第一步，TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的 蛋白酶体抑制剂MG132以浓度依赖的方式增强TRPML1的蛋白丰度，而BafaA1对TRPML1没有影响，表明TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的（图1a）。 第二步，β-TrCP可能是TRPML1泛素化的主要E3连接酶 Co-IP实验显示，β-TrCP过表达上调TRPML1泛素化水平，β-TrCP ΔF的失活体则不能（图1c）；此外，下调β-TrCP可降低TRPML1泛素化水平（图1d）。另外，Co-IP分析发现，K48R泛素突变体破坏了TRPML1的多泛素化，而K63R突变体则没有。此外

若你正致力于研究高分子量蛋白（超过150KD）， 却困扰于难以获得理想的Western blot结果， 那么本文一定是你想要的答案！ 01凝胶选择是关键 三大最常见的凝胶类型：Tris-Glycine、Bis-Tris与Tris-Acetate。 Tris-Glycine凝胶，pH值8.6，保质期短暂，运行中pH易升至9.5，引发蛋白降解与分辨率下降。 Bis-Tris凝胶，pH值6.4，相较于Tris-Glycine，稳定性与保质期有所提升，但需添加抗氧化剂（如DTT）保持蛋白还原状态。 Tris-Acetate凝胶，pH值7，针对大分子蛋白展现卓越分辨率

第一步，AARS1分别乳酸化YAP和TEADK90和K108位点 乳酸化蛋白质组学KEGG分析富集多种通路，重点集中在Hippo信号通路上，YAP和TEAD1分别在K90和K108位点发生了乳酸化（图1a-b）。IP-WB检测也显示YAP-TEAD发生乳酸化（图1c）。此外，构建YAP K90R和TEAD1 K108R突变体进行IP-WB检测显示没有发生乳酸化（图1d）。另外，葡萄糖剥夺降低YAP-TEAD1的乳酸化水平，而乳酸处理明显恢复其的乳酸化水平（图1e-f）。 第二步，AARS1与YAP-TEAD1相互作用 Co-IP实验发现AARS1与YAP-TEAD1互作（图1g

我们是成都专业生物医学实验室，在天府锦城实验室，有科研需求的老师联系。

第一步，探讨PRMT1在肝细胞癌中上调的机制 已有结果显示，PRMT1的蛋白水平在HCC中上调，但PRMT1 mRNA水平没有变化。推测泛素-蛋白酶体降解可能参与PRMT1的上调。用两种不同的蛋白酶体抑制剂处理细胞，发现PRMT1蛋白水平呈剂量依赖性增加（图1a），表明PRMT1的蛋白水平可以通过泛素介导的降解来调节。 第二步，确定PRMT1降解的关键泛素连接酶 根据设计的筛选策略，E3泛素连接酶FBXO7为候选互作蛋白（图1b-c）。IP-MS分析显示FBXO7是前10个与PRMT1相互作用的候

全自动步态分析系统在实验动物研究中具有重要的应用价值，尤其是在神经科学、药理学、遗传学以及生物医学工程等领域。使用全自动步态分析系统时，通常需要将动物放置在一个特制的通道内自由行走，系统会记录下它们的步伐长度、宽度、速度、足底压力分布等多个参数。通过对这些定量的步态数据的分析，研究人员可以获得关于实验动物运动协调性、平衡能力和肌肉力量等方面的信息，帮助研究人员评估实验处理（如疾病模型建立、药物干预

糖尿病肾病（DKD）是一种普遍存在的慢性肾脏疾病，是终末期肾病进展的主要原因。足细胞是覆盖GBM外表面的高度分化的上皮细胞，对于维持GBM的完整性至关重要。因此，足细胞损伤的程度通常用来评估DKD的进展。此外，足细胞中的炎症积聚与足细胞损伤的加重密切相关。 2024年6月，温州医科大学梁广团队在Nat Commun（IF=14.7）上，发表“Podocyte OTUD5 alleviates diabetic kidney disease through deubiquitinating TAK1 and reducing podocyte inflammation and injury”的研究成果。揭示

