回复：转基因食品的最大问题是慢性剧毒持久毒害人体健康

《转基因大豆小鼠肝细胞核的超微结构形态学和免疫细胞化学分析》
Ultrastructural Morphometrical and Immunocytochemical Analyses of Hepatocyte Nuclei from Mice Fed on Genetically Modified Soybean
作者：Manuela Malatesta,Chiara Caporaloni,Stefano Gavaudan , Marco B.L. Rocchi , Sonja Serafini ,
背景：
我们对转基因大豆的小鼠肝细胞进行了超微结构的形态学和免疫细胞化学研究，以研究这些细胞在与食品加工相关的多种代谢途径中最终的核成分的修饰。我们的观察结果显示，转基因小鼠的某些核特性有显著的改变。特别是，转基因小鼠表现出不规则形状的细胞核，通常代表高代谢率的指标，以及较高数量的核孔，暗示着强烈的分子运输。此外，控制动物的圆形核仁在更不规则的核仁中变化，在转基因小鼠中有大量的小纤维中心和丰富的致密纤维成分，代谢率增加的典型特征。因此，核质(snRNPs和sc - 35)和核仁(纤维蛋白)剪接因子在转基因喂养组肝细胞细胞核中比对照小鼠更为丰富。综上所述，我们的数据表明，转基因大豆的摄入能影响幼鼠和成年小鼠的肝细胞核功能。
结果：
对EPON-嵌入式肝脏样本的电子显微镜检查显示，对照组和转基因大豆喂养小鼠的肝细胞胞浆细胞器具有相似的结构特征(图1):粗面内质网排列型状不规则;高尔基体很发达;线粒体呈卵形形状和发达的横嵴;糖原颗粒众多，主要聚集在湖泊中，有时与脂滴相结合。
图2：
另一方面，在LRWhite嵌入的EDTA -染色样本中进行的超微结构观察发现，与对照动物相比，转基因大豆喂养小鼠的肝细胞的某些细胞核特性发生了变化。从1、2、5、8个月大鼠(图2a)的肝细胞核一般显示出圆形的形状，并包含在核周内和细胞核内分布的凝聚染色质团块。在核质中，丰富的周染色质原纤维(PFs)和周染色质颗粒(PGs)分布在凝聚染色质的边缘，而染色质粒间(IG)簇则发生在染色质间的空隙中。核仁一般显示圆形的形状，有一些FCs被DFC和丰富的GC包围(图3a)。用转基因大豆喂养的1个月大鼠的肝细胞核显示出类似于对照动物的圆形形状(未显示)，而在转基因大豆(图2b)上喂养的2个5个月大的小鼠的肝细胞核经常显示出不规则的形状。这种核形状的反固形性表现为一种良好的波动，并不是由于细胞质内含物扭曲了核表面。此外，转基因小鼠的核仁呈不规则且不均匀，有许多小的FCs和丰富的DFC(图3b)。
图3:

在(表一)中描述了形态测量结果，详细地说，非转基因小鼠核面积一般比转基因小鼠更大;与幼龄鼠相比，8个月大的动物的N / C比率较低;转基因组小鼠的形状指数一般高于对照组小鼠。核仁区没有改变;在转基因小鼠的FC区和GC百分比普遍较对照组低，而在转基因小鼠中DFC的百分比始终较高。在较年轻的动物中，老年人的FC值显著降低。最后，核孔密度在转基因小鼠中比对照组高。

讨论：
我们对对照组和转基因大豆喂养小鼠的肝细胞核进行的观察显示，所有转基因小鼠的核特性都有明显的改变，而细胞质细胞器则没有明显的改变。细胞核形状也受到年龄和食物的影响。事实上，除了1个月大的动物，所有的转基因老鼠都有不规则形状的细胞核，而对照组的小鼠一般呈圆形细胞核。不规则形核一般代表高代谢率的指数(例如，阿齐兹和巴拉尔，1994年;Motohashi et al .，1992;Malatesta et al .，1998);事实上，核细胞质界面的增加可能会改善这两个细胞间的分子交易。因此，在转基因小鼠的不规则形状细胞核中发现了增加的核孔频率，与对照组动物的圆核相比。
在转基因大豆中，肝细胞核仁也有结构上的改变，尽管其大小不变。事实上，控制动物的圆形核仁在更不规则的核仁中变化，在转基因小鼠中有大量的小FCs和丰富的DFC。核仁是核糖体基因转录的位点，rRNA处理和装配与核糖体蛋白(Smetana and Busch,1974;Hadjiolov,1985)。核仁是一种非常动态的结构，能够迅速地使它的活动，从而使其结构适应细胞的代谢状态(例如，Haidjiolov,1985;Schwarzacher令,1993;shaw and jordan,1995)。特别是，众所周知，当代谢率增加时，小型FCs的数量和DFC增加的数量(jordanandMcGovern,1981;Lafarga et al .,1991;Schwarzacher and Wachtler,1993;Dzidziguri et al .,1994)。
有趣的是，在我们的动物中，FC大小以及DFC和GC量的修改只与食物有关。综上所述，我们的形态测量结果表明，在转基因大豆上喂养的小鼠肝细胞核改变了它们的代谢活动。根据这一假设，研究中研究的核质和核仁剪接因子，参与早期mrna剪接(Luhrmann et al .，1990);scs - 35是U3 snRNP复合物的一个组成部分，它是U3 snRNP复合体的一个组成部分，它涉及到rRNA处理的几个步骤(Kass et al .，1990)，在转基因小鼠中比对照组更为丰富。
然而，到目前为止得到的结果是相当有争议的。综上所述，目前的研究表明，转基因大豆的摄入量可以影响年轻和成年小鼠的肝细胞核功能，尽管对这种改变负责的机制还不清楚，但我们的数据鼓励对相关科学兴趣的进一步研究。

《喂食转基因大豆的小鼠的胰腺细胞核的精细结构分析》
Fine structural analyses of pancreatic acinar cell nuclei from mice fed on genetically modified soybean
作者：M. Malatesta,* M. Biggiogera,° E. Manuali,#M.B.L. Rocchi,§B. Baldelli,* G. Gazzanelli*
研究背景：我们对喂养转基因大豆的小鼠胰腺腺泡细胞核进行了超微结构形态学和免疫细胞化学分析，以研究可能的结构和分子修饰的核质和核仁成分。我们发现，在转基因小鼠中，核质和核仁的剪接因子显著降低，并有一个周染色质颗粒累积，这暗示了转录后的hnRNA加工和/或核出口的减少。这是根据已经描述的酶原合成和处理在同一动物的修改。
试验结果：
图1：

由转基因组和对照组小鼠的胰腺腺胞核表现出相似的特征。细胞核一般包含大块的凝聚染色质(图1)。在核质中，在异染色质边界上分布着周染色质原纤维(PFs)和周染色质颗粒(PGs)，而染色质粒间(IG)则在染色质间的空间中发生。核仁一般显示圆形的形状和紧凑排列，有一些FCs被DFC和丰富的GC包围。形态学数据(表1)揭示了许多变量与食物和/或年龄-食物的关系发生了显著的变化。在细节上，核和核仁区的面积以及DFC和GC的百分比仅与年龄有关。与年龄-食物交互项有关的形状指数和孔隙密度也发生了变化，前者减少，后者在转基因小鼠中增加。与考虑的三个参数相比，在转基因小鼠中PG密度增加，FC面积减少。最后，转基因小鼠的FC百分比只与食物有关。

免疫治疗的定量评价(表2)显示了在转基因和对照小鼠中对三种细胞室的抗聚合酶标记的相似值。与之相反，转基因小鼠在细胞质和核质中研究的核质拼接因子的标签明显较低，而核仁的值是相似的。最后，在转基因小鼠中，在整个核仁和DFC中，核仁的标记纤维蛋白急剧减少，而在细胞质和核质中，信号保持不变。

讨论
我们在控制和转基因大豆喂养小鼠的胰腺腺泡细胞核上进行的观察显示，转基因小鼠的某些核特性有明显的改变。我们的数据显示，在转基因大豆喂养的小鼠中，核素活性下降。同样，研究的核质拼接因子- 核蛋白(snRNP)，参与早期mRNA剪接(Luhrmann et al .，1990)和sc- 35，需要剪接体组装(Fu and Maniatis,1990)-在转基因喂养的小鼠比对照组较少。另一方面，对聚合酶II没有进行任何修饰，对mRNA的转录负责。因此，可以假设在转基因喂养的小鼠中，转录后hnRNA处理的减缓将会发生。这将符合PG -被认为构成的储存和/或在这些动物的核质中拼接mRNA(vazquez - nin et al .，1979)的运输地点的积累。此外，转基因小鼠的较低的形状指数和孔密度暗示着细胞核和细胞质之间的分子间的减少。因此，减少的核出口将进一步增加PG的数量，即使剪接(即上游完整的PG组)部分受阻。在转基因小鼠的胰腺腺泡细胞核中观察到的修饰可能与之前在同一动物中描述的消化酶合成和分泌减少有关(Malatesta et al .，2002b)。因此，本研究进一步支持了一种观点，即含有大量转基因大豆的饮食可以影响小鼠的胰腺代谢。不幸的是，这些修改的原因至今还不清楚。

《对雄性大鼠喂转基因玉米后的一些器官组织病理学变化》
续篇之《化学分析转基因Bt玉米MON-810“Ajeeb YG®”和其对应的非转基因玉米“Ajeeb”》
Chemical Analysis of Bt corn "Mon-810: Ajeeb-YG®" and its counterpart non-Bt corn "Ajeeb"
作者：Abdo E.M.*, Barbary O.M.*, Shaltout O.E.*
背景：转基因Bt玉米“MON810:Ajeeb YG”®是一种能在整个植物中从芽孢杆菌(Bt)中表达内毒素的作物。本研究的目的是为了评估转基因Bt玉米的安全性，将其与传统的非转基因“Ajeeb”玉米相比较。测定了含水率、粗脂肪、总糖、淀粉和粗纤维;测定了钠、钾、镁、钙、磷含量，并测定单宁和植酸作为抗营养物质。还对氨基酸和脂肪酸图谱进行了评价。结果表明，转基因Bt玉米和其对应的玉米存在显著差异。
试验结果和讨论
3.1 化学成分分析：
化学成分分析的转基因Bt玉米的“mon - 810:Ajeeb YG®”及其对应非转基因玉米“Ajeeb”测定和结果表示在干重的基础上提出了“表1”。转基因Bt玉米水分含量为13.63%，而非Bt(非转基因)玉米为12.06%。这些值属于[25]发布的含水率范围内(9.4 - 14.4%)。粗脂肪在转基因Bt和非Bt玉米中分别为3.23和2.96%。粗脂肪含量低于[25]报告的3.6 - 5.3%的范围，但与所列的2.6 - 3.3%的范围一致[26]。转基因Bt玉米中蛋白质含量为11.6%，高于非Bt玉米的含量(7.8)。事实上，这些价值与[26]公布的6 - 12%的范围是一致的。在转基因Bt玉米和非Bt玉米中，总糖含量分别为6.77%和6.47%。这一结果高于[27]，转基因Bt玉米中总糖含量为2.33%，非Bt玉米为2.1%。淀粉含量从转基因Bt玉米的41.46%到非Bt玉米的45.21%不等。这些值低于[27]所报告的转基因Bt和非Bt玉米的60.72 & 54.2%。粗纤维含量在转基因Bt和非Bt玉米中分别为3.92%和3.09 %。根据[25]报告，粗纤维含量的商业范围为3.7%，而转基因Bt玉米的价值为3.4%[26]。非Bt的灰分含量为3.09%，转基因Bt玉米为1.67%。非Bt玉米的灰分含量从1.1%到3.9%不等[25]，而转基因Bt玉米的含量则从1.4%到1.6%不等。
表1：

