60，V：V)3种流动相对标准溶液及样品溶液进行分离测定，通过调节流动相中各组分的比例，使流动相的极性发生变化，改变分离效率，结果表明，不同流动相的色谱峰保留时间及峰型各有不同，随着乙腈比例的增大，牛磺酸保留时间不断提前，峰型变得尖锐。当流动相为醋酸钠缓冲液：乙腈( 85：15，V：V )时，色谱峰峰型较好，保留时间为15min左右。牛磺酸标准溶液和样品溶液色谱图见图1、图2。
2.方法的线性关系和检出限
分别移取标准使用溶液注入高效液相色谱仪中，以其浓度值为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。浓度范围在2.0~ 100.0μ g/mL时，溶液浓度和色谱峰面积呈现良好的线性关系，Y=2870.8X—869.12，r2=0.9999。
取空白样品，按照样品处理程序处理后，上机测定。另取多份空白样品，加入不同的较低浓度的牛磺酸标准工作液，按照样品处理程序处理后上机测定，对比结果，将引起3倍信噪比时的浓度定义为方法检出限，当样品称样量为2 g时，该方法检出限为5.0 mg/kg，方法灵敏度较高。
3.方法精密度
选取配合饲料、浓缩饲料、饲料添加剂、宠物食品等4种不同的产品进行精密度试验(n=6)，测定结果见表3，可以看出，4种不同产品的RSD均不大于5.0% ，说明该方法的准确度较高。
4.稳定性试验
将同一样品衍生液放置24h、48h和96h，分别取这3个时间段的衍生液，平行3次进行上机测定，结果表明，样品衍生液密闭冷藏放置48h内，牛磺酸结果变化不大，牛磺酸色谱峰面积及相对标准偏差(RSD)见表4。
5.回收率实验结果
取同一基质的样品为本底样品，分别添加2.0、5.0、10.0 mg/kg 3个不同浓度的牛磺酸标准溶液，按照本方法进行实验操作，平行测定3次，回收率在90.8%~95.8%之间，RSD为1.08%~2.73%，方法回收率较高，详见表5。
◆结论与讨论◆
本研究建立了饲料及宠物食品中牛磺酸的高效液相色谱测定方法。通过对样品处理和实验条件进行了优化，分别对配合饲料、浓缩饲料、饲料添加剂、宠物食品等4种不同的样品进行了精密度、准确度及灵敏度实验，测得6组数据的相对标准偏差在1.36%~3.60%之间，不同添加量的平均回收率在90.8%-95.8%之间，方法的检出限为5.0 mg/kg。优化后的方法重复性好，准确度高，基质干扰小。通过实际样品的检测，说明该方法有较广泛的适用范围，除配合饲料、浓缩饲料和饲料添加剂之外，也适用于宠物食品中牛磺酸的检测。
高效液相色谱法测定饲料及宠物食品中牛
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高效液相色谱法测定饲料及宠物食品中
湖北中仪盟供应链有限公司主要经营国产及进口光谱仪、色谱仪、质谱仪等分析仪器，产品广泛应用于环保、农委 、畜牧水产、地矿地质、 安监（煤矿）、水文水利、食品、医药、化工、冶金等领域。我们与多家国际知名仪器制造商建立了长期稳定的合作关系，为客户提供优质的产品和专业的技术支持！
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目前牛磺酸的测定方法主要有中和滴定法、离子色谱法、分光光度法、电位滴定法、高效液相色谱法、薄层色谱法、液相色谱串联质谱法、氨基酸自动分析仪法等。其中分光光度法是传统方法，操作复杂，所需试剂较多，结果有偏差故而不能广泛应用，氨基酸自动分析仪法对仪器和人员的要求较高，在一定程度上增加了检测的成本。本方法在大量实验基础上优化了牛磺酸的高效液相色谱法测定条件，以期为基层检测机构及饲料生产企业的检验人员提供参考。
