回复：转基因食品的最大问题是慢性剧毒持久毒害人体健康

草甘膦及其商业制剂的毒性效应 (2015) Toxic effects of glyphosate and its commercial formulations
副标题：低于监管范围的草甘膦及其商业制剂的潜在毒性效应 Potential toxic effects of glyphosate and its commercial formulations below regulatory limits
作者：R. Mesnage, N. Defarge, J. Spiroux de Vendômois, G.E. 塞拉利尼
PII: S0278-6915(15)30034-X DOI: 10.1016/j.fct.2015.08.012
To appear in: Food and Chemical Toxicology （刊登：《食品和化学毒理学》杂志）
Accepted Date: 11 August 2015 （接受日期：2015年8月11日）
摘要：
草甘膦除草剂（GlyBh)，也叫农达（ROUND UP），是目前世界上使用最广泛的除草杀虫剂。自从投放市场以来，它们的用量成倍增长。草甘膦在食物或水中的残留量，以及人的接触机率，正在逐步扩大。我们回顾了已经发表的草甘膦毒性作用评估文献和监管报告，草甘膦低于监管限制的测量报告。我们发现的证据表明草甘膦在远远低于监管允许的最低含量所造成的慢性毒性效应的影响效应，显示是有毒的。草甘膦包括致畸、致瘤、肝肾等方面的影响。它们可以解释为内分泌干扰和氧化应激，导致代谢改变，这取决于草甘膦的剂量和曝露接触的时间。在推荐的每日可接受摄入量范围内检测到了一些结果。商品化草甘膦佐剂的毒性作用可以解释，它们既有自己的毒性，也能增强草甘膦的毒性。这挑战了草甘膦在污染食物和环境的水平上的安全性，尽管这些水平可能低于监管最低门槛。必须重新审视草甘膦在神经发育、生殖和遗传效应的影响，因为越来越多的知识表明，由环境相关的草甘膦暴露水平主导引起了内分泌的干扰机制。