3.2 矿物质含量
在“表2”中介绍了转基因Bt玉米的矿物质含量和其对应的非Bt玉米(非转基因)含量。结果表明，磷在转基因Bt和非Bt玉米中含量最高，其次是转基因Bt玉米中的钾、钠、钙、镁，以及非Bt玉米中的钠、钙、钾和镁。在非Bt玉米中，镁含量为103 mg,转基因Bt玉米则为51 mg。其在非Bt玉米中的浓度与文献[25]所报道的82-1000 mg的范围一致，但转基因Bt玉米明显低于上述的范围。对非Bt和转基因Bt玉米，钠含量分别为383.3 mg和230 mg。这些值高于0-150 mg的范围[25]。在非Bt和转基因Bt玉米中钙含量分别为233.2&183.3 mg/ 100。该值高于[25]报告的3-100 mg范围，低于[28]报告的390-590 mg范围。非Bt玉米中钾含量为126.7 mg，但转基因Bt玉米为376.7 mg。钾含量从320毫克到720毫克不等[25]。磷含量从815.64 mg到转基因Bt玉米的2103.3 mg/100g不等。这些值比报告的234-750毫克/100克高。
表2:矿物质含量对比

3.3 抗营养因子
抗营养成分如表3所示。单宁含量分别为1.7 & 1.22 mg，非Bt和转基因Bt玉米。两种样品的单宁值均高于[29]和[30]所述的0.57 mg范围内的0 -0.04 mg范围。在非Bt玉米中植酸含量为98 mg,Bt玉米为63.3 mg。这些值低于[29]所报告的值，但在45 - 100mg的水平范围内[25]
表3：抗营养因子

3.4 氨基酸概要:
转基因Bt和非Bt玉米中的氨基酸含量见表4。不同的研究人员在玉米的氨基酸含量上有很多变化。在非bt玉米;精氨酸、赖氨酸和甘氨酸在非Bt玉米的预期范围内，分别为2.9-5.9、2-3.8和2.6-4.7。但缬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸和胱氨酸的价值高于预期值5.2、3.9、4、2.8、5.7、2.1、9.9、5.5和1.6。与此同时，脯氨酸、谷氨酸和天冬氨酸值均低于10.3、19.6、7.2的预期值[26]。它由[25]以缬氨酸、异亮氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸等[25]组成，除精氨酸外，赖氨酸和甘氨酸也在预期范围内。但是，苏氨酸、丙氨酸、丝氨酸和胱氨酸值高于预期范围。而亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸值均低于预期范围。事实上，Bt玉米对亮氨酸、脯氨酸和蛋氨酸的价值在7.8-15.2,6.6- 10.3和1-4.6范围内。但是，赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸和胱氨酸值均高于预期范围，分别为3.8、2.8、5.7、4、和1.6。与此同时，谷氨酸和天冬氨酸的价值高于[26]所预期的12.4&5.8的预期范围。也有报道[25]异亮氨酸,亮氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，&胱氨酸值在预期范围之内。而赖氨酸、组氨酸和苯丙氨酸值分别高于5.5、3.8和6.4，谷氨酸和asUNK酸值分别低于12.5&4.8。（有六个氨基酸在转基因BT玉米上未检出，笔者注）
表4：氨基酸组成

3.5脂肪酸概要
脂肪酸含量如表5所示。可以看出，转基因Bt玉米中的脂肪酸与非Bt玉米的脂肪酸显著不同，除了肉豆蔻、硬脂酸、花生酸和廿碳烯酸。Bt和非Bt玉米的棕榈酸值分别为24.41、20.16。这些值高于报告的7-19的范围。Bt和非Bt玉米中硬脂酸分别为3.09&2.63。这些值对Bt和非Bt玉米的预期范围值是1-3。非Bt玉米中油酸为1.87，在Bt玉米中油酸为66.91。非Bt玉米中的油酸与所报道的油酸相当吻合，但明显低于(20-46)。但Bt玉米的价值高于这两个范围。其他脂肪酸在这些文献中没有报告。(文献为25，26号)
表5：脂肪酸组成

结论
很明显，转基因Bt玉米的基因修饰后与传统的非转基因玉米有显著的不同，其中，总蛋白、粗脂肪、粗纤维和总糖与非Bt玉米相比显著增加。而淀粉含量与非转基因相比明显降低，而Bt玉米中钙、钠含量明显降低，Bt玉米中磷含量显著增加。在Bt玉米中，除了棕榈烯酸和十八碳烯酸在Bt玉米中未被检测到(有可能缺失)，所有的脂肪酸都被检测到与非Bt玉米的不同值。在氨基酸方面，Bt玉米中丢失了一些必需氨基酸和非必需氨基酸（六种）。因此，我们可以得出这样的结论:转基因玉米的基因改造过程可能会对人类食物和动物饲料产生有毒化学成分。因此，需要对Bt玉米的实际安全性进行进一步的长期喂养研究。

《转基因大豆喂养小鼠的睾丸超微结构分析》
Ultrastructural analysis of testes from mice fed on genetically modified soybean
作者：L. Vecchio,1* B. Cisterna, M. Malatesta, T.E. Martin, M. Biggiogera
背景：
我们考虑了含有转基因大豆的饮食对小鼠睾丸的可能影响。事实上，这个器官是一个很有名的生物指标，它已经被用来监测重金属污染。在这个初步的研究中，我们通过免疫电子显微镜，将注意力集中在Sertoli细胞(支持细胞)，精原细胞和精母细胞上。我们的研究结果表明，在2个月和5个月大的转基因小鼠中，Sm抗原、hnRNPs、SC35和RNA聚合酶II的免疫功能下降。在各种年龄的转基因喂养的小鼠中，周染色质颗粒的数目较高，核孔密度较低。此外，我们发现在转基因小鼠Sertoli细胞中，平滑内质网的扩张。讨论了除草剂对大豆产生抗性的痕迹可能发挥的作用。
实验结果：
从转基因喂养的所有年龄段的小鼠睾丸Sertoli细胞显示滑面内质网囊泡扩大(SER)(图1A)，但未出现在对照组睾丸中(不显示)。在2个月和5个月大的小鼠中，转基因组比对照组的核仁出现了较大和更多的网状结构(图1 C)。
图1：

在所有动物的Sertoli和胚芽细胞中，在转录和剪接过程中所涉及的核质成分的外观和一般分布与对照组和转基因小鼠相似。然而，在考虑到所有的年龄时，不仅在Sertoli细胞中，而且在转基因小鼠的精子细胞(图1E和表1)中也观察到有统计学意义的增加。并且，在转基因小鼠中也发现了核孔(NP)数量的减少。
表1、表2

此外，还对剪接因子Sm进行了免疫标记，该因子位于周染色质纤维(PF)和间染色质颗粒(IG)中:在Sertoli和胚芽细胞中，在2个月和5个月大的转基因小鼠中，与对照组相比，它们的标签减少了(图1-E)。SC35和RNA聚合酶II的标签在2个月和5个月大的转基因小鼠中也较低
在转基因喂养的小鼠中，我们观察到在2个月和5个月大的小鼠中，hnRNP(核蛋白)的免疫抑制作用降低了，在所有被认为的细胞中，仍然存在于PF上的金粒，而没有从IG(图1 f - g)中出现。相反，在8个月的时间里，我们发现转基因喂养的小鼠的hnRNP标记(图1I)与相应的对照组相似(图1H)。但必须指出的是，在8个月这个年龄，hnRNP标签的值比2或5个月要低(也就是说在8月龄时hnRNP值会下降)。对抗hnRNP标号的定量评价结果见表2。
讨论
我们的研究结果指出，在转基因小鼠中：
•在睾丸细胞Sertoli和生殖细胞中对Sm、hnRNPs(核蛋白)、SC35和RNA聚合酶II的免疫标记在2个月和5个月的动物中减少了;
•PG的数比对照组高，NP密度低于对照组;
在Sertoli细胞发生了囊泡扩张(SER)
这些发现表明，在2 - 8个月的时间间隔内，喂食转基因食物的小鼠会出现短暂的转录减少。事实上，在此期间，在检查的所有细胞类型中都发现了PG(已知含有前体mRNA:Fakan,2004)的集群。如果我们认为NP密度也明显较低，那么PG的积累很可能是由于细胞核内前体mRNA的处理/出口不足所致。这些结果与Malatesta等人(2003年)关于转基因大豆小鼠胰腺细胞核的研究结果一致。
压力因素或抑制翻译的药物被认为是在核函数(Fakan和Puvion,1980)的反馈机制作用下，原子核中PG积累的决定。我们可能假设在转基因大豆喂养小鼠的睾丸细胞中也可能有类似的机制，在这种情况下，转录的减少与NP密度的降低平行，从而决定了以PG的形式进行rna的核积累。
据报道，药物诱导的hnRNA合成还原导致了核仁活性的增加(Petrov和Sekeris,1971);这与我们的形态学观察是一致的:事实上，核仁在转基因小鼠中更具有网状。这一事实通常与较高的活动有关(Schwarzacher和Wachtler,1993)。
一些观察到的睾丸细胞特征的变化在8个月大的老鼠身上被证明是可逆的，这可能是由于补偿机制造成的。相反，SER的扩张是不可逆的。进一步的研究正在进行，以阐明后者会对小鼠生育力产生影响。

