一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是一种用于检测细胞凋亡的常用工具，以下从原理、组成、操作步骤、结果分析等方面进行介绍：
检测原理
· 细胞凋亡的 DNA 断裂特征：细胞凋亡时，内源性核酸内切酶被激活，这些酶会将染色体 DNA 在核小体间切断，产生 180-200bp 整数倍的寡核苷酸片段，断裂 DNA 的 3'-OH 末端暴露。
· TdT 酶的作用：试剂盒中的末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）能将生物素或地高辛等标记的 dUTP 连接到 3'-OH 末端。之后可以通过与标记的 dUTP 特异性结合的荧光素、酶等标记物来显示凋亡细胞，在荧光显微镜或酶标仪等设备下进行观察和分析。
试剂盒组成
· TUNEL 反应混合液：含有 TdT 酶、标记的 dUTP 以及反应缓冲液等成分，是试剂盒的核心试剂，用于将标记的 dUTP 连接到凋亡细胞 DNA 的断裂末端。
· 转化剂 - POD：如果标记物为地高辛，转化剂 - POD 含有与地高辛特异性结合的抗体，并偶联了过氧化物酶（POD），用于与 TUNEL 反应后标记有地高辛的 DNA 结合，以便后续进行显色反应。
· DAB 底物显色液：若使用 POD 作为标记物的检测系统，DAB（二氨基联苯胺）底物显色液在 POD 的作用下会发生显色反应，使凋亡细胞呈现棕褐色。
· 阳性对照试剂：通常为已知能诱导细胞凋亡的试剂，用于验证试剂盒的有效性和实验流程的正确性。
· 阴性对照试剂：一般为未进行任何处理的正常细胞样本，用于设定检测的背景和对照。
· 封片剂：用于封片，保护样品以便于长期观察和保存。
操作步骤
1. 细胞或组织准备：对于细胞样本，将细胞接种于培养板或载玻片上，待细胞贴壁后进行相应处理。对于组织样本，需进行固定、脱水、包埋、切片等常规组织学处理，将切片粘附在载玻片上。
2. 预处理：将细胞或组织切片用 PBS 洗涤后，用蛋白酶 K 等试剂进行通透处理，使 TdT 酶等能够进入细胞内与 DNA 断裂末端结合。
3. TUNEL 染色：滴加 TUNEL 反应混合液于细胞或组织切片上，在湿盒中 37℃孵育一定时间，使 TdT 酶将标记的 dUTP 连接到 DNA 断裂末端。
4. 显色或荧光检测：如果是采用酶标显色系统，如 DAB 显色，需滴加转化剂 - POD 孵育后，再用 DAB 底物显色液显色，显微镜下观察细胞颜色变化。若是荧光标记的 dUTP，则直接在荧光显微镜下观察荧光信号。
5. 复染与封片：为了更好地观察细胞形态，可选择用苏木精等进行复染，然后用封片剂封片。
结果分析
· 荧光显微镜观察：凋亡细胞由于其 DNA 断裂被标记上荧光，会发出特定颜色的荧光，如绿色或红色荧光，而正常细胞无荧光或仅有微弱的背景荧光。可以通过计数荧光阳性细胞的数量来计算凋亡细胞的比例。
· 酶标仪检测：如果使用酶标显色系统，可通过酶标仪测定吸光度值，吸光度值的大小与凋亡细胞的数量在一定范围内呈正相关，从而可以半定量地分析细胞凋亡的程度。
· 普通光学显微镜观察：使用 DAB 显色后，凋亡细胞呈现棕褐色，正常细胞为浅蓝色或无色。通过观察细胞颜色和形态来判断细胞是否发生凋亡，并可进行凋亡细胞的计数和分析。
应用领域
· 肿瘤研究：用于研究肿瘤细胞凋亡与肿瘤发生、发展、转移以及肿瘤治疗的关系，评估肿瘤治疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的效果。
· 神经科学：在神经退行性疾病研究中，检测神经细胞的凋亡情况，探究疾病的发病机制和治疗靶点。
· 心血管疾病研究：研究心肌细胞、血管内皮细胞等在心肌梗死、动脉粥样硬化等心血管疾病中的凋亡变化，为疾病的诊断和治疗提供依据。
· 药物研发：在药物研发过程中，筛选和评价具有诱导细胞凋亡或抗细胞凋亡作用的药物，为新药开发提供实验数据。
一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒为细胞凋亡的研究提供了一种快速、灵敏、准确的检测方法，在生命科学研究和医学领域中具有广泛的应用价值。
技术支持
亚科因（武汉）生物技术有限公司
Abbkine亚科因致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键生化检测试剂盒的研发、生产和销售,成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。