反对转基因食品，也是不知道每天的食物是不是都有的

《草甘膦及其商业制剂的毒性效应》论文的主要内容列表：
1、背景、目标和范围
2、草甘膦的商业配方中添加的其他成分
3、草甘膦的肝肾毒性
4、草甘膦的神经毒性
5、草甘膦的致瘤性和致癌性
6、草甘膦的生殖毒性
7、草甘膦的致畸性
8、一般性讨论和结论性发言
8.1 草甘膦的佐剂、污染物或代谢物也证明了毒性
8.2 草甘膦监管评估的有效性
8.3 草甘膦的环境毒性。
9、致谢
10、工具书类
1、背景、目标和范围
草甘膦除草剂Glyphosate-based herbicides（glybh），也叫农达（Roundup ready)，是全球目前应用最广泛的商业农药制剂。(European Commission, 2007;US EPA, 2012)草甘膦是750多种广谱除草剂的有效成分(Guyton et al., 2015).草甘膦主要用于粮食和饲料作物的栽培，使用时间在作物干燥收获前（例如小麦），有80％的转基因植物在培育时被设计成能够耐受草甘膦的植物(James, 2014)。草甘膦在1996年仅占美国除草剂市场销售量的3.7%，而2009年则占到美国除草剂销售量市场的53.5%。(Coupe and Capel, 2015)
草甘膦通过5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）对植物的莽草酸合成途径进行抑制，(Boocock and Coggins,1983)这是参与芳香族氨基酸的代谢合成的途径。草甘膦中的EPSPS（对莽草酸的）抑制作用引起植物的蛋白质不足，因此植物死亡。由于这种生化途径在脊椎动物中不存在，一般认为草甘膦对哺乳动物，包括人类是安全的。(Williams et al.,2012)结果，草甘膦从20世纪70年代跃升为商业农药的主导地位。草甘膦的使用量每一年都不断增加。(Benbrook, 2012).草甘膦的这种用途主要是通过农业转基因作物的设计来实现的，转基因植物被设计用来能够容忍抵抗农达除草剂的抑制作用（并生长），同时由于杂草的抗性，需要越来越多的草甘膦喷雾剂喷向农田。抗农达转基因作物的种植带动了草甘膦使用（和销售），草甘膦的残留也可以在所谓的“非转基因”食品和饲料中发现，因为这些除草剂被越来越多地发现用于作物收获前的（除草）。
抗草甘膦转基因植物不能代谢或排出草甘膦，因此草甘膦在植物生长过程中的逐渐积累于植物体内(Arregui et al., 2004).而其他农药一般允许在粮食作物中的残留量在0.01～0.1ppb 水平(DG SANCO, 2013)，草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸（AMPA）在一些饲料中允许的最高残留限量（MRL）高达500 ppm（计算为草甘膦+ AMPA的总和）（1ppm=1000ppb，500ppm=500000ppb）。转基因大豆中的残留，主要用于动物饲料的转基因种植作物，已被定为20 ppm。2011年，美国农业部在90.3%和95.7%份大豆样本中检测了草甘膦和AMPA的残留量分别为1.9 ppm和2.3 ppm。由于牛越来越多地被喂食抗草甘膦转基因大豆，为了保护牛肾，草甘膦的最大残留量（MRI)被设定为2ppm。事实上，农场饲养动物的研究表明，在肾脏和肝脏中的草甘膦含量大约是脂肪或肌肉中含量的100倍。(Germany Rapporteur Member State, 2015).草甘膦和AMPA的残留物也被发现污染了地表水，即使在没有转基因作物种植的地区也如此。(Coupe et al., 2012; IFEN, 2006)草甘膦在食物/水中的普遍存在意味着它经常被摄入。 由于草甘膦残留对人群的真正污染特征不明显，美国疾病控制和预防中心广泛调查了人经常接触250种的工业化学品，但不包括草甘膦。基于小群体的有限研究估计，草甘膦在尿液中指标是相应于每日膳食摄入约0.1-3.3µ克/公斤 体重/天。(Niemann et al., 2015)
草甘膦对健康的影响评估已经由政副机构进行(EPA, 1993; European Commission, 2002)、或由代表公司销售草甘膦的科学家进行(Greim et al., 2015; Mink et al., 2011; Williams et al., 2012; Williams et al., 2000)或由独立的学者进行(Antoniou, 2012; Astiz, 2009; López et al., 2012; Székács, 2012).所有这些检验报告都充满了相互矛盾的观点，特别是草甘膦及其商业制剂的长期影响。在欧洲，新的草甘膦长期毒性临界值基于肝功能障碍（建立在大鼠）是350mg/kg bw/d。(GermanyRapporteur Member State, 2015).没有观察到有害作用水平（NOAEL）为100 mg/kg bw/d。新提出的每日允许摄入量（ADI）是从兔胚胎发育研究计算出最低值NOAEL (50 mg/kg bw/d).考虑到安全系数为100（10种内变异系数X10种间变异系数），ADI值为0.5mg/kg bw/d。来自同一数据，美国相同的ADI和参考剂量（RFD），计算为 1.75 mg/kg bw/d(EPA., 2009).在这种情况下，从兔致畸性研究中得出LOAEL为350 mg/kg bw/d（NOAEL为175 mg/kg bw/d）。应该强调的是在毒理性实验中使用的剂量，一般范围从10到1000 mg/kg/d，不代表人类暴露在环境中的（量级），这种（暴露）水平（量级）发生在µg/kg bw/d程度 （微克/公斤 体重/天） (Niemann et al., 2015)。
我们回顾了草甘膦及其制剂在低于规定限度下对于实验室哺乳动物的影响，考虑到所有的相关数据对于哺乳动物的草甘膦和草甘膦的毒性，对科学和医学相关的文献综述直接使用关键字“草甘膦”数据库，“N-（膦酰基甲基）甘氨酸”和“农达”（直到2015年4月）。我们还使用了10年科学文献后续产生的个人书目数据库。
我们没有报告短期试验或试验引起急性（中毒）效应的剂量，换句话说，（短期）剂量超过了长期毒性的最大值 (350 mg/kg bw/d)，因为这不是争论的问题。的确，（短期的）ADI或RFD明显超出了在一些意外和故意暴露，这往往是通过处理（泄露）事故或农民的自杀企图（证明了），这些一次性暴露在急性中毒剂量范围内（的事故），最常见的症状记录是一个短暂意外暴露在4000(mg)单位的草甘膦后的轻微胃肠功能障碍(Roberts et al., 2010）。草甘膦的急性剂量也影响心血管系统(Gress et al., 2014)，对其基本的电生理机制进行了研究(Gress et al., 2014)。死亡与较大的年龄密切相关，中毒原因和血浆中高草甘膦的浓度有关 (>734 µg/mL)(Roberts et al., 2010)。极端（情况下的）曝露值（约100-200毫升的纯制剂摄入）可引起呼吸、心脏、肝肾功能损害（Bradberry et al.，2004）。故意中毒（自杀未遂）案例中，有吞下了500毫升的（potrebic et al.，2009）