表2：器官重量


表3：血液指标

《断奶老鼠和老年老鼠摄入转基因玉米(MON810)后肠道和肠道周围免疫反应》
Intestinal and Peripheral Immune Response to MON810 Maize Ingestion in Weaning and Old Mice
作者：ALBERTO FINAMORE, MARIANNA ROSELLI, SERENA BRITTI, GIOVANNI MONASTRA,ROBERTO AMBRA, AIDA TURRINI, AND ELENA MENGHERI
背景：
这项研究评估了易受感染的小鼠对转基因玉米(GM)的肠道和肠道周围免疫反应。断奶和老年小鼠饲喂含转基因或其亲父对照(非转基因)玉米或一种含无转基因玉米(非转基因)30和90天的颗粒饲料。对照组玉米饲喂小鼠的肠内上皮、脾脏、血淋巴细胞的免疫表型与颗粒饲料小鼠的免疫表型相似。与对照玉米相比,在30或90天时，转基因MON810玉米分别在断奶和老年老鼠的肠道和肠道周围诱导了T细胞和B细胞的CD4 +、CD8 +、γδT,RT细胞亚群百分比变化。也发现了在MON810喂养后血清IL- 6、IL-13、IL-12p70和MIP-1的增加。这些结果表明转基因生物安全评估中对转基因作物摄入的肠道和外周免疫反应以及消费者年龄的重要性。
实验饮食：
这些饮食是根据AIN-93G标准饮食(18)制定的，其中含有50%的转基因玉米MON810或其亲本对照对照组(非转基因)的玉米粉，以及一个标准的颗粒饲料(非转基因)(Mucedola,Milano，意大利)，含有50%的商业非转基因玉米也被使用，PCR试验证实了颗粒饲料中没有Cry1Ab的存在。
实验结果：
体重差异不大(略)
增殖反应。
为了验证淋巴细胞是否维持增殖能力，以响应特定的或特定的刺激，我们测量了在体外刺激时，断奶和年老的小鼠的脾脏淋巴细胞的增殖，以及在体外刺激下的多克隆丝裂原ConA或纯化的Cry1Ab。在任何一组动物(图1)中在Cry1Ab刺激后刺激指数低，提示Cry1Ab的免疫原性较低。
表1：

图1.断奶和老年鼠喂养MON810（GM）或其亲本对照玉米（C）30天或90天的脾脏淋巴细胞的增殖，并用ConA（A）或Cry1Ab（B）体外刺激。 增殖反应测量为3H-胸苷掺入，并表示为刺激指数（SI，未刺激的淋巴细胞的刺激/ cpm的cpm比）。 数据是每组至少10只动物的标准（SD）。
转基因和非转基因玉米对淋巴细胞群的影响。为了评估转基因MON810玉米的消耗是否具有免疫学上的结果，我们对与MON810或其亲本对照玉米的小鼠的肠道和周边部位分离的淋巴细胞进行表型分析。为了排除其他任何影响，我们还分析了含有商业非转基因玉米的小鼠的淋巴细胞亚群。对照组玉米的小鼠的肠内上皮(IELs)、脾脏和血淋巴细胞的免疫表型与标准颗粒饲料喂食小鼠的免疫表型相似(未显示数据)。研究发现，转基因MON810玉米诱导了不同年龄的不同部位的数种变化。的确,在断奶白鼠MON810玉米30天,T细胞的数量是IELs更高,而B细胞较低，在脾脏中IELs和血液更高(图2)。此外,IELs和脾脏中的CD4+亚群减少,而CD8+亚群在脾脏高但在血液中较低。,IELs、脾、和血液中TCRγδ+亚群更高，而TCRR+亚群在IELs和血液中较低。
图2。

图2。断奶小鼠饲喂转基因MON810效应（GM）或其亲本对照玉米（C）对淋巴细胞亚群百分比30天。肠上皮内淋巴细胞（IEL）各种细胞和脾淋巴细胞用流式细胞仪分析。数据表示方法（SD从至少10只。*1星,P < 0.05; **2星, P < 0.01; ***, P < 0.001,与对照组相比）
转基因MON810玉米喂养的断奶老鼠90天后,小鼠的IELs、血液中B细胞的百分比较高(图3)。转基因MON810玉米喂养老年老鼠90天后,在IELs、血液中B细胞的百分比较低，CD4+亚群在IELs中较低和在血液中较高，而CD8+亚群明显在血液中较低，TCRγδ+亚群在IELs更高(图4)。
图3/4合集：

细胞因子分析：
为了检验转基因MON810玉米是否会引起细胞因子模式的改变，我们评估了断奶小鼠和老年老鼠在喂养了转基因MON810的30或90天后的血清中数种细胞因子。研究结果显示，在断奶小鼠喂食转基因30天后：IL-6, IL-13, IL-12p70和MIP-1的分泌增加，在断奶小鼠喂食转基因90天后MIP-1分泌增加，老龄小鼠中IL-12p70的增幅较小(表3)。
表3：

讨论
在本研究中，我们通过考虑小鼠在脆弱条件下的肠道和周边免疫反应，对整个转基因MON810玉米消耗的免疫调节作用与父母对照和商业玉米进行了比较。本研究中使用的MON810玉米，在对断奶和衰老小鼠进行30 ~ 90天的治疗后，对肠道、脾脏、循环淋巴细胞和血清细胞因子的免疫表型进行了几次改变。
根据动物的年龄，在转基因MON810玉米饲喂后，在淋巴细胞亚群中观察到几种不同的扰动。最受影响的是断奶的老鼠喂养30天的转基因玉米，显示出IELs、脾脏和血液淋巴细胞免疫表型的变化。在研究了90天的断奶小鼠后，只增加了B细胞，比断奶小鼠喂养30天的时间要大2个月。此外，在年老的小鼠中，对MON810玉米的消耗导致了IELs和血液中的数种改变，类似于断奶的老鼠喂养转基因玉米30天。这些数据表明，年龄是对MON810玉米免疫反应的一个重要因素。这一事实并不令人惊讶，因为在断奶和衰老过程中，免疫系统对外界刺激的反应比在成年时更低。断奶代表了对外界抗原的平衡免疫反应的一个临界点，因为对新型食物抗原的最大接触，以及母乳保护因子的消除(26 - 28)。断奶的营养也可能提供影响肠道菌群的新因素，而肠道菌群反过来又会影响抗原暴露、免疫成熟和免疫应答(29 - 31)。当免疫系统发育和功能不适当时，可能会出现问题，从而导致对无害食品中蛋白质的耐受力无效，从而导致免疫紊乱。在断奶的小鼠喂养90天的情况下，对MON810玉米的低反应能力可能是由于在较长的试验过程中获得了耐受转基因食物的能力(或者说肝肾以细胞损伤为代价，加快肝肾老化坏死牺牲寿命，笔者注)。随着年龄的增长，免疫系统与年龄相关的不良反应被很好地记录，抗原特异性抗体反应的改变，口腔耐受性的降低，以及自然杀伤细胞的减少。此外，对于断奶，在衰老过程中，微生物菌群成分的变化可能会损害正确的免疫应答。综上所述，我们的研究结果表明，年龄是评价转基因食品安全的一个重要因素。
在本研究中观察到淋巴细胞表型的更多经常性的改变在TCRγδ+亚群的增加。这些淋巴细胞高百分比的定位在老鼠的肠道，有相当比例的γδT驻留在小鼠IELs细胞中(肠上皮淋巴细胞)。γδT细胞是免疫系统的重要调节因子，可调节炎症反应相关的病原体和自身抗原。已观察到γδT细胞数量较高人群有：患有哮喘的人，在未经治疗的食物过敏患儿的IELs中，儿童或青少年特发性关节炎或结缔组织病伴十二指肠的消化道症状中。此外，老鼠的γδT细胞已被证明比口服耐受。然而,对晚期过敏性气道反应的抑制和γδT细胞嗜酸性粒细胞增多症也被发现。除了确切功能的γδT细胞,本研究中观察到这种亚群增加的意义值得进一步评估。对于其他表型淋巴细胞的改变这当然也是真的，其意义仍有待确定。例如，B细胞的减少并不一定意味着他们分泌的抗体数量的减少，这是评估转基因MON810玉米对不同种类的抗体的影响很有趣。在这方面,研究目前正在评估在本研究中使用的小鼠血清中不同抗体的数量。初步结果表明在断奶和老年老鼠喂食转基因MON810玉米相比，其亲本对照玉米(非转基因)总IgG和IgE的增加。
转基因玉米引起的免疫表型的改变与一些被认为是细胞因子的细胞因子的增加有关，特别是在断奶的小鼠中，喂养了30天的转基因MON810玉米后。这些细胞因子(IL-6,IL-13,IL 12p70,MIP-1)参与了过敏性和炎症反应，虽然他们没有因为MON810玉米食用而强烈升高，但它们的增加是MON810玉米引起的免疫扰动的进一步指标。
综上所述，所得到的结果表明，本研究中使用的转基因MON810玉米导致了断奶老鼠和老年老鼠的肠道免疫反应和周围免疫反应。虽然这些数据的意义有待澄清，以确定这些改变是否反映了严重的免疫功能障碍，这些结果表明在转基因生物安全评估中应考虑到整个转基因作物对肠道和周围免疫反应的重要性，以及年龄(的重要性)。

《转基因玉米MON810玉米短期喂养猪对其生长性能的影响，猪的器官的形态和功能》
Effects of short-term feeding of Bt MON810 maize on growth performance,
organ morphology and function in pigs
作者：Maria C. Walsh1, Stefan G. Buzoianu1,2, Gillian E. Gardiner2, Mary C. Rea3, R. Paul Ross3,4,Joseph P. Cassidy5 and Peadar G. Lawlor1
背景：对雄性断奶仔猪(32例)，在31天时间里喂养转基因玉米(Bt MON810玉米)的研究，包括对生长性能、肠组织和器官重量和功能的影响，仔猪平均初始体重为7·5公斤，平均28天断奶年龄。在断奶过程中，猪在6天的驯化过程中被喂食非转基因的启动食物。这些猪随机分配到含38.9%转基因玉米饲料（Bt MON810）或非转基因等基因系玉米喂养31天。每周记录体重和饲料消耗（N 16 /试验），在第31天时处死猪（n 10／试验），收集器官、组织和血液样本。在31天的研究(P<0.05)中，转基因玉米喂养的猪消耗的饲料比对照组的猪要多，而且在14-30天(P<0·01)中转换饲料的效率较低。喂食转基因玉米猪的肾脏往往是重于对照组猪（P¼0·06）；与对照猪相比，转基因玉米饲养的猪十二指肠绒毛的绒毛杯状细胞/绒毛数较少 (P¼0·10)，综上所述，Bt MON810玉米对断奶仔猪的短期饲喂导致饲料消耗增加，饲料转化率降低，并减少了十二指肠绒毛细胞/ mm。肾脏的重量也有增加的趋势。
结果和分析：
在14天–30天，喂食转基因玉米的猪消耗了更多的饲料，（表4；P=0.02）和比喂食非转基因玉米饲料猪饲料转化效率较差（P=0.007）。总的来说，30天喂食转基因玉米饲料的猪有较高的日耗料量（P=0.03）和数值较大的平均日增重体重
内脏器官重量比较
心脏的重量，肝和脾的实验没有显着差异。然而，猪喂食转基因玉米饮食往往有较重的肾脏相比对照猪（161.0 v.145.2 g，分别；P=0·055；表5）。
表5

