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ChIP-Seq原理,要点,优劣势

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蛋白DNA互作组ChIP-Seq原理,要点,优劣势。
ChIP-Seq检测原理: ChIP-Seq检测原理和RIP-Seq类似,不同的是前者利用目的蛋白抗体将相应的DNA-蛋白复合物沉淀下来,然后分离纯化捕获DNA,结合高通量测序技术对目标DNA进行测序分析。 ChIP-Seq服务要点和RIP-Seq类似,精简如下:
(1)试验设计:同RIP-Seq。
(2)蛋白表达和细胞量:比RIP-Seq细胞用量要求大,建议不少于10e7(金标准:320g离心沉淀100ul)。
(3)抗体关键质控:同IP-Mass和RIP-Seq。
(4)IP送样建议:细胞培养好后,收集前,先进行交联,再收样冻存。
(5)互作DNA筛选和验证:同RIP-Seq。
ChIP-Seq优劣势:
优势:高通量获得目的蛋白的专属DNA互作库。
劣势:技术门槛高,一般需要整包交给专业的服务商开展检测。
ChIP-Seq应用扩展:
(1)蛋白DNA相互作用数据,是探究转录调控机制研究的重要内容,体现机制研究的深度,能显著提高临床基础类研究文章的档次。
(2)蛋白DNA互作组检测,常用于蛋白的转录调控研究,如转录因子,转录调控蛋白等。
(3)蛋白DNA互作,其结合DNA的区域,是进一步研究互作机制和功能的关键内容,能够显著提高机制研究的高度。
互作组验证,即在互作组分析筛选的基础上,进一步利用WB或qPCR技术对感兴趣分子的靶向检测,更加精准,也是互作组验证的必由之路。验证成功上岸的基础是理想的互作组数据库,和丰富的分析经验,方能事半功倍。
广州基云,在IP互作组检测和关键机制分子筛选验证领域,具有丰富的经验,助力互作机制研究。
如有相关科研问题,欢迎来询探讨。


IP属地:广东1楼2025-02-27 17:55回复