诶，诶，诶，诶，诶，诶，诶，诶，诶，诶，诶，诶，

其实我觉得转基因食品没有这么大危害吧。。。。。

这个样子实在是太可怕了。。

为了将草甘膦除草剂监管试验的结果单独包括在内，我们使用了在欧洲和美国为草甘膦商业化批准的基础的监管报告。然而，我们被包这些报告的预商业化发表的状态和保密限制（无法得到这些报告）。我们要求法国代理食品、环境、职业健康和安全部（ANSES）提供对草甘膦和以草甘膦为基底的除草剂的健康评价的原始数据。ANSES并没有掌握草甘膦的所有原始数据。此外，也缺乏农达草甘膦的短期和长期对血液参数影响的数据。(Mortureux, 2013).在欧洲，我们采用了德国authorities'draft行业研究评估报告（DAR） (Germany Rapporteur Member State,2015)德国是欧盟允许草甘膦上市的报告人。由于DAR研究所的研究报告和原始数据没有公开，我们无法独立评估这些研究，因此我们考虑了汇总数据。卫生署的健康评估DAR主要基于草甘膦研发团队自己提供的研究。（25家企业为了进入欧盟市场而更新草甘膦注册信息，这成了我们的信息来源）有些是通过删除多余部分和改正明显错误来修正的。(Germany Rapporteur Member State, 2015).每一项(关于草甘膦的）新研究都得到了评价。以前欧盟评估的一部分研究也根据现行的质量标准进行重新评估。广泛的技术数据库搜索文献用以创建DAR（健康评估）。因此，这是最全面的管制报告，将150项新毒理学研究的结果分组，并审议了900份科学期刊的出版物，其中200份出版物进行了详细审查。对于美国，我们使用了2011年美国森林服务草甘膦的风险评估报告 (USDA Forest Service, 2011)和美国EPA 1993年重新登记资格的决定（RED)情况说明书 (U.S.EPA, 1993)
2、草甘膦的商业配方中添加的其他成分
草甘膦基除草剂（GlyBh）一般都是在36-48%含量，由10%的草甘膦原液，水，盐和佐剂如乙氧基化烷基胺（POEA）。草甘膦离开它的佐剂从不单独使用，它（佐剂）通过促进其（草甘膦）毒性来允许和提高其除草活性。然而佐剂被认为是惰性的稀释剂，因为它们不被认为是直接负责农药的活性。为了监管目的，它们（佐剂）被归为机密。然而，混合物中的一种成分（草甘膦的配方）在植物中是活性的，并不意味着这种成分是混合物中毒性最大的，无论是对人类还是其他多种生物来说。有一种无法言喻的，普遍认为对植物代谢的活性成分（草甘膦）是草甘膦基制剂对非目标物种的最有毒的化合物。在监管层面，单独检测草甘膦对哺乳动物的健康，进行长期的体内慢性、发育和生殖研究。它（单独草甘膦的研究）导致了ADI的计算和其他草甘膦的管理规范，即使它从未使用过这种形式，实际中草甘膦只是作为商业制剂中混合剂的混合物的一部分。
不同品牌和不同国家之间的（草甘膦）配方有所不同，由于这种变异的佐剂（不断变化的佐剂），因为他们中的大多数都没有（被要求）强制申报，草甘膦基除草剂的影响是复杂的，混合作用的结果。因此，文献中所描述的影响大相径庭。事实上，并非所有的作者都清楚地表明他们已经使用这草甘膦基除草剂(Chan et al., 2007; Hokanson et al., 2007; Sivikova and Dianovsky, 2006),，混乱的产品或佐剂(Contardo-Jara et al., 2009; Gehin et al., 2005).例如，并不是所有的佐剂混合物都包含POEA。在材料和使用方法上可见，“草甘膦”往往是写成“农达”(Cavusoglu et al., 2011; George et al., 2010),或“农达（草甘膦）”被写起来就像草甘膦除草剂单独相当于草甘膦(Stachowski-Haberkorn et al., 2008).因此，论文的作者们对正在评估的是草甘膦（原液）还是以草甘膦基底的混合制剂尚不清楚。