小肠和器官组织学的影响
有一个趋势（P=0.10）对照猪的十二指肠绒毛杯状细胞数量与饲喂转基因玉米的猪相比增加（见表6）。
表6：

讨论
到目前为止，研究将转基因Bt玉米MON810玉米喂养给猪的研究主要集中在生长反应的变化上。据我们所知，这是对猪的(30天)第一次研究，它评估了喂食转基因Bt MON810玉米对肾脏和肝脏功能、肠道组织学和生长性能的影响。在目前的研究中，有一个显着增加采食量转基因Bt MON810玉米食用增长率和这些猪体重比对照猪数值高。威利斯等分析了转基因和非转基因玉米的碳水化合物比例，指出了两种玉米的一些差异，发现并非所有类型的纤维对饱腹感都有同等的影响，而抗性淀粉对饱足感影响最大。在本研究中，转基因玉米对猪的抗性淀粉含量低于非转基因玉米。这可能是转基因猪与非转基因玉米喂养猪相比，饲料摄入量较高的原因。
在目前的31天的研究中，我们报道了玉米类型的饲料对心脏、肝和脾的绝对重量没有影响，但发现在饲喂转基因BT玉米MON810的肾脏重量略有增加，表明可能有肾毒性。在目前的研究中，在转基因玉米中观察到的肾脏重量的增加可能是由于一种被称为超滤的适应性现象而产生的，这种现象可以增加肾脏的重量，以应对升高的血清尿素(36)。饮食中可发酵的碳水化合物已被证明可以提高细菌在盲肠和结肠中的发酵，从而增加尿素的需求量。这种对尿素的需求增加，通过尿素从血液中扩散到盲肠和结肠中，从而降低尿素负荷由肾脏过滤。在本研究中使用的转基因玉米比非转基因玉米的酶抗性淀粉含量低。因此，我们假设在转基因玉米喂养的猪和较少的尿素中，后肠微生物发酵的减少，从血液中扩散到后肠。结果，更多的血清尿素被肾脏排出，导致肥厚。在本研究中，虽然目前的治疗中血清尿素浓度没有差异，但我们小组随后的研究报告显示，在经过30天的暴露(SG Buzoianu，未发表的结果)后，转基因玉米中血清尿素浓度的增加。
本研究证实了转基因Bt MON810玉米对断奶猪小肠组织学的影响。在大西洋鲑鱼(39)的研究中也有类似的发现，在大西洋鲑鱼帕尔的肠道中观察到变化。然而，在目前的研究中，转基因猪十二指肠绒毛的杯状细胞数量与对照组猪相比略有下降。Ganessunker等之前观察到猪小肠内的杯状细胞数量的增加是肠外营养的结果，与肠道菌群的变化有关，增强了炎症，降低了黏膜屏障的完整性。本研究结果表明，饲用转基因玉米后，在十二指肠中观察到的杯状细胞数目的改变可能是由于这些猪肠道微生物数量的变化所致★。对转基因猪肠道微生物群进行调查的初步数据表明，相对于对照组，(转基因喂养的小猪)某些肠道微生物种群的相对丰度有所不同★(SG Buzoianu，未发表的结果)（相对丰度是不是就是说，仅仅30天转基因饲料喂养，肠道微生物已死一片，导致的肠道杯状细胞数量不足）。肠道菌群的变化与其他研究中杯状细胞数量的改变有关，而肠道共生菌群已被报告直接影响肠上皮功能，包括通过产生黏液降解酶或通过刺激黏液基因表达来直接影响到杯状细胞

对大鼠喂养转基因Bt玉米（MON810：Ajeeb YG）的生化分析和肝脏组织病理学研究
Feeding Study with Bt Corn (MON810: Ajeeb YG) on Rats:Biochemical Analysis and Liver Histopathology
作者：Eman Mohamed Abdo, Omar Mohamed Barbary, Omayma El-Sayed Shaltout
背景：转基因Bt玉米MON810：Ajeeb YG由于基因改造(修饰)过程，导致整个植株产生内delta(δ)-内毒素。该品种的化学分析与传统天然非转基因的“Ajeeb”有显著的差异。此外，对大鼠进行喂养研究的目的是评估转基因玉米“MON810:Ajeeb YG”的安全性。三组大鼠（每组各6只雄性和6只雌性大鼠）分别饲喂对照饲料、非转基因玉米和转基因bt玉米1.5个月和3个月。在1.5个月后，每组3名雄性和3名雌性被解剖，另外1.5个月后，每组3名男性和3名女性和他们的后代被解剖。病理组织学检查、血液学及血清生化分析。结果表明，三组试验参数特别是转基因Bt组之间存在显著差异。观察3个月后转基因Bt组肝脏发生严重变化。
1。介绍
首先，安全评估集中在新表达的蛋白质的存在，因为这些蛋白质大多具有免疫原性。有时，免疫原性导致超敏反应“过敏”。另外，这些新蛋白对人类/动物的健康有毒性影响，其原因是“导入基因、基因沉默或内源基因过度表达”。本研究结果发现，除淀粉含量外，显着差异，所有水分，粗脂肪、粗纤维、碳水化合物、蛋白质和灰分含量等参数均存在显著性差异，同时转基因玉米和非转基因玉米的脂质谱和氨基酸分布差异显著。为了达到对食品、食品和饲料中的化学品进行高水平科学评估的必要性，可能需要进行适当的动物研究。因此，在本研究中，喂养研究对大鼠进行了90天，以三种正常剂量的转基因食物（11%，22%，33%）代表一种均衡的饮食。转基因Bt玉米的健康风险评估是基于对大鼠喂食转基因Bt玉米和非转基因玉米相比，在亚慢性试验对照饮食的血液分析研究。在喂养实验终止后，随访观察临床上观察到的不良反应、器官重量、血液化学分析，血液学参数与组织病理学。
2。材料与方法
2.1。材料
转基因BT玉米MON810的种子：Ajeeb YG®”与非Bt玉米“Ajeeb”进行仔细清理和取消破碎的种子。将种子磨成细粉，从亚历山大大学医学院获得三十六只白化大鼠，其中雌性18只，雄性18只。
2.2。实验设计
三十六只白化大鼠18只，雌性18只，随机分为三组，每组6只，雄性6只，其中Ⅰ组（对照组），Ⅱ组（非转基因组），Ⅲ组（转基因BT组）。大鼠组（对照组）饲喂非转基因的标准饮食的100%，第二组（非Bt）饲喂标准饮食含有非转基因玉米30%，和那些在第III组（转基因BT）饲喂标准饮食含有转基因Bt玉米30%。大鼠饲养在受控条件下在笼子里，并允许适应住房条件，开始试验前一周期间他们一直在吃基础日粮。观察动物的一般健康和护理每周两次。试验开始后1.5个月，每组3名雄性和3名雌性被处死。试验开始后的3个月，每组3只雄性、3只雌性及它们的后代被处死。
三.结果与讨论
3.1。器官重量
1.5个月、3个月和2个月后的器官重量分别为（表1和表2）。1.5个月、3个月，雄雌组各脏器重量差异均有显著性意义。可以看出，雄性在1.5个月后肝脏重量没有显著差异，但在1.5个月后，雌性转基因BT组发现显著增加，3个月后两个雄性和雌性都有明显的增加。3个月后，喂食转基因Bt和非bt组的雄性肝脏重量显著高于对照组。对脾脏重量而言，雄性和雌性在1.5个月后没有明显的差异，但在3个月后，在雄性和雌性中，转基因bt喂养组明显增加。结果还表明，雄性后代脾脏重量显著增加。在肾脏重量方面，1.5个月后雌性和3个月后的雄性中转基因Bt组差异显著。也就是说，除了男性转基因BT和非转基因喂养组在3个月后肾脏重量没有显著增加。转基因Bt和非bt组后代之间除雌性外没有显著差异。1.5个月后，三组男性和女性的心脏重量无显著性差异。事实上，在3个月后，转基因Bt和非转基因喂养的雄性大鼠心脏重量显著增加。而转基因Bt和非Bt玉米的雌性组心脏重量显著下降。Bt组的雌性仔鼠心脏重量显著增加，但在雄性后代中无显著性差异。参考确定45和91天男性器官重量，以转基因30% MON810为食；在肾脏和脾脏显示BT组与其他组相比，后45天显著增加。BT组肾脏、肝脏、心脏重量明显增加，与其他各组相比，脾脏明显下降。参考文献表明，Bt玉米或转基因大豆的消耗导致器官重量特别是肝脏和肾脏的显著差异，因为这些器官都与解毒过程有关。雌性大鼠肝脏重量明显增加。
表1：

表2：

3.2。肝脏组织病理学
图1：

在肝组织病理学中，对照组肝脏未发现变化(图1(a))。在两个组中观察到的非Bt和Bt组肝脏的变化，在两个组中观察到液泡化，在1个月后的Bt组中发现了轻度的细胞浸润，阻塞的中心静脉和扩张的血窦，如图1(b)-(d)所示。这些变化在非Bt组的3个月后也被检测到，除了图1(e)和(f)的一些暗核外，但在3个月后的Bt组中，其他的变化也被注意到了。肝脏失去了肝脏结构，增加了巨噬细胞的活性(图1(g))，如图1(h)和(i)图1(h)和(i)图1(h)所示，肝脏的细胞质、脓肿、细胞浸润的破坏，肝脏病理组织学显示，在1.5个月后，非Bt和Bt组发生了轻微的变化，但在3个月后，Bt组出现了严重的变化。这些结果与Kilic & Akay[13]相当一致，他们发现了一些变化，特别是在Bt玉米MON810的群体中，比如渗透、堵塞、边界变化和颗粒变性。一些与转基因玉米有关的喂养研究证实了大鼠肝脏的组织病理学变化，如充血、细胞核边界变化和分裂颗粒变性。这些变化可能是由于在玉米中插入了Cry1Ab基因，从而产生了MON810的杀虫剂[12]。在相同的方面，哈蒙德通过对从草甘膦耐受性玉米中喂食的大鼠肝脏进行显微镜检查，发现了渗透、单核、多灶性和炎症。
3.3。血液生化分析
表3的结果，在转基因BT组喂养1.5个月后，转基因BT组相较对照组和非BT组，转基因组的雄性和雌性大鼠表现出肝酶明显的显著增加（P≤0.05）。然而，1.5个月后显示在这方面雌性ALP水平显著降低。但3个月后在BT组与对照组比较，在所有肝酶显著升高（AST、ALT、GGT）以及ALP。同样的趋势，雄性和雌性的后代表4中也是正确的。在这项研究中，肝功能分析的结果与先前描述的肝组织病理学研究一致。如果肝脏受到损害，它的AACC，AST，ALT，GGT和ALP报告含量会增加。
表3：