UBE2C促进SNAT2的单泛素修饰，抑制其多泛素修饰。 检测步骤： 第一步，筛选UBE2C蛋白底物SNAT2 IP-MS和泛素蛋白质组学检测发现：SNAT2是UBE2C泛素修饰的底物（图1a）。 第二步，UBE2C与SNAT2相互作用 Co-IP等实验检测证实UBE2C与SNAT2相互作用（图1 b-c）。 第三步，发现UBE2C促进SNAT2的单泛素化，阻断K63连接的泛素链的延伸 Co-IP分析显示发现UBE2C促进SNAT2的单泛素化，但阻断了泛素链的延伸（图1 d-e）。分别构建不同泛素突变体Ub-WT,K6R,K11R,K 27R, K29R, K33R，K48R，K63R(基

简牍：疾病靶点泛素修饰调控机制研究思路。 Step1：根据临床需求和文献，凝练临床科学问题。 Step2：根据临床科学问题，确定泛素修饰靶点。 Step3：明确修饰靶点的细胞动物模型功能 Step4：解析泛素修饰酶，修饰类型和位点、以及下游机制分子调控方式等。 该研究为病理提供新视角、为诊疗提供新策略。 正文： 互作机制研究是临床基础研究的难点，修饰互作机制研究是互作机制研究上的明珠。泛素化修饰机制研究，主要目标是深入理解泛素化过程

BECB往届会议吸引了超过200位参会者，涉及40多个国家和地区，分别是中国、新加坡、日本、韩国、英国、美国、乌克兰、加拿大、芬兰、意大利、法国、比利时、葡萄牙、德国、西班牙、埃及、泰国、越南、以色列、塞尔维亚、巴西、马来西亚、俄罗斯、捷克共和国、波兰、罗马尼亚、保加利亚、印度尼西亚、阿根廷、伊拉克、白俄罗斯、危地马拉、阿曼、菲律宾、约旦、尼日利亚、墨西哥、希腊、沙特阿拉伯、秘鲁等。 2024 3rd International Symposium on Bi

1. 上样：样品加载： 上样量：细胞：10ug，组织：20ug，标记物上样量：2ul。 2. 电泳：分离胶浓度：常见有10%、9%和6%（大分子量选用浓度较低的胶，小分子量则相反）。浓缩胶浓度：5%。 电泳缓冲液配制：将100ml母液加入900ml蒸馏水，再加入1g SDS。 电泳条件：运行浓缩胶条件为80v，40min；运行分离胶条件为120v，50min。 3. 转膜：电转液：100ml母液+700ml蒸馏水+200ml甲醇（1）将PVDF膜在100%甲醇中浸泡10秒至15秒。 （2）倒入配置好的转印缓冲液于平底托盘中，将

生物进化在生殖系统上最为突出，主要体现在两方面：精卵的结合率与幼体的成活率。 一、接合生殖：单细胞生物有性生殖由个体暂时形成的原生质桥直接进行。雄体的部分染色体可以转移到雌体的细胞中导致基因重组。 原生动物的接合生殖，按接合子的形态又可分为两类：1）同配接合：接合子的形态（大小）相同。接合时进行遗传物质的交换。2）异配接合：…经过漫长的同配接合加杂交…，在形成雌性配子时出现了细胞质的不均等分裂，形成大

一、有性生殖或杂交的亲本的染色体组合及表型灭绝了 遗传的分离规律、自由组合及连锁与交换律。三定律。例如，有两对染色体Aa和Bb经过减数分裂，将形成2 ²＝4种染色体组成不同的生殖细胞，即AB、Ab、aB、ab。这些杂交后代再也回不去（不可逆）Aa和Bb的染色体组合，也就是亲本的染色体组合及表型灭绝了。生物体所具有的连锁群数目等于其体细胞中染色体的对数。果蝇有四个连锁群；狗的基因分别构成39个连锁群…等，它们的后代种群是相似的多

