冬凌草乙素以KEAP1为靶点

冬凌草乙素可能直接与KEAP1结合，影响PGAM5，从而在HCC中发挥药理作用
冬凌草乙素以KEAP1为靶点
第一步，筛选冬凌草乙素的结合蛋白
为了证实冬凌草乙素对HepG2细胞的作用，合成生物素标记的冬凌草乙素，进行pulldown实验（图1a），银染色分析显示在70 KDa附近存在差异带（图1b-c），随后进行质谱分析鉴定，其中包括KEAP1蛋白（69 KDa）（图1d）。提示冬凌草乙素可能以KEAP1为靶点。
第二步，PGAM5与KEAP1相互作用
KEAP1蛋白是一种重要的调节蛋白，可以通过与其他蛋白相互作用来调节细胞内信号通路。基于此，推测KEAP1可能通过与其他蛋白的相互作用影响HCC。在文献检索和分析质谱数据后，发现PGAM5是一种与KEAP1相互作用的重要蛋白，pulldown实验显示可以被生物素标记的冬凌草乙素拉下（图1e）。
第三步，冬凌草乙素直接与KEAP1结合，影响PGAM5，在HCC中发挥药理作用
随后，进一步使用生物素标记的冬凌草乙素来识别冬凌草乙素与HuProtTMHuman Proteome Microarray上制备的重组蛋白的结合（图1f）。共鉴定出662个与冬凌草乙素结合的蛋白。冬凌草乙素对KEAP1蛋白具有很高的结合亲和力，而与PGAM5蛋白几乎没有结合（图1g-h）。此外，细胞学实验发现，当用冬凌草乙素处理时，KEAP1敲低导致MMP9蛋白表达显著降低。然而，敲除KEAP1后再用冬凌草乙素处理，对MMP9蛋白表达没有显著影响（图1i）。表明冬凌草乙素可能直接与KEAP1结合，影响PGAM5，从而在HCC中发挥药理作用。
图1 冬凌草乙素可能直接与KEAP1结合，影响PGAM5，从而在HCC中发挥药理作用（Ref.Fig 1/2/S3）
全文分享请查阅：药靶开发|《Adv Sci》解读：HuProt™蛋白芯片筛选抗癌化合物结合蛋白！冬凌草乙素稳定KEAP1-PGAM5抑制肝癌进展。
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