我们的结果与Kilic & Akay[13]所报道的结果不同，因为除了在所有性别的球蛋白和总蛋白外，测定的酶和蛋白质之间没有显著差异。但酶与我们在转基因BT玉米“mon810 - ajeeb YG”上饲喂45天之后的研究结果截然不同，除了总蛋白、白蛋白和球蛋白。但这与Rayan等人在91天的进食后所确定的结果一致。肾脏功能的结果对比，所有性别的转基因组、非转基因组和对照组食用1.5个月后干扰水平为没有显著差异有尿素和肌酐，但是与对照组相比，尿酸水平显著升高。对雌性来说，尿酸的显著减少只在Bt和非Bt组中被观察到。事实上，在雄性Bt组3个月后，与对照组相比尿素的显著升高，尿酸水平显著下降。对雌性来说，尿素和尿酸并无显著差异，但与非Bt和对照相比，Bt组的肌酐水平明显下降。与对照组相比，在Bt喂养组中，对雄性和雌性后代的尿素和肌酐水平均有显著提高。但是肌酐在非Bt组的雄性和BT组的雌性不同。
结果显示，血脂谱的变化。它可以看出，雄性大鼠喂食转基因1.5个月后，非转基因与对照组相比均显著增加（P≤0.05）胆固醇、甘油三酯、极低密度脂蛋白胆固醇和血脂，但无显着差异，高密度脂蛋白胆固醇，观察低密度脂蛋白胆固醇，胆固醇/高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇/高密度脂蛋白。然而，3个月后显著增加（P≤0.05）观察所有血脂谱除少数如HDL和LDL胆固醇，他们没有表现出显著的差异对照。对喂养组BT的雌性大鼠1.5个月后，结果显示在一些参数如显著下降（甘油三酯、极低密度脂蛋白胆固醇，胆固醇/高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇/高密度脂蛋白），并在一些参数如显著增加（胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇）。对于雄性和雌性后代组，除HDL胆固醇外，所有参数的检测均显著高于对照组。大鼠食用”转基因Ajeeb YG”经过91天的实验开始增加脂质参数，除高密度脂蛋白浓度。脂类有重要作用在体内的作用；他们为身体提供能量，防止热量流失，激素的前体，作为结构和功能的生物膜组件。所以在血脂在血液中的水平的任何改变都可能导致临床疾病。重要的是要强调胆固醇升高的原因，这可能是由于肝胆管堵塞，减少其分泌到十二指肠，导致胆汁淤积的报告。1.5个月后，雄性大鼠和雌性大鼠的AFP水平与对照组相比没有显著增加。然而，在3个月后观察AFP显著增加（P≤0.05）在BT组雄雌组情况都相同。同样，雄性和雌性后代群体AFP都有显著增加。应该注意到，大鼠3个月后AFP升高，目前的研究是在正常范围内时相比，Kores等。认识到AFP浓度在大鼠血液和毒素的不同试验的升高，它的范围从0.014到980µg/ml在对照组大鼠。IgE水平显示，雄性和雌性大鼠在1.5个月和3个月后，BT组的数量显著增加。此外，在男性和女性后代中发现了显著的IgE上升。与其他组相比，BT组的IgE结果增加，但仍在正常范围内。
表4：

3.4。血液学
3个月后，与对照组相比，喂食Bt和非Bt玉米的男性组几乎所有检测的血液参数都有显著增加，而红细胞和红细胞压积则显著下降。雄性大鼠在其血液上饲养3个月后表现出最大的显著变化。雌性后代Bt玉米喂养的表现血象变化更为显著，相比男性后代的上述结果。（表6）如果身体组织出现紊乱，血液中的某些参数可能会增加。血液中的白细胞浓度的增加可能是由于感染、炎症、过敏或组织死亡由于AACC。同时血小板浓度增加，如果组织暴露于炎症、癌症或贫血由于AACC。注意到在大鼠喂食抗草甘膦玉米粒从13周血液学研究没有静态存在显著差异。
表5：

表6：

4。结论
显然，从土壤细菌的名叫苏云芽苞菌Bacillus thuringiensis的cry1Ab基因插入导致Bt玉米与其传统的对应亲本“Ajeeb”化学变化。此外从亚慢性喂养试验，可以看出有很多器官重量的变化在1.5个月后，3个月后各个方面包括后代的变化更大如：BT组血液学和血清生化分析、肝组织病理学检查的剧烈变化。这些变化可能是由于在Bt玉米产生的内毒素所造成的。

续上：
这项由俄罗斯基因安全协会(US National Association for Gene Security)进行的研究尚未公布，但其研究结果最近公布了。
俄罗斯科学家发现第三代被转基因大豆绝育的仓鼠
这些新信息的发布提供了另一种健康风险，并证实了早期与生育、子女出生体重和婴儿死亡率有关的问题。在这次喂食研究中，他们使用了仓鼠，这是一种以前没有在转基因安全研究中出现过的动物。
一组仓鼠吃正常的食物，没有任何大豆，第二组吃非转基因大豆，第三组吃的转基因大豆，第四组吃的转基因大豆比第三组要高。
在美国90%以上的大豆种植面积中，使用相同的转基因大豆，仓鼠和它们的后代在两年的时间里吃了各自的食物，在此期间，研究人员对三代仓鼠进行了评估。
首先，他们从每一组中提取了5对仓鼠，每组大约有7到8个窝，总共约有140只动物。
起初一切都很顺利，但当他们从后代中选出新的对时，严重的问题就显现出来了。第一个问题是，第二代人的成长速度较慢，他们的性成熟晚于正常水平。
然而，这第二代最终又产生了39个小鼠:
无大豆对照组有52只幼崽
非转基因大豆有78只
转基因大豆只有40只，其中25%死亡
因此，这些第二代转基因喂养的仓鼠的婴儿死亡率比对照组的5%的正常死亡率高出5倍。
几乎所有的第三代转基因婴儿都是不育的!
但后来出现了一个更大的问题，因为几乎所有的第三代仓鼠都失去了拥有婴儿的能力。
只有一只第三代雌性仓鼠产下了16只幼崽，其中1/5死亡。
简而言之，几乎整个第三代转基因大豆食用者都是不育的!
但这并没有结束。
在转基因大豆喂养的人群中，他们还发现了异常高的普遍现象——在动物的嘴里生长的毛发。(图在上一楼)
史密斯说:
“…这是一个非常罕见的现象,但他(研究报告的作者,Surov博士)在他的生活中从未见过这些转基因大豆喂养第三代仓鼠口腔中的这么多的头发
正如你可能知道的，转基因作物直到1996年才被释放，从转基因大豆、玉米和棉花开始。一年后，改良的油菜开始了。
请记住，人类的寿命比老鼠长得多，而转基因食品仅在1996年才被引入。这还不到一代人的时间。
因此，我们还没有看到这些潜在的影响对人类的影响，因为我们只有15年的时间。但是，如果这些影响对很多类型的动物都有影响的话，我们可能会在一个大尺度上看到不育，因为我们的曾孙们长大了，开始尝试生育……
鉴于我们已经从动物研究中得到的发现，美国完全不愿意实施关于转基因食品的预防原则，这一点令人费解。
此外，大约800份转基因食品申请已经向美国农业部提交了，但没有一份环境影响声明已经准备好。因此，不仅人类的健康问题受到忽视，整个生态系统也受到了危害。

《长期喂食转基因玉米NK603xMON810对于繁殖小鼠的生物学效应研究》
Biological effects of transgenic maize NK603xMON810 fed in long term reproduction studies in mice
作者：Dr. A. Velimirov, Dr. C. Binter, Univ. Prof. Dr. J. Zentek
摘要
在本研究中使用了三种设计，包括多代研究(MGS)、持续育种(RACB)的生殖评估和终生喂养研究(LTS)，均与实验鼠一起完成。测试饮食的不同之处在于，在加拿大的相同条件下生长，除了转基因NK603 x MON810玉米(GM)与非转基因玉米(ISO)的不同，其余都一样。MGS还包括一组在奥地利种植的非转基因玉米(REF)。
食物组成：
转基因组(GM)：33%的转基因玉米(NK603 x MON810)
对照组(ISO)：33%近等基因系玉米（非转基因天然玉米）
参考组(REF)：33%奥地利产本土非转基因玉米
饲料加工
饲料在饲料槽加工（tecniplast，hohenpreiß恩伯格，德国）作为餐饮食的造粒过程中避免在因为高温和压力导致蛋白质结构的变化。它已经表明，δ-内毒素是热不稳定（EPA 2003）。
父母的表现
第1代父母中，ISO组的1名雌性和GM组的3名雌性死亡，而ISO组的1名雌性在分娩前因不明原因死亡。
亲本繁殖
GM组与ISO相比，ISO组有更多的小鼠出现在N＞8。GM组原始一代和第二代出生幼崽较第三代更多。GM组幼崽出生的数量（除F2代）和断奶（所有人）都较低，幼崽死亡总是较高（转基因组生的少，死的还多）。所有数据都显示出高度的变化。在整个世代中，GM组的死亡率是ISO组的两倍（14.59%比7.4%）。

（分析：可以看到到转基因组第三代时，36.4%的小鼠不能生育，且每对小鼠仅能生育5.68只，相较第0代下降55%，生育数相比同代ISO组低20只，活到断奶数为5.23/对，死亡10只，死亡率0.71，是同代ISO的3.7倍，第1代死亡率是3.8倍，第2代死亡率是ISO组5倍。）
父母的生殖
在这20周内，我们进行4次RACB（通过不断的繁殖评估）。分配到ISO组和GM组各24对小鼠(雄雌各一)，所有4个ISO组的雌性(100%)分娩小鼠(表59)。在GM组，分娩量随着时间的推移而下降。在第4次，只发生了20次分娩(p = 0.055)。在GM组中出生的幼崽的平均数量一直较低，但在第三次分娩前并不显著。在第3组(p = 0.011)和第4组(p = 0.010)中，出生在GM组的幼崽数量明显减少，在第四胎(p = 0.025)中断奶。关于每一组的分娩总数，比在GM组(1035对844)中出生的幼崽要多。在断奶过程中，GM组的幼仔在第四胎中断奶的数量明显减少，但在整个世代断奶过程中，幼崽的数量减少了(只有在第三胎的p = 0.025)。

（分析：在同一窝小鼠多次不断繁殖试验可以看出，
1、到第4次生育时GM组已经有4组小鼠无法生育，16%无法生育率，而非转基因24队小鼠正常生育了4次毫无影响，GM组第3次时有4组小鼠未到断奶期（是否4组小鼠全死），GM组第4次时有1组未到断奶期
2、平均每队出生数，非转基因组全面领先转基因组，从第1次到第4次分别为(9比8.22、10.83比10.65、11.92比9.68、11.38比8.21，由0.78下降到0.18再到2.24最后竟达3.17只之多，下降竟达28%）
3、出生总数上，非转基因组出生总数同样领先转基因组，从第1次到第4次总数差距分别为（27只、15只、73只！、76只！），非转基因组4次的出生总数横向对比差距不大，生育总数平稳，转基因组出生总数则随时间推移下降明显，相比非转基因组，分别减少12.5%、6.76%、26%和28%。转基因组生育率比非转基因组低28%
4、断奶平均数，就是指幼崽从出生活到断奶的数字，非转基因组同样全面领先GM组，分别领先为（0.2、0.21、1.52、2.52只），死亡风险相对非转基因组分别高2.3%、2.1%、14.36%、26.35%！也就是说转基因组不光生的少，死的还多，生下来死亡风险比非转基因组高26.35%！
5、断奶总数方面，非转基因组领先只数为（13、15、47、62只），转基因组对比非转基因组死亡率高了6.5%、6.23%、18.5%和26.39%！）