总有看不见的秘密武器在谋财害命

3、草甘膦的肝肾毒性
肝脏和肾脏是是消化道中毒的第一终点。由于观察到在农民的慢性肾病的发病率增加，(Jayasumana et al., 2015),一个值得关注的问题是：（农民）可能暴露在日常使用草甘膦基除草剂的环境中对肾脏和肝脏的影响。
监管的毒性研究概述：
草甘膦的慢性肝肾毒性研究由（草甘膦）的制造商根据经济合作与发展组织（OECD）第453号指南研究了（草甘膦）慢性毒性和致癌性。我们没有分析急性研究（仅仅28天或更少），因为他们是在致死剂量范围内普遍的使用剂量，或短时间内显示刺激性质的讨论，没有血液分析。对于环境暴露的副作用，这些信息并不是很有用，急性中毒症状的特点和机制已经广为人知 (Bradberry et al.,2004; Roberts et al., 2010).
在去年，欧盟授权进行了草甘膦监管评估，对大鼠长期研究，100 mg/kg bw/d被认为是基于四项研究的综合评价整体NOAEL(Germany RapporteurMember State, 2015)，整体LOAEL被设定为350 mg/kg bw/d(350 毫克/公斤或体重/天，下同），即使在低剂量下观察到了临床化学参数的改变，（这是）我们总结了上一次欧洲报告员报告中提出的长期毒性研究（发现的）(Germany Rapporteur Member State, 2015).
在一个草甘膦（纯）研究中（报告参考IIA，5.5.2 / 04），血清和尿生物化学的差异被发现并报告。其中，碱性磷酸酶（AP）的活性从10 mg/kg bw/d开始增加，在所有性别的5次采样中（均体现），尽管差异并不是统计上显著的。在临时牺牲中(可能为毒性加量测试），雄性雌性的肝脏重量在100 mg/kg bw/d以上时出现重量减少的现象。在雄性试验组的同一剂量的另一个组织病理学发现降低了肾病的发病率。其他两项剂量研究为~3，10和30 mg/kg bw/d，参考IIA 5.5.2/05研究，和~100 mg/kg bw/d参考IIA 5.5.2/06研究，导致一些偶尔的生化变化，这些变化不被认为是相关性的，因此在评估报告中没有报告。第四研究(参考IIA, 5.5.2/01, 剂量在7.4, 73.9,和740 mg/kg bw/d),导致肝毒性作用的最高水平。
在新的2014次评估中，增加了5项草甘膦长期研究报告(Germany Rapporteur Member State, 2015).第一项研究（IIA，1 / 01），由先正达执行（试验），使用Wistar大鼠试验剂量在154 mg/kg bw/d，发现AP活性与剂量相关的增加。研究二（IIA，5.5.2 / 02）报告了与急性中毒症状一致的高水平的一般毒理学效应。在低剂量组（约100 mg/kg bw/d），雄性有一个显著的自发活动减少和一个显著的呼吸缓慢和皮毛变脏的现象。在同一剂量及以上的剂量，AP活性也增加。同组雌性的上睑下垂和触觉脱发的发生率显著增加。第三项研究(IIA,5.5.2/07)使用不一致的高级别，在我们的此次标准以上。在第四项研究中(IIA, 5.5.2/03)，草甘膦的剂量在133，399和1356 mg/kgbw/d,从低剂量观察到AP活性增加的趋势（不显著）。在这两个最高层次上观察到的其他变化在这里（报告里）没有详细说明，第五项研究(IIA, 5.5.2/08)，Wistar大鼠试验剂量为95，317和1230 mg/kg bw/d，观察到AP活性短暂升高，证实了在许多其他草甘膦研究中的发现。
第一个试验(IIA, 5.5.3; 剂量为15、151和1460 mg/kg bw/d)，第二个试验（(IIA, 5.5.3/02; 剂量为85、267和946 mg/kg bw/d),和第三个长期试验(IIA 5.5.3/03; 剂量为159、812和4232 mg/kg bw/d)没有报告在相关水平下对肝脏或肾脏的毒性作用。关于其他老鼠毒性研究的细节未列入欧盟监管员（国）的报告中(Germany Rapporteur Member State,2015).
同行评审文献
人们对草甘膦在肝脏中的毒性机制有很好的了解。自1980年代以来，人们就知道草甘膦对肝脏影响，其中草甘膦在15 mg/kg bws时就能破坏大鼠的肝线粒体氧化磷酸化(Olorunsogo etal., 1979).在剂量为85 mg/L的草甘膦（农达）试验时，观察到大鼠肝线粒体琥珀酸依赖性呼吸指数下降(Peixoto, 2005)，事实上，草甘膦作用在线粒体琥珀酸脱氢酶琥珀酸结合位点。(Ugarte,2014).电子显微镜分析显示：肝细胞暴露于草甘膦后，减少了呼吸活性和降低转录/剪接活性(Malatesta et al.,2008).
草甘膦是一个强烈的金属离子螯合剂，可以螯合如铜、锰、钴、铁、锌，以及钙和镁(Lundager Madsen et al., 1978),最初也是因为这个螯合特性而获得的专利(U.S. Patent No. 3,160,632, 1964)草甘膦作为螯合剂能力，部分解释了其对线粒体链的解偶联作用(Olorunsogo, 1990)此外，事实上，草甘膦作为一个质子载体(Olorunsogo, 1990).增加线粒体膜对质子和钙离子的通透性，也可以解释草甘膦单独引起了（诱导）的氧化应激(Astiz et al., 2009a)或其体内制剂(El-Shenawy, 2009)从体外实验中获得分子理解(Gehin et al., 2006).事实上，钙离子被认为是线粒体活性氧（ROS）积累的主要刺激因子之一，因为它促进了线粒体内膜结构的改变(Kowaltowski andVercesi, 1999).它也能改变线粒体呼吸链，因为该系统的大部分成分是完整的线粒体膜蛋白(Kowaltowski and Vercesi,1999).
这些数据显示了其螯合剂（特性）或佐剂的囊泡形成能力，都是其作为内在洗涤剂性能的一部分。实际上，农达商业配方（草甘膦基配方除草剂）已被证明是比单独的纯草甘膦，在线粒体水平毒性更大，因为配方中的佐剂能诱导(加剧)大鼠线粒体非特异性膜通透性(Peixoto, 2005). 这种氧化应激（反应）也解释了对其他器官造成的损伤。当大鼠睾丸细胞暴露在农达（草甘膦基除草剂）36 ppm下30分钟后诱导了氧化应激，激活多种应激反应途径导致青春期前大鼠睾丸中塞尔托利细胞死亡。(de Liz Oliveira Cavalli et al., 2013).当草甘膦剂量为10 mg/kg bw/d，每周三次会激活在肝脏、肾脏、大脑和血浆中的抗氧化防御系统。(Astiz et al., 2009c).
然而，大多数（试验）结果是在大于人口暴露的剂量下获得的（人群日常接触剂量）。我们有一个进行了2年之久的研究，使用的是10只SD大鼠（Sprague-Dawley），分别给予0.1 ppb的草甘膦制剂（含有45ng/L混合助剂的草甘膦）在饮用水中(Séralini et al., 2014).这个级别相当于一个容许在饮用水草甘膦基制剂(GlyBh)残留浓度，我们揭示了肝肾毒性的迹象，以及在试验进行到第十五个月时出现的尿液和血液生化和内分泌激素紊乱。在另一项研究中，d在对大鼠进行的草甘膦试验中，草甘膦给药浓度为4.87mg/kg，每2天给药一次，共计75天，结果导致肝漏的丙氨酸转氨酶(ALAT)和谷草转氨酶(ASAT)，提示肝细胞不可逆损伤。(Benedetti et al.,2004)。当大鼠暴露于草甘膦0.09 mg/kg bw/day（0.7ppm在饮用水含量），巴西内陆水域允许的水平(美国EPA 2011年）会导致肝和肾中谷胱甘肽水平升高，谷胱甘肽过氧化物酶活性增强(Larsen et al., 2012).农达（草甘膦）触发外源性代谢酶的活化会导致肝中毒的结果。在90天的暴露(试验)后，草甘膦溶解于水含量为0.7ppm，雄性大鼠中CYP1A1/2和CYP3A依赖性酶被抑制(Larsen et al., 2014)。当大鼠终生暴露在饮用水低达0.1 ppb水平含量的草甘膦中，可以观察到CYP1A1/2和CYP3A酶被破坏了。(Séralini et al., 2014),并在肝细胞的细胞系中得到证实(Gasnier et al., 2011).