一、RNA的多样性起源于分子的变异与杂交的假设 在原始海洋营养汤中，由于RNA分子的高度变异性和RNA分子之间杂交后代，是的新的RNA分子，呈现出多样性。 这时的RNA运动都是随机的、无序的且随波逐流的。RNA的一级结构可以灵活折叠形成复杂的空间结构像分子“机器人”，使RNA功能具有的多样性。 二、生命起源于核酶的假设 生命活着（有活性）的标志是有能力把物质从无序状态变成有序状态。 杰勒德·F·乔伊斯和他的学生特蕾西·林肯，发现了一对

人到成体，17～20岁时（存在个体差异），骨骺闭合，此后，骨不能再纵向生长，人大约30岁长骨不再增粗，有更新却不再生长。其它的大多数动物也与人类一样，骨骼及各组织器官生长到成体以后只有更新不再生长，到老年退化的现象。但是大象却与大多数的动物不同，它从受精卵卵裂开始一直生长到生命结束。因此推测，大象是缺乏生长到成体后骨骺闭合这一机制的。因此推测大型动物（包括恐龙）与大象一样，没有骨骺闭合这个机制，它们一直生

在原始海洋营养汤中，…当进入充满大量原始细菌的环境。最开始的原始细菌是比现在的支原体还要简单的细胞，它们只有细胞膜、细胞质中只有DNA、核糖体和RNA。推测它们的DNA双螺旋结构还没有形成现在的染色体的高级结构，很松散，极简单且短小。 因为几乎没有细胞质，所以细胞的增殖过程中没有细胞生长的G1期和G2期，每一次分裂到下一次分裂的时间很快，其中一半是S期（DNA复制），一半是M期（细胞分裂）。因此它们的DNA表达指令只有两个，

从分子遗传学的角度来说, 有性生殖通过交配，将两个个体的基因组拼在一起进入同一个体的基因组中，并且同时在种群中传播。根据孟德尔和摩尔根发现的遗传学三大基本定律：基因分离定律、基因自由组合定律和基因的连锁和交换定律，提示：有性生殖就是杂交。首先有性生殖通过两套基因的自由重组，人类受精卵中的染色体组成将有2 ²³×2 ²³=70368744177664（70万亿）种差异，这还未考虑重组带来的变异。因此有性生殖可以加大后代的多样性。 科

当强调细胞是一切生物体基本单位这一概念时，从生命构筑角度理解，细胞既不是一个单纯装载各种分子混合的囊，也不是各种分子的机械性堆砌，更不是各种元素的化学性组合体，而是一个具有最高层次大分子组装的、动态的、表现生命力的单位小体。 构成细胞的生物大分子，包括蛋白质、核酸、脂类、糖等，它们是赋予细胞特性结构的物质。支原体是一种比病毒大、比细菌小的原核细胞，结构比较简单，只有细胞膜、细胞质中只有 DNA、核糖体和

细胞生长和细胞分裂是所有生物增殖的基本形式。细胞生长和分裂的周期即为细胞增殖周期，简称细胞周期（celll cuecve）。它是指连续分裂的细胞从上一次分裂结束开始到下一次分裂结束为止所经历的全过程。 人类在100年前就利用光学显微镜发现细胞在分裂前有着显著的形态变化，如出现纺锤丝，染色体分离等现象，就将此阶段命名为有丝分裂期（mitosis phase，M期），而把有丝分裂之间时期称为间期（interphase）。20世纪50年代后，由于细胞学，细胞分

虽然细胞是生命的最小单位，但它却是地球上最早的全自动化“工厂”。细胞里可自动安装或调换各种加工工具，从加工部件到装配、以至每道成品检查和修复，都可自动按时空有序完成工作。 1、酶 细胞代谢：细胞中每时每刻都在进行着的多种化学反应，有很多的步骤，每一步都离不开酶。科学家都认为：酶是通过降低化学反应的活化能来加快反应速率的，但酶的催化效率超高，其催化效率为一般非生物催化剂的10^9～10^12倍。酶具有像人类的眼睛一

一 、MPF是融合细胞形成合核体的主要动力 科学家将M期细胞与间期细胞融合，这样间期细胞就暴露在M期细胞质中，结果发现间期细胞的核膜消失，发生了形态各异的染色体凝集，称为超前凝集,并且不管间期细胞是否已经完成复制，都直接进入有丝分裂期。现已证明M期细胞质内存在一种诱导染色体凝集的促使细胞有丝分裂因子,称为(M-phast-promo.ting factor,MPF),MPF能够诱导染色体凝集，核膜破裂，细胞骨架的肌动蛋白重排，纺缍体组装并确保染色体与纺锤体