《苏云金芽孢杆菌不同δ-内毒素对斑马鱼的早期和成年生命阶段发展的遗传毒性评价》
Genotoxic evaluation of different δ-endotoxins from Bacillus thuringiensis on zebrafish adults and development in early life stages
作者：Cesar Koppe Grisolia a,∗, Rhaul Oliveira b, Inês Domingues b, Eduardo Cyrino Oliveira-Filho c,Rose Gomes Monerat c, Amadeu M.V.M. Soares
背景：利用苏云金芽孢杆菌毒素作为生物杀虫剂，在昆虫的生物防治和转基因植物中增加了它们在环境中的可用性。生态毒理学评价苏云金芽孢杆菌里的4种δ-内毒素cry 1Aa、cry 1ab、cry 1ac和cry2a进行了生态毒理学评价，探讨了对斑马鱼基因组和胚胎的不良影响。在100 mg/L浓度下暴露96小时后，Cry 1Aa提高了在成年斑马鱼外周血红细胞微核(MN)频率。暴露于二种混合物96小时后 (cry1Aa+cry 1Ac, 50:50 mg/L) 和 (cry 1 Aa + cry 2A, 50:50 mg/L)，也显示出显著增加MN频率。在胚胎幼年的研究中，所有的测试δ-内毒素都具有胚胎毒性和发育延迟特性，暴露于96小时剂量在25, 50, 100和150mg/L 。然而，每种毒素都呈现出不同的毒性反应模式，表明其毒理学评价应考虑特定的方法。
3结果
在实验中，在所有研究的苏云金芽孢杆菌esporo晶体菌株中，四个δ-内毒素中，只有cry 1 Aa增加了斑马鱼中的Mn频率(表1，p = 0.0009)。在二种混合物中进行评价时，cry 1Aa+ cry 1Ac和cry 1Aa+cry 2A的Mn频率显著增加(分别p = 0.0074和p = 0.0046)。表1显示了四个试验内毒素之间的所有可能的二元组合和影响微核MN的评价结果。
表1：四种δ-内毒素(或混合后)导致斑马鱼外周血红细胞微核MN频率增加的对照表

斑马鱼胚胎和幼虫的死亡率是在图2所示。在第一个48小时δ-内毒素似乎没有引起高死亡率在胚胎中，然而在72 小时和96 小时后死亡率高度增加(接近于100%！)，在浓度高于50 mg/L对计算所有内毒素（表2），（在72小时时死亡率分别接近60%、20%、40%、40%。在48小时死亡率为20%、20%、30%和30%）

胚胎发育的某些参数受内毒素的影响很大。在24小时，观察到缺乏耳石形成、眼色素沉着和尾部脱离的剂量依赖性反应（随着剂量增加，发病数增加）。由于这三个参数中的异常总是相关的，它们被视为一个单一的终点(图3)
图3：

(A) (灰色条)表明，除了cry2A外，对所有内毒素检查；100%的胚胎在最高浓度下暴露于24小时没有耳石、眼睛色素沉着或尾巴脱离。体色素沉着也证实，但没有发现异常反应的胚胎(未显示数据)。在48小时，有异常发育的胚胎(耳石器、眼色素沉着和尾部脱落)减少，特别是在第1Ab和2A中，复苏几乎完成(图3a)、黑条)。在Cry 1Aa和1Ac的胚胎中观察到缺乏体节的形成(在最高浓度的试验中分别为胚胎的96.9和81.3 %)。对于除cry 2A外的所有毒素，在暴露于某些浓度的胚胎中，胚胎心跳和尾循环都没有(见表2)。

在96小时δ-内毒素，Cry 1Ab和2A对暴露于最高浓度(150 mg/l)的幼鱼造成100%的死亡率。剩余的浓度会引起严重的行为干扰，其特征是缺乏对机械刺激(如用巴斯德吸管的软按压)的反应和保持平衡的困难(图3B)。对所有的δ-内毒素，特别是在Cry 1Aa和1Ab中的所有δ-内毒素，分别为32.1和36.9%的胚胎中观察到脊椎变形，在浓度为100 mg/L的表2时，对发育终点的总结分析，包括剂量反应参数的ec50值。
4讨论
由于没有关于这些δ-内毒素对斑马鱼的毒性和遗传毒性的数据，这项工作中选择的浓度是基于胚胎毒性研究。在100 mg /l时，四种内毒素引起严重的胚胎毒性(图3)作为一个指标，在成年鱼中也有一些不良反应。在这项工作中，Cry 1Aa的鱼类微核MN的数量表明了这种毒素的遗传毒性；此外，Cry 1Aa的存在确定了混合物的遗传毒性，如Cry 1Aa+Cry 1Ac和Cry 1Aa + Cry 2A，因为在单独评价时，Cry 1Ac和Cry 2A不会引起遗传毒性(表1)时。另一方面，二元混合的Cry 1Aa + Cry 1Ab，没有诱导斑马鱼中的Mn，即使存在δ-内毒素Cry 1Aa。然而，文献中的一些数据报告了鱼类红细胞Mn含量测定的低灵敏度，这可能导致低估遗传毒性。今后的工作应包括补充试验，如彗星试验，以便更准确地评估遗传毒性效应。经统计学分析，bt毒素具有显著的剂量效应关系，可能是对物种的具有诱变性。对Bt毒素的作用方式是通过对上皮细胞的细胞膜上的受体细胞的细胞毒活性，引起膜的破坏是其毒性本质。因此，在细胞内毒素可作为RNA聚合酶，DNA修复酶DNA转录的抑制作用。此外，细胞膜破裂而释放胞浆空泡微粒体酶，导致DNA的水解。这些会被认为是基因毒性作用机制。
与成年鱼相比，斑马鱼胚胎和幼虫的毒性试验表明，这些生命阶段的敏感性要高得多。这是特别令人担忧 的，因为物质的风险评估通常是基于成年鱼试验，低估风险评估。在胚胎尚未孵化的前两天，在这个测试中观察到的死亡率非常低，在最后2天(幼鱼)更明显。96小时- LC50值与δ-内毒素(87 mg/L)非常相似，但Cry 1ac ( 188 mg / l)的内毒素含量似乎少得多。与其他内毒素相比，Cry1Aa具有较低的毒性。尽管胚胎期死亡率低，但在此阶段，内毒素的作用已经可见，所有内毒素检查都证实了发育延迟。特别是对暴露于Cry的1Aa的生物体的影响，在计算了24小时对发育延迟23.5 mg/L的ec50。Cry 1Aa引起的反应在几乎所有的终点测试和孵化幼虫的脊椎变形率高的情况。相对而言，Cry 1Ab和2A也呈现类似的急性毒性水平(类似96 - LC50)，但具有较低的亚致死效应。在24小时观察到的发育延迟未在48小时得到验证，分析的许多数据没有受到影响。最后，Cry 1Ac在96小时的死亡率相对较低，且不规则的亚致死效应。在文献中没有发现关于支持对胚胎发育影响的结果的研究。所有的内毒素检查似乎是胚胎毒性，但具有不同的毒性，因为对终点的不同反应模式进行了分析。这一想法也得到了微核评估的支持，在这种遗传毒性中，即基因毒性只被δ-内毒素的Cry 1Aa引起。
最后，观察了对成年斑马鱼的遗传毒性以及胚胎毒性效应。此外，试验的每一种内毒素都有其特定的毒性，因此，不应该对Bt毒素进行一般性的风险评估，但可能考虑到它们的特殊性。内毒素和与其他化学物质之间的相互作用可能会发生，例如，在基因毒性反应中，Cry 1Aa和Cry 1Ab之间的相互作用。发表的著作还表明，Bt毒素可能与农药等化学物质协同作用

《在转基因大豆中鉴定巴西坚果过敏原》
Identification of a Brazil-Nut Allergen in Transgenic Soybeans
作者：JULIE A. NORDLEE, M.S., STEVE L. TAYLOR, PH.D., JEFFREY A. TOWNSEND, B.S., LAURIE A. THOMAS, B.S.,AND ROBERT K. BUSH, M.D.
背景。大豆的蛋白质部分中，蛋氨酸的相对缺乏降低了豆类的营养品质(大豆)。为了提高转基因大豆的营养品质，从巴西坚果( bertholletia)中引入富含甲硫氨酸的2s白蛋白。由于巴西坚果是一种已知的致敏性食物，我们评估了2s蛋白在转基因和非转基因大豆、巴西坚果和纯化的2s白蛋白中的蛋白质的过敏性，通过放射过敏原吸附试验测试(四个主题)和十二烷基硫酸钠-十二烷基硫酸钠凝胶电泳(9个)，用免疫印迹和放射自显影法测定了对巴西坚果过敏的人血清中的IGE。3个受试者还接受了大豆、转基因大豆和巴西坚果提取物的皮肤点刺试验，对来自巴西坚果过敏的4个受试者的混合血清进行了放射过敏原吸附试验，转基因大豆蛋白提取物抑制了IGE对巴西坚果蛋白的结合。在免疫印迹方面，9个受试者中的8个与巴西坚果纯化的2s白蛋白和巴西坚果和转基因大豆中类似分子量的蛋白质的血清IGE。对过敏源检测，三个受试者对巴西坚果和转基因大豆的提取物有阳性反应，对大豆提取物有不良反应。结论2s白蛋白可能是巴西坚果的主要过敏原，在本研究中分析的转基因大豆含有这种蛋白质。我们的研究表明，一种被称为致敏食物的过敏原可以通过基因工程转移到另一种食物中。(N EnglJ Med 1996;334:688-92.)
对坚果过敏是最常见的食物过敏症，过敏的巴西坚果是有据可查的。有关基因工程引入过敏性蛋白(去植物里)的研究已经引起人们的关注。通过重组DNA技术，将其他植物中富含硫蛋白的基因从其他植物中引入大豆是一种方法，来自巴西坚果种子(Bertholletia excelsa)的2S白蛋白被导入其他植物了，因为它分别由18%和8%的硫氨基酸蛋氨酸和半胱氨酸组成。来自巴西坚果的2S白蛋白基因已被引入大豆、9种烟草、油菜(Brassica napus)、豆科蚕豆(legume Vicia)和豆类(Phaseolus vulgaris)。我们的目标是确定来自巴西坚果的2S白蛋白在转基因大豆中是否能够将IgE与对巴西坚果过敏的人结合在一起。与过敏体质的人结合的蛋白质很可能是过敏原，因为直接超敏的机制是在敏感的肥大细胞表面的特异性蛋白质和特异性IgE的交叉连接，导致它们脱粒并释放出组胺和其他过敏性疾病的介质。
转基因大豆的提取物有效地与巴西坚果蛋白竞争，这些蛋白被绑定到固相，微晶纤维素，从受试者对巴西坚果过敏的血清中与IGE结合(图1)。转基因大豆提取物的抑制程度与原始巴西坚果提取物的抑制程度相似(图1)。在具有与转基因植物相同的遗传背景和类似蛋白质水平的非转基因大豆提取物中，没有遇到任何抑制作用。结果表明，转基因大豆提取物对大豆蛋白的抑制作用不是由于正常大豆蛋白或125I标记的抗人IGE的非特异性结合作用所致。用转基因大豆和巴西坚果提取物获得的平行抑制斜率表明这两种提取物中的IGE结合表位具有很大的相似性。
图1：三种蛋白对比（非转基因大豆▲、转基因大豆■和巴西大豆●）

