DCAF7使USP10在K76处去泛素化G3BP1，最终通过泛素-蛋白酶体途径阻止G3BP1的降解
第一步，USP10的去泛素化酶活性对于G3BP1的去泛素化至关重要
进一步研究显示，MG132处理恢复了USP10敲低细胞中G3BP1的表达（图3a-b）。另外，Co-IP实验发现，USP10的过表达降低了G3BP1的泛素化，而USP10催化失活突变体（Cys424Ala;C424A）则没有这种作用（图3c），说明USP10的去泛素化酶活性对于G3BP1的去泛素化至关重要。
第二步，DCAF7使USP10在K76处去泛素化G3BP1
Co-IP实验显示，DCAF7敲低导致G3BP1泛素化显著增加（图3d-e）。据文献报道三个赖氨酸残基可作为G3BP1的潜在泛素化位点。构建G3BP1的K36R、K76R和K123R突变体进行Co-IP分析，发现K36R和K76R-G3BP1突变体的泛素化效果都不如野生型(WT) G3BP1，表明G3BP1可以在K36和K76位点泛素化（图3f）；而USP10敲除后，WT G3BP1和K36R突变体的泛素化显著增强，而K76R突变体的泛素化不受USP10敲除的影响，说明USP10主要去除G3BP1的K76多泛素链（图3f）。
进一步研究G3BP1 K76R突变体是否会影响G3BP1的稳定性。CHX处理细胞，WB实验结果显示，G3BP1的K76R突变显著增强了其蛋白稳定性（图3g）。表明DCAF7使USP10在K76处去泛素化G3BP1，最终通过泛素-蛋白酶体途径阻止G3BP1的降解。 后续的功能实验也表明G3BP1 K76R突变体显著增强了鼻咽癌细胞的顺铂耐药性以及迁移和侵袭能力（图3h-i）。
图3
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