转基因的食物太多了。特别是很多加工食物，你都不知道里面有没有转基因的。必须要统一标注。自己要吃什么，总应该有知情权和选择权！

这么大一段，是哪里抄来的！

8、一般性讨论和结论性发言
8.1 草甘膦的佐剂、污染物或代谢物也证明了毒性
草甘膦除草剂农达与草甘膦的差别效应（表1和2）在所有哺乳动物体内的几乎所有同行评审的研究中都观察到(Adam et al., 1997;Peixoto, 2005)和在其他物种中(Folmar et al., 1979; Frontera et al., 2011; Moore et al.,2012; Tsui and Chu, 2003).整个配方的毒性增加相对于草甘膦，与所谓的活性原理相比，配方草甘膦显然与佐剂有关。它们本身可能有毒，或有助于更好地吸收环境污染物，从而增加了暴露(接触)生命体的身体负担。农药制造商赞助的评论也强调了这一点(Williams et al., 2012)助剂的毒性是农药毒理学的一个普遍特征，特别是在世界主要除草剂的主要模型：草甘膦(GlyBh)，但也描述了其他农药(Eddleston etal., 2012)用于杀虫剂、杀真菌剂或除草剂的9种主要有效成分中，8种在体外对人体细胞的毒性比它们的制剂低1000倍，与一般信仰相反，农达是除草剂和杀虫剂中最毒的一种(Mesnage. et al., 2014).我们总结了草甘膦(GlyBh)主要佐剂的毒性作用(表3)
不同配方的佐剂的成分似乎是高度可变的(表3)。首先，似乎大部分测试都未完全测试过，慢性毒性试验与神经发育信息，生殖和遗传效应普遍缺乏。事实上，在本次调查中发现的佐剂或污染物的毒性是高度可变的。有些是相对安全的（山梨酸、壬酸或甘油为例）有些则有剧毒（乙氧基化佐剂），有些甚至被认为是致癌物质（对羟基苯甲酸甲酯、邻苯基苯酚钠、甲醛和1,4-二氧六环），有些可能本身是内分泌干扰物。然而，他们都有相同的毒性分类时，包括在农药制剂(农药助剂)，但当它们被宣布为其他产品中的活性成分时就不是(有毒化学物质)。
我们专注于POEA作为一个草甘膦(GlyBh)辅助模型，因为它是一个在草甘膦(GlyBH)配方使用的主要表面活性剂。看来，POEA比在三个不同的人类细胞系草甘膦毒性更大的10000倍，因此是一个很好的草甘膦(GlyBh)继发的副作用的候选人。(Mesnage et al., 2013)这一发现不能仅仅归因于与细胞培养有关的现象，由于POEA也在人类和大鼠急性暴露的健康带来了严重的后果(Adam et al., 1997;Bradberry et al., 2004).POEA的毒性也被其他模型所示，例如，在两栖动物、甲壳动物、鱼类和细菌体内(Folmar et al., 1979; Mann andBidwell, 1999; Mitchell et al., 1987; Tsui and Chu, 2003).
当自来水、食品或饲料中发现农药残留时，它们来自于总的配方，而且永远不要只从活性成分中提取，(它们)从来没有单独使用过。大量佐剂的使用(也称表面活性剂)，使得它们(或它们的分解产物)可以发现在环境(Berge et al.2012)和食品中(Shao et al., 2007;She et al., 2012).一些辅料如醇乙氧基化物可以从农业区采集的地表水和土壤孔隙水中发现(Krogh et al., 2002)事实上在水生环境中，POEA的半衰期(21-42天)甚至超过草甘膦(7-14天)(Giesy et al., 2000).其他污染物如增塑剂也可以起到佐剂的作用。这可以应用于壬基酚，一种已知的内分泌干扰物，作为表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚的形式(Vinas and Watson, 2013)被发现是环境中的污染物(Selvaraj et al., 2014).在最近的一项研究中，所有的蜂蜜、花粉(She et al., 2012)和蜡样品都受到高浓度(高达10 ppm)的壬基酚聚氧乙烯醚污染(Chen and Mullin, 2014)
必须将接触单一配方农药被视为共同接触到活性成分和佐剂。对佐剂毒性作用的了解，仅使用草甘膦作为慢性试验中唯一有效的原则。还应该对配制的杀虫剂进行监管测试，以更好地估计健康风险。我们鼓励监管机构要求对草甘膦制剂进行全面的重新评估，而不仅仅是草甘膦，特别是通过与环境有关的剂量对哺乳动物进行全寿命试验，在详细的血液和尿液分析中，考虑到内分泌学和表观遗传学的原理。