来自9个对巴西坚果过敏受试者中的8个，IgE从巴西坚果(分子量9000 )中纯化的2s白蛋白，以及巴西坚果提取物中的9-KD蛋白(图2A和2B)。来自9个对巴西坚果过敏受试者中的7个的IGE也与含有2s白蛋白的转基因大豆蛋白结合，而这种蛋白不存在于非转基因大豆提取物(图2B)。其中两个受试者的血清对非转基因大豆中的蛋白质的结合非常弱，但这些蛋白质没有与2s白蛋白一起迁移。从对照组血清无粘结。对巴西坚果过敏的9个受试者中的5个血清中的IGE也与一些转基因大豆提取物中的大约12 KD的蛋白质结合(图2C)。在图2C的泳道1中看到的两个条纹最有可能是2s白蛋白的12 - KD蛋白中间体和成熟的9 -KD亚基。
图2：

除了2s白蛋白外，转基因大豆含有由两个细菌标记基因编码的蛋白质:新霉素磷酸转移酶和b-葡糖苷酸酶。纯化的新霉素磷酸转移酶和用十二烷基硫酸钠变性的b-葡萄糖醛酸酶的纯化，并没有对从巴西坚果过敏的血清中与IGE结合。这9个受试者的血清中有6个与其他巴西坚果蛋白结合在一起。这些其他蛋白质的特性是不知道的。在一种情况下，IGE没有将明显与2s白蛋白结合，而是识别出一种42 -KD蛋白(图2d)。在另一种情况下，IGE与2s白蛋白和42 -KD蛋白(未显示的数据)结合，尽管对2s白蛋白的结合强度更强；该学科的血清还识别了21、25、39和57KD的小的IGE结合蛋白，具有相对较弱的结合，在巴西坚果。在所有其他情况下，与其他巴西坚果蛋白的结合并不非常强烈，这些单独的反应没有一致的模式
对三名有巴西坚果过敏史的受试者(试验组)和三个无大豆过敏史的受试者(对照组)进行了皮肤点刺试验。所有三个(有过敏史的试验组)对转基因大豆和巴西坚果提取物都有阳性反应，比例从1 : 1000000到1 : 1000 (表1)。
表1:

（风团是医学术语，就是肿起来起过敏反应的点，比如15/35就是肿了15mm的点，笔者注）
一个代表性的反应如图3所示。所有三个人对组胺对照物均有阳性反应，对生理盐水稀释液和非转基因大豆提取物无反应。（肉眼可见的肿块，转基因大豆的过敏性和巴西坚果相同）
图3：

三个对照组对象对巴西坚果、转基因大豆和大豆或生理盐水稀释液的全强度提取物无反应，对组胺控制有阳性反应。(无图)
讨论
来自巴西坚果的2S白蛋白很可能是主要的过敏原。主要的过敏原是蛋白质，从超过50%的特定过敏原的患者中大量地与IgE结合。在这种情况下，对巴西坚果过敏的9名受试者中，有8人的血清可以识别出2S白蛋白作为巴西坚果的一种主要的IgE结合蛋白，而这一蛋白在8个实验对象中的7个中是最强的ige结合蛋白。这7个实验对象的Ig也与携带巴西坚果蛋白基因的转基因大豆中的2s白蛋白结合。此外，在对巴西坚果过敏的3个受试者中，用转基因大豆提取物进行皮刺测试呈阳性，而对非转基因大豆提取物的测试则呈阴性。需要口服挑战来确认2S白蛋白的过敏性;然而，他们会给这组被试者带来风险，他们中的大多数都在无意中对巴西坚果的食用有威胁生命的症状。
最近，Melo等人在动物实验的基础上得出结论:巴西坚果中的2S白蛋白并不是主要的过敏原。然而，一种蛋白质在动物体内诱导IgG1反应的能力并不总是能很好地反映出这种蛋白质在人类中诱导IgE反应的能力。我们认为我们的证据证明，将巴西坚果中的2S白蛋白命名为主要的巴西坚果过敏原，Ber e1。从包括大豆在内的新植物品种中提取的食物(即转基因)，可能含有Ber e1，应该被适当标注为提醒消费者。我们的研究结果表明，在通过基因工程改造(天然)作物品种的过程中，主要食物过敏原的(会)转移(到新的转基因生物中去)。
我们还检测到一些对巴西坚果过敏的受试者血清中IgE与其他巴西坚果和大豆蛋白的结合。从转基因大豆(图2C)中结合12-KD蛋白，可以解释如下事实:巴西坚果中的2S白蛋白由9-KD和3-KD亚基组成，由17-KD前体蛋白组成，由12-KD中间体组成。在转基因大豆中，这种处理往往是不完全的，导致12-KD中间体的积累(未公布的数据)。来自巴西坚果的42-KD蛋白是对巴西坚果过敏的9个受试者之一的主要过敏原。然而，这种过敏原不是主要的巴西坚果过敏原，因为在我们的研究中对巴西坚果过敏的大多数人都没有这种蛋白质的特异性IgE。在其他植物食品中，如花生和大豆，检测到大量的IgE离子结合蛋白，而对主要的IgE离子结合蛋白的鉴定可能也有问题。在动物食品中，例如虾和鳕鱼，可以检测到多种IgE离子结合蛋白，但一种主要的具有优势的IgE离子结合蛋白通常很容易识别。
如果从通常引起过敏的来源获得这些蛋白质，则应谨慎评估转基因食品中蛋白质的致敏性。仅使用目前可用的动物模型来预测人类的致敏性并不能产生准确的结果。诸如放射过敏原吸附试验、带有免疫印迹的凝胶电泳和皮肤点刺试验等技术可以识别来已知致敏源的转基因食品中可能的过敏原的IGE结合蛋白。这一战略将在评估转基因食品的致敏性不会有用，因为在这种食物中，捐赠者遗传物质来源的过敏原性是未知的。目前在植物生物技术领域的大多数应用属于后一类。

兔子喂养转基因大豆:DNA片段和酶法分析评价代谢影响的检测
《Genetically modified soya bean in rabbit feeding: detection of DNA fragments and evaluation of metabolic effects by enzymatic analysis》
作者：R. Tudisco, P. Lombardi, F. Bovera, D. d’Angelo, M. I. Cutrignelli, V. Mastellone, V. Terzi, L. Avallone and F. Infascelli
摘要：利用聚合酶链反应(PCR)方法研究了转基因(GM)豆粕(提取溶剂)对家兔组织中DNA片段的存在。此外，通过测定血清、心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏的几种特异酶来评价其对细胞代谢的可能影响。利用在叶绿体trnL序列上设计的Clor1 / Clor2引物对tRNA Leu的叶绿体序列进行了明确的检测。血清中没有检测到酶水平的差异，但乳酸脱氢酶显著增加，主要是在肾脏和心脏中发现了LDH1等酶，而不是在肌肉中，这表明酶的局部产生有潜在改变。
本研究的目的是通过聚合酶链式反应( PCR)方法，对植物DNA片段在兔组织中的存在进行评价，以跟踪植物喂养的命运和转基因饮食对家兔器官特异性酶活性可能产生的健康影响。
试验结果
DNA片段检测
化学成分的常规豆粕和转基因豆粕是重叠的（表2）（表2只显示了几种成份，转基因大豆的豆粕木质素含量是非转基因1.9倍，38比20）

酶的活性
图5显示了心脏、骨骼肌、肾脏、肝脏和血清中酶活性的差异。在肾脏中检测到ALT，GGT和LDH的统计学差异（P<0.05）。而在心脏中，这种结果仅见于LDH。
图5：
表4显示了LDH同工酶在血清和组织中的相对分布。对照组和试验组之间动物的心脏LDH1、LDH2和肾脏LDH1均检测到显著性差异( p<0.05)，从而证实了这些组织中酶的显著增加。此外，尽管肝脏LDH的总活性没有显著差异，但在该器官中也有显著增加( LDH1 )和减少( LDH4)。
表4：

讨论：
对组织中酶活性的分析则有不同的结果。如图5所示，酶水平的显著差异主要涉及肾脏，在治疗动物中显示出更高水平的LDH、ALT和GGT。这样的结果似乎表明，即使血清水平不受影响，肾脏也发生了一些改变。更重要的是，心脏中LDH也显著地增加了，表明在体内两个最重要的器官中LDH的局部产生。LDH同工酶的相对分布证实了这一假设，它显示了心脏LDH1和LDH2和肾LDH1的显著差异。LDH1是在两个器官中优势同工酶，另外，在肝脏中也显示了这种同酶的显著增加和LDH4的减少，尽管在这个器官中总LDH活性没有明显的差异。这样的结果意味着，由于LDH是由M和H亚单位组成的四聚体酶，H和M亚单位的不同组合发生在肝脏(LDH - h4)。LDH-H1M3)。这一转变的原因尚不清楚，丙酮酸的底物特异性比alpha -羟基丁酸的更大，但更大的H亚单位被认为是一种更高的特异性，以降低alpha -羟丁酸对甲氧丁酸的影响。无论如何，这种转变支持了肝脏中某些代谢变化的假设。因此，从转基因家兔的三个器官中，LDH1的活性增加。这种增加的原因还没有得到充分的了解和证实，但这一结果表明，即使是在转基因家兔的LDH1等酶的本地生产中也发生了轻微的变化。此外，我们知道血清酶活性反映了每个组织对血清池的相对贡献。从血清中乳酸脱氢酶等酶的模式，与不同的组织模式比较，兔血清中乳酸脱氢酶活性最主要来源于骨骼肌，而骨骼肌是机体的主要质量组成部分。众所周知，肌肉中占主导地位的同工酶是LDH5，由于这些原因，血清中未检测到LDH1增加是可能的。而且，由于LDH1被认为参与了细胞代谢，因为它支持乳酸对丙酮酸的反应(Van Hall,2000)，我们的结果应该表明细胞代谢总体增加。这样的假设与其他作者一致，他们对转基因小鼠的某些核特性进行了显著的修改，表明其代谢率高，并有强烈的分子贩运(Malatesta et al .，2002)。不管怎样，应该额外考虑评估转基因食品的责任,这是一个事实，在多个器官中LDH的合成被改变了，这样的结果在今后的研究中必须加以考虑。
无论如何，我们的结果表明，准确的酶分析可以有助于检测饮食对细胞代谢的影响，即使在没有临床和生化标志的情况下。由于酶法的技术已经成熟，酶可以作为一种额外的工具来评估转基因喂养动物和人类健康的风险。