序：根据现代细胞融合技术中的同种细胞之间和异种细胞之间都能融合成功并培养成活的科学创举提示， 细胞融合是自然生物界中普遍存在的现象。 一、 细胞融合现象普遍存在于自然生物界 细胞融合又称细胞杂交是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的过程，融合形成的具有原先两个或多个遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。 在多细胞生物中，细胞融合是一种基本的发育与生理活动，例如，有性生殖的精卵融合，就是自然界中最完美的细胞融

用人工诱导的细胞融合过程中并不是所有的细胞都进行融合，有时可见多个细胞融合形成多核细胞。融合后的多核细胞大多只能存活一段时间（约十几日）就相继死亡；有时可见只有细胞膜结合在一起，而内部的细胞质和细胞核均不混合的称为是“半融合” 细胞；有时可见双核的融合细胞；由同一亲本的细胞融合形成的融合细胞称为同核体（homocaryons）或同核细胞，由不同亲本细胞融合形成的融合细胞则称为异核体（heteroargons）或异核细胞。人工诱导

当一个M期细胞与一个间期细胞发生非生理性的细胞融合后，间期细胞来源的与细胞周期控制系统中的细胞周期引擎相关基因—细胞分裂周期基因的表达就停留在某个特定阶段，这样，就是在基因表达水平上喝止了周期蛋白水平的周期性变化，导致Cyclin—cdk复合物周期性地装配和活化的过程也被定格在某个特定的阶段，因而无法触发细胞周期向下一个时相转移。因此在细胞融合中的间期细胞失去细胞周期继续运转的能力，而处于被动的地位，而融合细

一、RNA的多样性源于变异与杂交的假说 关于生命起源的"RNA世界"假说，他没有解释RNA是怎么产生的。核酸杂交是一种普遍存在的分子生物现象。核酸杂交（Hybridization）： 互补的核苷酸序列（DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等）通过碱基配对形成非共价键，从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程，称为核酸分子杂交技术，又称核酸杂交。我在《生命起源于原始海洋的营养汤模型的假设》一文中，假设了生命起源的无序营养汤。随机的产生的各种有

我在《生命与水的关系》一文中提出生命可能起源于水。细胞内、外液是一种盐溶液，类似于海水。这在一定程度上反应生命起源于海洋。孕育出生命的水是离子络合水。生物如果在过于纯净的水环境中，没有食物（食物链、生命构件和无机盐）是无法生存的。一、生命起源的原始营养汤模型的假设因为细胞是生物体结构和功能的基本单位，是最基本的生命系统，大部分的生物大、小分子是生活在细胞里的。我们知道所有的细胞均生活在水环境里。因

地球水和生命息息相关，水星、金星、月球、火星这几颗星球都没有液态水，它们完全没有生命的迹象。一、生命离不开水水！是一个最重要的生命基础。水是维持生命的关键成份，生命从萌发、生长、发育到死亡，时时刻刻都离不开水。海洋生物、水下生物、及单细胞动物草履虫等，它们生活在有水的环境中的，它们直接从水中获得所需的养料和氧气，并把代谢的废物直接排到水中。它们离开了水很快便死亡。除了海洋生物离不开水。还有陆地上的

葡萄胎是极体受精引起的假设 葡萄胎是常见的妊娠滋养细胞疾病，因妊娠后胎盘绒毛滋养细胞增生、间质水肿，而形成大小不一的水泡，水泡间以蒂相连成串，形如葡萄而命名。一、滋养层是长在卵膜外面的假设 我在《为何怀孕母体的免疫排斥反应的假设》 推测滋养层细胞与内细胞群的来源是不同的。一个细胞层厚的滋养层是长在卵膜外面，透明带的里面的卵周间隙里，它们来源于母体，内细胞群就附着在这层卵膜的内面，来源于受精卵。二、极体