◆材料与方法◆
1.实验材料
高效液相色谱仪，配紫外检测器；分析天平；电热恒温干燥箱；超声波；离心机；混匀器。
牛磺酸标准品(纯度≥99%)；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)、醋酸钠(优级纯)、碳酸氢钠(分析纯)、磷酸二氢钠(分析纯)、N，N-二甲基甲酰胺(分析纯)、亚铁氰化钾(分析纯)、乙酸锌(分析纯)；2，4-二硝基氟苯(DNFB)；实验用水为蒸馏水、高纯水。
2.实验方法
（1）溶液的配制
亚铁氰化钾溶液： 150g/L；乙酸锌溶液：30g/L；磷酸盐缓冲液(pH=7)：称取磷酸二氢钠3.4g于500 mL容量瓶中，加入0.1 moL/L氢氧化钠145.5mL，用水定容；醋酸钠缓冲液(0.05moL/L)：称取3.4 g醋酸钠，加入800 mL超纯水，10mLN，N-二甲基甲酰胺，用20 %冰醋酸调pH至6.4，经0.45μm滤膜过滤，即得。
（2）标准溶液的配制
牛磺酸标准贮备液(1mg/mL)：准确称取100 mg牛磺酸标准品于100 mL棕色容量瓶中，用水溶解定容，摇匀配制成标准贮备液，4℃密封避光保存，有效期6个月。牛磺酸标准使用液：分别移取一定体积的牛磺酸标准贮备液于100 mL棕色容量瓶中，用水定容，配制成2.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0μg/mL系列标准工作溶液，现用现配。（饲料液相色谱仪哪家好？中仪盟一站式供应链平台）
（3）样品前处理
△样品溶液的制备。精密称取样品适量(精确到0.0001 g)，置于100 mL容量瓶中，加70 mL水，超声提取20分钟，放冷，加1mL亚铁氰化钾溶液，混匀，再加入1mL乙酸锌溶液，混匀，用水定容至刻度，摇匀，取上清液以4000 r/min离心10min，备用。
△衍生反应。精密吸取标准溶液和样品溶液各10μL于杜氏小管中，抽干，依次加入0.5 moL/L碳酸氢钠溶液20μL、1% 2，4-二硝基氟苯(DNFB)乙腈溶液20μL，混匀，置于60 ℃电热恒温干燥箱中避光衍生35min，取出，稍冷，加入磷酸盐缓冲液(pH=7)160 μL，混匀，用微孔滤膜过滤，取10 μL进样。
△色谱条件。色谱柱：C18 柱，长250 mm，内径4.5mm，粒径5μm；流动相：酷酸钠缓冲液：乙腈(85：15， V：V)；流速：1.0 mL/min；检测波长：360nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
△计算公式：X=c✖V/m
式中：X-样品中牛磺酸的含量，mg/kg；
c一由标准曲线得出的试样溶液中牛磺酸的质量浓度， μg/mL；
V一试样定容体积，mL；
m一试样质量，g。
◆结果与分析◆
1.前处理条件的优化
（1）衍生试剂的选择。本研究在选择衍生试剂时，比较了2，4-二硝基氟苯(DNFB)、丹磺酰氯、邻苯二甲醛等几种衍生试剂的特点，其中邻苯二甲醛是测定游离氨基酸最常用的一种衍生化试剂，其灵敏度高，但是存在衍生物不稳定、衍生化时间要求苛刻等缺陷。在考虑到实验误差的问题上，选用了2，4-二硝基氟苯(DNFB)作为衍生试剂，3组不同衍生试剂的特点见表1。
（2）衍生时间的选择。本研究选择衍生时间时，比较了15min、35min、60min三种不同时间的衍生结果，衍生结果排序为60min≥35min>15min，在考虑到实验效率的问题上，选用了35min作为衍生时间，3组样品不同衍生时间的回收率及相对标准偏差结果见表2。