《猪食物中转基因玉米的研究：猪体内摄入外源dna的命运》
Investigations on genetically modified maize (Bt-maize) in pig nutrition: fate of feed-ingested foreign DNA in pig bodies
作者：Tim Reuter · Karen Aulrich
摘要：
本文对饲喂含亲本对照玉米(12头)或转基因玉米(36头)的共计48头猪的摄入DNA的途径和命运进行了研究。猪从最初的24公斤被养肥到约108公斤。饲喂转基因玉米的动物在饲喂最后一次含玉米的饲粮后，以每组(6只)的形式在4、8、12、24、48和72小时后屠宰，那些在12小时内被屠杀的人没有得到更多的饲料，而那些在屠宰前保持更长时间的猪得到了一种以大麦和小麦代替玉米的饮食。对照组在4和8小时被屠宰，从组织和肠内容物中提取DNA，用PCR检测植物DNA和任何转基因材料的存在。在转基因玉米的最后一次喂食后，在肠内容物中检测到重组DNA长达48小时★。PCR扩增植物基因间隔物产生不同大小的片段，依赖于饲料来源。直肠样本的来源依赖于个体的个体传代率，分析表明粮食的物种特定的模式限制。在猪的组织样本中未检测到重组或玉米特异性DNA。相比之下，在被调查的猪组织中可以检测到植物DNA片段。
DNA是一种稳定的分子，可以在极端环境条件下存活和在数千年之后在有机残留物中被发现。无论研磨、碾磨、热处理和蒸汽压对商业饲料源的影响(所有非转基因食品)，不同的研磨处理方法对植物DNA没有任何可检测的破坏，只有在热处理温度100°C和150°C之间造成植物DNA的破坏,导致碎片小于100碱基对(bp)。Chiter等人还研究了确保植物组织中DNA（特别是从转基因材料）的充分碎片化所需的物理和化学条件，使之不可能稳定地转移到细菌肠道菌群的菌株中。他们还得出结论，95°C以上和加压蒸汽温度是必要的充分降解基因组DNA。(多长时间的95度，多高的压强?，笔者注）未经处理的，农场动物的饲料中含有植物DNA片段的容量大于21 kbp。在生物体内，胃肠道（GIT）经常暴露于外源DNA的不断流动的部分或完全消化的饲料成分，食入的外源性DNA在哺乳动物和家禽的胃肠道中不能被完全降解。
饲料是基于亲本玉米线(Prelude)或基因改良的玉米线(NX6262)表达Bt性状，两者都来自亲本系(Zea Mays L line CG 00256 - 176)。在喂养研究中，生产了两种种植者的饲料和两种精饲料。这些饲料都是1毫米大小的干燥颗粒，在生长饲料和育肥饲料各含有70%的父母或转基因玉米。
四十八头体重平均值为23.9·3千克的雌性猪分为单箱。猪随机分为两组。十二头猪（对照组）饲喂非转基因玉米饲料，36头猪(Bt组)饲喂转基因玉米。用生长饲料喂食到80公斤的体重，然后，用育肥饲料喂养至屠宰。猪圈的容量为96个单盒，有24个盒子，有4排。为了排除对照组和Bt组猪之间接触的可能性，在治疗组之间保留了一排盒子。
屠宰
对照组的猪被屠杀的最后体重在103.4±8.3千克和转基因组猪体重在111.5±7.9千克猪。对照组首先被屠宰，以排除Bt组猪对组织样本DNA检测的污染。为了研究饲料摄取后被喂食的DNA的命运，猪被分成不同的组。对照组的12只动物分为两组各6只，BT组分成六组，每组六只。对照组和Bt组的两个组在上午喂养后4和8小时分别屠宰。在最后一次以玉米为食的饲料喂养后，重新种植Bt组的猪被宰杀了12、24、48和72小时。剩余的Bt组的猪在最后一次饲喂含玉米的饲料后的12, 24, 48小时和72小时被宰杀，在饲喂后宰杀前，含转基因玉米的饲料被替换为45%的大麦和25%的小麦(非转基因)。
试验结果：
表2：各种基因名称引物对比表

PCR聚合酶链反应
玉米和饲料
PCR扩增表明玉米的叶绿体基因片段在玉米和含有玉米的饲料中可以检测到，无论是亲本对照还是转基因。利用从玉米中提取的DNA以及与引物对Rub 01/02或Ivr 1F/R组合 ，对提取的特定DNA片段的扩增。扩增出特定大小的基因片段有532 bp(Plant1-F/R)，140 bp(Rub 01/ 02)和226 bp(Ivr 1F/R)被放大(数据未显示)。在转基因Bt玉米和仅含Bt玉米的饲料中，引物对Cry 03/04（211 bp）的基因修饰是可以检测的，这表明可以排除亲本玉米和饲料中的任何偶然交叉污染。
肠道
为了探索胃肠中特定DNA片段的途径，在最后一次饲喂含玉米饲料后，在不同时间（每组6头）宰杀猪(4、8、12、24、48和72 h)。分别从每头猪的七段消化道（胃、三部分的小肠和结肠三部分）取食糜样品。为了检验被馈电的DNA片段的命运，使用了引物系统Plant1 F/ R,Cry 03/ 04和Rub 01/02。
从所有的猪中，直肠的内容用引物对Plant1 F/R检查。在最后一次喂食玉米饲料后，屠宰的所有动物(对照和Bt组)都可检测到玉米特异性的片段(532个bp)。此外，在最后一次喂食后24小时内，被宰杀猪的一段642个bp的碎片也被放大了。在两个Bt组经过48和72小时后屠宰，过渡阶段给予了大麦/小麦的饮食，未检测到玉米特异片段，只有642个bp大麦片段(图2C)被放大。
图2：

PCR法对Bt玉米的鉴定用引物对Cry 03/04，见图2B和表3。预期的211个bp片段可以在胃和小肠的内容中被放大，在屠宰4、8和12h的Bt组中，大多数猪的胃和小肠的含量可扩增出预期的211bp片段。在24小时后，Bt基因只能在胃(2 / 6)、结肠(3 / 6)和直肠(1 / 6)中检测到。此外,211bp微弱信号可以在猪的十二指肠,空肠和回肠内容物检测到(48 小时组)以及从同一组另一个猪一个直肠测到(48小时)。
表3：PCR检测BT组在不同时间屠宰时内容物的转基因DNA片段(211bp)

（分析：吃过转基因4小时后，几乎所有器官100%可测出转基因DNA片段，8小时后，胃直肠100%可测出转基因片段，盲肠回肠80%以上机率，12小时后，盲肠和结肠100%可测出转基因，（跟食物的蠕动有关，不排便就一直都能测出，排便了还能残留体内），48小时后仍可从4头猪的不同器官中检测出转基因成份）
组织检查
（表4是对小分子的天然叶绿体基因片段进入人体器官肌肉等进行检测的结果，结果发现140bp的叶绿体基因可以在猪的大部分器官上检出，猪的大脑未检测，事实证明小分子基因片段能进入各大器官，而不仅限于胃肠道，能否检出取决于设置分子的大小）
最初，引物对SW 01/02设计用于检测基因编码猪生长激素，用于确认从组织样本中提取的DNA的PCR扩增的可行性。从检测的所有组织样本中，获得了预期的108个bp扩增产物(结果未显示)。然后，对相同样品进行检测，分别是针对特定于玉米的转化酶基因片段(引物对IVR 1F/R)，用于Bt片段(引物Cry 03/04)，并对植物基因扩增引物对Plant1 F/R。为了测试具有较小分子大小的DNA片段更有可能通过胃肠的上皮细胞层的假设，使用了更敏感的引物系统rub 01/02。在此背景下，对每一个组织样本进行分析，以rubisco基因(叶绿素基因，非转基因，植物都有)片段为引物对Rub01/02。总共调查了每头猪的9个组织的432个样本，结果为144个阳性。检测到的rubisco片段在不同组织内分布不均匀。在62.5 %的卵巢标本中，在脾脏检出阳性率为12.5 %，血液和淋巴腺阳性率为16.6 %，肝脏和背最长肌的阳性率为54.2%。所有可检测碎片的结果汇总在表4中，选择结果如图2B所示。
表4：rubisco基因在身体各器官检出对照表

分析：在食用玉米72小时后，仍能在猪的肝、背长肌、卵巢、斜方肌60%~80%高概率的检测出DNA片段，事实证明，食物消化后的进入血液的DNA片段会游走在猪身上的任意器官、肌肉组织中！而游走DNA片段会对各器官组织起到何种作用？
检测极限
利用从参考玉米粉(丙烯酰胺，taufkirchen，德国，含2% Bt-176 )和引物对rub 01/02中提取DNA的PCR来确定目前方法检测的限度。测量的260 nm紫外线吸收表明DNA提纯含量在80 ng /µL。从玉米粉中提取的DNA随着水的增加而被稀释。图3所示的结果表明二磷酸核酮糖羧化酶基因片段(rubisco基因片段)在稀释0.001%时仍可清楚探测,对应0.8 pg /µL提取DNA。Bt基因检测在稀释至0.1%,对应80 pg /µL，使用参考玉米粉和引物对Cry 03/04提取的DNA(图3)。
图3：PCR检测极限图示

这个是PCR检测的极限，转基因低浓度反应非常灵敏，最低可以到0.08 纳克/微升
PCR产品的确认
PCR的特异性通过适当的限制性内切酶消化证实。通过HaeIII酶将扩增的Bt基因片段进行消化分解为162个bp和49个bp的两个片段。放大的Rubisco基因片段使用酶RsaI消化为86 bp和54 bp大小的片段，为了确认Plant1 F/R扩增产物，我们使用了酶AluI来对玉米特异性基因(532 bp)消化为193 bp和339 bp的两个片段，对大麦特异性基因(642 bp)切成189bp和453bp(图4)。
图4：酶切扩增不同组织内容物的凝胶电泳图

此外，Bt基因片段的扩增的特异性和扩增的Rubisco基因片段证实32P标记的寡核苷酸探针的Southern分析根据。