《草甘膦除草剂是人类细胞系的有毒物质和内分泌干扰物》
(Glyphosate-based herbicides are toxic and endocrine disruptors in humancell lines)
作者：Céline Gasnier a, Coralie Dumont b, Nora Benachour a, Emilie Clair a, Marie-Christine Chagnonb,塞拉利尼等
摘要：
草甘膦除草剂是世界上使用最广泛的除草剂，它们以不同的剂型进行商业化。它们的残留物是环境中常见的污染物。并且，这些除草剂大多数喷洒在食用转基因植物上，植物被改性以耐受细胞中这些高浓度的化合物。在某些饲料中，其残留量可达400 ppm。我们用人肝癌HepG2细胞来试验，HEPG2是研究外源性毒性的一个著名模型，对四种不同的配方的草甘膦，这通常是在体内慢性调节研究中单独进行的。我们用三种方法来测定细胞毒性(Alamar Blue®, MTT, ToxiLight®),再加上遗传毒性（单细胞凝胶电泳），抗雌激素（ER，ER）和抗雄激素作用（AR）利用基因报告试验。我们还通过芳香化酶活性和M rna检测雄激素对雌激素的转化。所有配方的所有参数在24小时之内在亚农业剂量下中断，这些影响比草甘膦浓度更依赖于配方。首先，我们观察到的人体细胞内分泌干扰是从剂量0.5 ppm在mda-mb453-kb2细胞雄激素受体的最活跃的配方（R400），剂量2 ppm时，雌激素受体对HepG2细胞的转录活性也有抑制作用。芳香化酶转录和活性从10 ppm中断。细胞毒性作用在10 ppm Alamar blue测定开始（最敏感），5 ppm时DNA损伤。因此，草甘膦除草剂在食物、饲料或环境中残留的真实细胞影响必须加以考虑，讨论对他们的分类为致癌物质/突变剂/有毒物。

图一(解释)：草甘膦(G)和四种草甘膦基制剂(含7.2-450 g/L G的抗草甘膦除草剂)对暴露后24小时HepG2细胞存活的剂量依赖性效应。通过MTT试验评价这些影响(a)或(b)toxilight法。结果以%相对未处理的细胞(100%活力,A)或相对于未经处理的细胞的相对水平(URL:1,B)。细胞在37◦C生长（5% CO2、95%空气）中含10%血清在48小时至80%汇合48以及MTT试验或96孔板ToxiLight板，然后暴露24 h的产品无血清。所有实验均重复3次重复4次。
表格一：对人肝癌HepG2细胞比较最初的毒性与草甘膦制剂由三种不同的方法测定LC50（见2节）

初期毒性对应于产品，引起第一个显著的影响。(大约10%的毒性)，草甘膦（G）的百分比或不同农达配方中在不同浓度（7.2～450 g/L）的农达（R）
试验结果：
在我们的实验中，HepG2细胞在控制介质中的生长速度一般在32小时左右。所有草甘膦为基础的配方，与草甘膦单独（MTT法中的毒性为1%）相比，仅在24小时内，根据配方和试验诱导细胞存活率迅速下降。（图1和表1）达到了终点为：线粒体呼吸活性（MTT图1A和阿拉玛蓝，最敏感的检测，表1）或细胞膜损伤（图1B）。死亡率在所有农达中都是剂量依赖的,但对草甘膦浓度无剂量依赖性.这是第一次由三种具体方法证实。细胞毒性最强的配方(400 g/L of G) ,不是含草甘膦(G)浓度的最高。两种制剂表现出相似的中毒性 (7.2 and 360 g/L of G)，另外两个显示毒性高20到200倍 (400 and 450 g/L of G,图1)。LC50和初始显著毒性的不同的值（约为10）的各种配方是在相同的范围内，无论试验：R400 > R450 > R360 > R7.2(表一）
图二：

