原理
脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。CheKine™ 脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒（微量法）提供了一种简单、方便、快速的LPS活性检测方法，适用于动植物组织、细胞、血清和血浆等样本。其原理是LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
包装清单
试剂盒组分 规格 储存条件
48 T 96 T
Reagent I 80 mL 80×2 mL 4℃
Reagent II 6 mL 12 mL 4℃，避光保存
Reagent III 6 mL 12 mL 4℃，避光保存
Standard 10 μL 10 μL 4℃
注意：正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
自备耗材
·酶标仪或可见光分光光度计（能测710 nm处的吸光度）
·96孔板（非聚苯乙烯材质）或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
·恒温箱、震荡混匀器、制冰机、低温离心机
·去离子水、甲苯
·匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温，用震荡混匀器剧烈震荡20 min；4℃避光保存。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Standard：临用前配制；加入3.168 mL甲苯，充分溶解即为10 µmol/mL的油酸标准溶液；用不完的试剂可以4℃保存一个月。
注意：Reagent II、Reagent III和Standard有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
样本制备
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。
1. 动植物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL Reagent I，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 细胞：收集1,000万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1 mL Reagent I，冰浴超声波破碎细胞5 min（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），然后12,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。
3. 血清（浆）等液体样本：直接检测
注意：1. 高脂样本离心后若上清液之上有固态脂类，需用棉签等擦除后测定。
2. 如需测定蛋白浓度，推荐使用Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30 min，调节波长到710 nm。可见光分光光度计用去离子水调零。
2. Reagent I和Reagent II置于37℃水浴中预热30 min以上。
3. 操作表（下述操作在1.5 mL EP管中进行）：
试剂 空白管（μL） 测定管（μL） 标准管（μL）
去离子水 150 0 0
样本 0 50 0
Reagent I 300 300 0
Reagent II 0 100 0
37℃振荡反应10 min
甲苯 800 800 800
37℃振荡反应10 min后，8,000 g，25℃，离心10 min，取上清液
上清液 400 400 0
Standard 0 0 400
Reagent III 100 100 100
37℃振荡反应5 min后，静置5 min，取200 μL上层液加入微量玻璃比色皿或96孔板（非聚苯乙烯材质），于710 nm处测定吸光值，分别记为A空白、A测定和A标准。计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定小于0.01可适当加大样本量，如果ΔA测定大于1.0，样本可用Reagent I进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
结果计算
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mg prot)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷(Cpr×V样)÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/g 鲜重)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准÷W
（3）按照细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每104个细胞每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/104cell)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷(N×V样÷V样总)÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准÷N
（4）按照液体体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mL)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷V样÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准
C标准：标准品的浓度，10 µmol/mL；V反总：反应总体积，0.8 mL；V样：反应中加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入Reagent I体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，104；T：催化反应时间，10 min。
注意事项
1. 甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩，建议在通风橱中操作。
2. 实验过程中须远离火源。
结果展示
Figure 1. 本试剂盒测定小鼠小肠和兔胰腺中LPS的活性
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免责声明
本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。CheKine™ 脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒（微量法）提供了一种简单、方便、快速的LPS活性检测方法，适用于动植物组织、细胞、血清和血浆等样本。其原理是LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
包装清单
试剂盒组分 规格 储存条件
48 T 96 T
Reagent I 80 mL 80×2 mL 4℃
Reagent II 6 mL 12 mL 4℃，避光保存
Reagent III 6 mL 12 mL 4℃，避光保存
Standard 10 μL 10 μL 4℃
注意：正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
自备耗材
·酶标仪或可见光分光光度计（能测710 nm处的吸光度）
·96孔板（非聚苯乙烯材质）或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
·恒温箱、震荡混匀器、制冰机、低温离心机
·去离子水、甲苯
·匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温，用震荡混匀器剧烈震荡20 min；4℃避光保存。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Standard：临用前配制；加入3.168 mL甲苯，充分溶解即为10 µmol/mL的油酸标准溶液；用不完的试剂可以4℃保存一个月。
注意：Reagent II、Reagent III和Standard有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
样本制备
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。
1. 动植物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL Reagent I，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 细胞：收集1,000万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1 mL Reagent I，冰浴超声波破碎细胞5 min（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），然后12,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。
3. 血清（浆）等液体样本：直接检测
注意：1. 高脂样本离心后若上清液之上有固态脂类，需用棉签等擦除后测定。
2. 如需测定蛋白浓度，推荐使用Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30 min，调节波长到710 nm。可见光分光光度计用去离子水调零。
2. Reagent I和Reagent II置于37℃水浴中预热30 min以上。
3. 操作表（下述操作在1.5 mL EP管中进行）：
试剂 空白管（μL） 测定管（μL） 标准管（μL）
去离子水 150 0 0
样本 0 50 0
Reagent I 300 300 0
Reagent II 0 100 0
37℃振荡反应10 min
甲苯 800 800 800
37℃振荡反应10 min后，8,000 g，25℃，离心10 min，取上清液
上清液 400 400 0
Standard 0 0 400
Reagent III 100 100 100
37℃振荡反应5 min后，静置5 min，取200 μL上层液加入微量玻璃比色皿或96孔板（非聚苯乙烯材质），于710 nm处测定吸光值，分别记为A空白、A测定和A标准。计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定小于0.01可适当加大样本量，如果ΔA测定大于1.0，样本可用Reagent I进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
结果计算
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mg prot)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷(Cpr×V样)÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/g 鲜重)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准÷W
（3）按照细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每104个细胞每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/104cell)=(C标准×ΔA测定÷ΔA标准)×V反总÷(N×V样÷V样总)÷T=16×ΔA测定÷ΔA标准÷N
（4）按照液体体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1 μmol脂肪酸为一个酶活单位。
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C标准：标准品的浓度，10 µmol/mL；V反总：反应总体积，0.8 mL；V样：反应中加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入Reagent I体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，104；T：催化反应时间，10 min。
注意事项
1. 甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩，建议在通风橱中操作。
2. 实验过程中须远离火源。
结果展示
Figure 1. 本试剂盒测定小鼠小肠和兔胰腺中LPS的活性
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免责声明
本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