（3）流动相的选择。本研究比较了醋酸钠缓冲液：乙腈(85：15，V：V)、醋酸钠缓冲液：乙腈(60：40，V：V)、酷酸钠缓冲液：乙腈(40：60，V：V)3种流动相对标准溶液及样品溶液进行分离测定，通过调节流动相中各组分的比例，使流动相的极性发生变化，改变分离效率，结果表明，不同流动相的色谱峰保留时间及峰型各有不同，随着乙腈比例的增大，牛磺酸保留时间不断提前，峰型变得尖锐。当流动相为醋酸钠缓冲液：乙腈( 85：15，V：V )时，色谱峰峰型较好，保留时间为15min左右。牛磺酸标准溶液和样品溶液色谱图见图1、图2。
2.方法的线性关系和检出限
分别移取标准使用溶液注入高效液相色谱仪中，以其浓度值为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。浓度范围在2.0~ 100.0μ g/mL时，溶液浓度和色谱峰面积呈现良好的线性关系，Y=2870.8X—869.12，r2=0.9999。
取空白样品，按照样品处理程序处理后，上机测定。另取多份空白样品，加入不同的较低浓度的牛磺酸标准工作液，按照样品处理程序处理后上机测定，对比结果，将引起3倍信噪比时的浓度定义为方法检出限，当样品称样量为2 g时，该方法检出限为5.0 mg/kg，方法灵敏度较高。
3.方法精密度
选取配合饲料、浓缩饲料、饲料添加剂、宠物食品等4种不同的产品进行精密度试验(n=6)，测定结果见表3，可以看出，4种不同产品的RSD均不大于5.0% ，说明该方法的准确度较高。
4.稳定性试验
将同一样品衍生液放置24h、48h和96h，分别取这3个时间段的衍生液，平行3次进行上机测定，结果表明，样品衍生液密闭冷藏放置48h内，牛磺酸结果变化不大，牛磺酸色谱峰面积及相对标准偏差(RSD)见表4。
5.回收率实验结果
取同一基质的样品为本底样品，分别添加2.0、5.0、10.0 mg/kg 3个不同浓度的牛磺酸标准溶液，按照本方法进行实验操作，平行测定3次，回收率在90.8%~95.8%之间，RSD为1.08%~2.73%，方法回收率较高，详见表5。
◆结论与讨论◆本研究建立了饲料及宠物食品中牛磺酸的高效液相色谱测定方法。通过对样品处理和实验条件进行了优化，分别对配合饲料、浓缩饲料、饲料添加剂、宠物食品等4种不同的样品进行了精密度、准确度及灵敏度实验，测得6组数据的相对标准偏差在1.36%~3.60%之间，不同添加量的平均回收率在90.8%-95.8%之间，方法的检出限为5.0 mg/kg。优化后的方法重复性好，准确度高，基质干扰小。通过实际样品的检测，说明该方法有较广泛的适用范围，除配合饲料、浓缩饲料和饲料添加剂之外，也适用于宠物食品中牛磺酸的检测。
高效液相色谱法测定饲料及宠物食品中牛
饲料液相色谱仪哪家好？在仪器领域，不管是什么行业，不管是什么领域，其仪器的源头厂家都是中仪盟供应链平台，中仪盟供应链平台不仅集成了各个领域的经销商，还集成了各个行业的仪器应用！
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高效液相色谱法测定饲料及宠物食品中
湖北中仪盟供应链有限公司主要经营国产及进口光谱仪、色谱仪、质谱仪等分析仪器，产品广泛应用于环保、农委 、畜牧水产、地矿地质、 安监（煤矿）、水文水利、食品、医药、化工、冶金等领域。我们与多家国际知名仪器制造商建立了长期稳定的合作关系，为客户提供优质的产品和专业的技术支持！
另外，中仪盟供应链平还集合了国内外100多家生产厂家，是经销商和采购者的理想选择平台！
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