图二：DNA损伤（从1类到3类增加，单细胞凝胶电泳），HepG2细胞暴露于不同浓度下的R400，24小时 (0: 对照 C, 1–10 ppm)，苯并[a]芘 (50 M, B[a]P) 作为阳性对照。所有实验重复3次，对100个细胞一式二份
在HepG2 DNA 在R400暴露24小时后效果如图二所示，在我们的条件下，我们观察到大约50%DNA链在5 ppm断裂(25% 1类, 11% 2类和15.5% 3类)，这种效应呈剂量依赖性，2类(27%)和3类(36%)急剧增加，揭示主要损害在10 ppm，对应于24 M 草甘膦G溶解在特定的佐剂，这激发了大约75%个DNA片段(损伤)与阴性对照中为35%相比。阳性对照，著名的前诱变剂苯并芘[a]芘，诱导95%损害，但浓度大约是2倍(50M)。这一结果清楚地表明，人肝癌细胞株(HepG2)的DNA是由草甘膦基除草剂损伤。
图三：

图三：农达(R)对肝癌HepG2细胞的胱门蛋白酶3/7活性诱导细胞凋亡，相对胱门蛋白酶3/7活性（%无血清培养基对照，M）农达R在60 ppm，时间在24小时后或48小时。治疗前细胞与血清汇合达80%
R450无毒剂量(60 ppm,图3)在24小时后3/7被激活的胱门蛋白酶比例高达156%，它们的水平在48小时内大大提高到765%，R(农达)能诱导细胞凋亡。(M没变化，笔者注)
图四：

图四：草甘膦(G)和四种农达制剂对HepG2细胞的芳香化酶活性的剂量依赖效应(粗线)和mRNA的表达水平。分别评价这些毒性水平对于%对照组，在芳构化的氚化水的释放，半定量RT-PCR。细胞生长如图1然后24小时暴露外源性物质。所有实验均重复3次一式三份。p＜0.01(**)和p＜0.05(*)有统计学意义的差异。
我们得到了草甘膦基除草剂与人类细胞内分泌活动的干扰，低于初始中毒剂量(约LC10)，已知至少三种细胞毒性试验中的两种。我们开始研究不可逆性类固醇转化，芳香化酶的基因表达变化。酶活性和特异mRNA水平都被评估(图4)。单独的草甘膦(G)是不活跃的，而所有的制剂都抑制雄激素对雌激素的转化，在下面的LC50和在24小时内。同时，所有配方对芳香化酶和mRNA水平双相作用，在大多数情况下增加130-250%，然后恢复正常。R400是抑制然后跟着增加，这些影响是不易成正比的线性。
图五：

图五；草甘膦(G)和四种草甘膦制剂的剂量依赖效应在ERα, ERβ(A，左侧)瞬时转染HepG2细胞的转录活性(ERE-TK-荧光素酶)和AR(B，右侧，测量MDA-MB453-kb2细胞)。这些毒性低于毒性水平（除了最后剂量的规模）进行了评价，分别在24小时后，%对照组。10−8 M雌激素17的ER和10−10M DHT的AR活性。所有实验均重复3次一式三份，统计上有显著差异p < 0.01(** for ERα and AR, ## for ERβ).
此外，我们还观察到低剂量下雌激素和雄激素依赖性转录活性的紊乱。这些都是相当线性和剂量依赖性（对R农达，不是G草甘膦）在每一个配方的情况下，在被测试值的范围内，暴露24小时后（图五）。相应的IC50测定（见表二）。所有草甘膦基除草剂，常见抗雌激素谱分布为ER和抗雄激素的显示，根据该曲线的斜率（图五 A、B）。单独草甘膦(G)无抗雌激素活性，但显然是抗雄激素副农业和非细胞毒浓度。即使数据显示，ER转录活性也同样受到影响，有一些配方特点：R400明显2倍活跃ERβ、R450和ERα。最毒的制剂是最低的非细胞毒性剂量的抑制剂，对细胞内分泌活动（图五）。除了R450配方似乎抗雄激素比抗雌激素的更多。我们可以对农达(R)抑制效率进行分类：从R400 > R450 > R360 > R7.2，最强抑制剂和最低抑制剂之间相差300 - 800倍（见表格二）
表格二：
对于不同的草甘膦制剂对HepG2细胞的IC50类固醇激素受体的比较

草甘膦在7.2，360，400或450 g/L在四种草甘膦除草剂农达(R)中，%农达(R)在第一线，在第二行的相当于草甘膦G浓度(uM)。这是对雌激素受体（ERα和β）转染HepG2测试和乳腺癌细胞株MDA-MB453-kb2