一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是一种用于检测细胞凋亡的常用工具，以下从原理、组成、操作步骤、结果分析等方面进行介绍：
检测原理
· 细胞凋亡的 DNA 断裂特征：细胞凋亡时，内源性核酸内切酶被激活，这些酶会将染色体 DNA 在核小体间切断，产生 180-200bp 整数倍的寡核苷酸片段，断裂 DNA 的 3'-OH 末端暴露。
· TdT 酶的作用：试剂盒中的末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）能将生物素或地高辛等标记的 dUTP 连接到 3'-OH 末端。之后可以通过与标记的 dUTP 特异性结合的荧光素、酶等标记物来显示凋亡细胞，在荧光显微镜或酶标仪等设备下进行观察和分析。
试剂盒组成
· TUNEL 反应混合液：含有 TdT 酶、标记的 dUTP 以及反应缓冲液等成分，是试剂盒的核心试剂，用于将标记的 dUTP 连接到凋亡细胞 DNA 的断裂末端。
· 转化剂 - POD：如果标记物为地高辛，转化剂 - POD 含有与地高辛特异性结合的抗体，并偶联了过氧化物酶（POD），用于与 TUNEL 反应后标记有地高辛的 DNA 结合，以便后续进行显色反应。
· DAB 底物显色液：若使用 POD 作为标记物的检测系统，DAB（二氨基联苯胺）底物显色液在 POD 的作用下会发生显色反应，使凋亡细胞呈现棕褐色。
· 阳性对照试剂：通常为已知能诱导细胞凋亡的试剂，用于验证试剂盒的有效性和实验流程的正确性。
· 阴性对照试剂：一般为未进行任何处理的正常细胞样本，用于设定检测的背景和对照。
· 封片剂：用于封片，保护样品以便于长期观察和保存。
操作步骤
1. 细胞或组织准备：对于细胞样本，将细胞接种于培养板或载玻片上，待细胞贴壁后进行相应处理。对于组织样本，需进行固定、脱水、包埋、切片等常规组织学处理，将切片粘附在载玻片上。
2. 预处理：将细胞或组织切片用 PBS 洗涤后，用蛋白酶 K 等试剂进行通透处理，使 TdT 酶等能够进入细胞内与 DNA 断裂末端结合。
3. TUNEL 染色：滴加 TUNEL 反应混合液于细胞或组织切片上，在湿盒中 37℃孵育一定时间，使 TdT 酶将标记的 dUTP 连接到 DNA 断裂末端。
4. 显色或荧光检测：如果是采用酶标显色系统，如 DAB 显色，需滴加转化剂 - POD 孵育后，再用 DAB 底物显色液显色，显微镜下观察细胞颜色变化。若是荧光标记的 dUTP，则直接在荧光显微镜下观察荧光信号。
5. 复染与封片：为了更好地观察细胞形态，可选择用苏木精等进行复染，然后用封片剂封片。
结果分析
· 荧光显微镜观察：凋亡细胞由于其 DNA 断裂被标记上荧光，会发出特定颜色的荧光，如绿色或红色荧光，而正常细胞无荧光或仅有微弱的背景荧光。可以通过计数荧光阳性细胞的数量来计算凋亡细胞的比例。
· 酶标仪检测：如果使用酶标显色系统，可通过酶标仪测定吸光度值，吸光度值的大小与凋亡细胞的数量在一定范围内呈正相关，从而可以半定量地分析细胞凋亡的程度。
· 普通光学显微镜观察：使用 DAB 显色后，凋亡细胞呈现棕褐色，正常细胞为浅蓝色或无色。通过观察细胞颜色和形态来判断细胞是否发生凋亡，并可进行凋亡细胞的计数和分析。
应用领域
· 肿瘤研究：用于研究肿瘤细胞凋亡与肿瘤发生、发展、转移以及肿瘤治疗的关系，评估肿瘤治疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的效果。
· 神经科学：在神经退行性疾病研究中，检测神经细胞的凋亡情况，探究疾病的发病机制和治疗靶点。
· 心血管疾病研究：研究心肌细胞、血管内皮细胞等在心肌梗死、动脉粥样硬化等心血管疾病中的凋亡变化，为疾病的诊断和治疗提供依据。
· 药物研发：在药物研发过程中，筛选和评价具有诱导细胞凋亡或抗细胞凋亡作用的药物，为新药开发提供实验数据。
一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒为细胞凋亡的研究提供了一种快速、灵敏、准确的检测方法，在生命科学研究和医学领域中具有广泛的应用价值。
技术支持
亚科因（武汉）生物技术有限公司
Abbkine亚科因致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键生化检测试剂盒的研发、生产和销售,成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。