《草甘膦除草剂在体外诱导成熟大鼠睾丸细胞坏死和凋亡，睾酮水平降低》
A glyphosate-based herbicide induces necrosis and apoptosis in mature rat testicular cells in vitro, and testosterone decrease at lower levels
作者：Émilie Clair a,b, Robin Mesnage a,b, Carine Travert a, Gilles-Éric Séralini
摘要：
世界上使用的主要除草剂，农达（草甘膦除草剂），一个基于草甘膦的农药助剂。草甘膦在植物中的活性成分及其主要代谢物（AMPA），是地表水的第一类污染物。农达正在日益被用于特别是种植在食物和饲料上的转基因植物上，导致作物含有草甘膦残留物。在这里，我们测试草甘膦及其制剂对成熟的大鼠睾丸细胞的影响，从1到10000 ppm，像这样从人类尿液和农业环境水平的范围。我们发现，从1至48小时的暴露在农达的睾丸间质细胞受损。在24-48小时内，这种配方对其他细胞也有毒性，主要是坏死，与纯草甘膦相反，配方草甘膦对塞尔托利细胞基本上是有毒的。随后，它也在生殖细胞和塞尔托利/生殖细胞共培养中诱导高剂量的细胞凋亡。在低毒性浓度农达和草甘膦(1ppm)，主要的内分泌紊乱是睾丸素减少35%。因此，农药在极低的环境剂量下会产生内分泌影响，但只有高污染才会引起急性大鼠睾丸毒性。这并不意味着没有经过充分测试的慢性毒性，只能在监管试验中使用草甘膦。
3、试验结果
图一：

图一，农达（实心圆）或草甘膦的影响（空的钻石形）的DMEM/HAM F12中型培养24 h后火（左侧）或48小时（右侧），对间质细胞（A和B），与生殖细胞+Sertoli（C和D），纯化的Sertoli（E、F）和生殖细胞（G和H）测定腺苷酸激酶活性。通过腺苷酸激酶活性测定表明：农达草甘膦Bioforce的毒性和纯草甘膦对睾丸细胞的原代培养毒性。细胞暴露于不同剂量的农达草甘膦Bioforce或等效剂量的纯草甘膦在DMEM/Ham F12 96威尔斯板介质在32℃(5% CO2、95%空气)在24小时、48小时。农达草甘膦与纯草甘膦在相同的pH值中使用，所有浓度的研究重复三次，在三个不同的实验中。细胞死亡的结果是相对发光单位（R.L.U）与对照组相比。SEMs在所有实例中显示（Anova测试p < 0.001 ⁄⁄⁄⁄; p < 0.005 ⁄⁄⁄; p < 0.01 ⁄⁄ and p < 0.05 ⁄)
对纯草甘膦G和农达制剂R的细胞毒性，从50 ppm的农业工作稀释度（200倍），70日龄分离的成年大鼠睾丸细胞同时测定：睾丸间质细胞，Sertoli+生殖细胞，纯化Sertolit，最后单独生殖细胞。显著的膜的降解是农达R在睾丸间质细胞引发的细胞在24小时内从0.1%(1000 ppm), 因此，在相对较高的水平，但低于农业最低稀释10倍(图1)。这种趋势在1小时的试验中非常迅速，并且是持久的。(图2)在高剂量时，这种现象增加了五倍，只有在这些剂量下，睾丸间质细胞的反应在试验48小时后大约有50%的抵抗力。(图1,b)此外，在0.05%（500 ppm）24小时后，单独的sertoli细胞也敏感(但最多两倍于对照组)。相比之下，在生殖细胞存在下，Sertoli细胞对除草剂诱导的死亡率几乎不敏感，就像单独生殖细胞一样(图1,c,d,g,h)这并不排除其他高剂量的有限光现象(图1g)。研究了对农达R最敏感的睾丸间质细胞膜降解动力学(图2）农达R的细胞毒性在1小时后已经观察到，从那时起到24小时是最大的。我们证实，单独草甘膦G在睾丸间质细胞24小时内无作用。
图二：

图2，农达或单独草甘膦试验（空钻石形）1～24小时后睾丸间质细胞膜降解的细胞死亡动力学。农达毒性（Bioforce）和单独草甘膦通过腺苷酸激酶活动指示膜退化像以前测定。有关更多细节，请参见图1。
通过农达R引起的3/7胱门蛋白酶活性降低也观察到死亡的迹象。这一点在所有细胞中非常相似，大约从0.1%(1000 ppm)到24-48小时的最大效应(图3)。这些作用在睾丸间质细胞膜降解相媲美，并明确表明主要坏死。然而，单独草甘膦G诱导的生殖细胞和Sertoli+生殖细胞混合物中，诱导细胞凋亡在48小时内0.5%(5000 ppm)(图3,h)在1000 ppm的睾丸间质细胞中也观察到轻微的凋亡诱导。对睾丸间质细胞胱门蛋白酶3/7活性的动力学研究结果与图2中的结果完全一致：这些活动与R的减少在1到24小时之间从0.1%（1000 ppm）放大（图4），在6小时后达到最大值。此外，试验6小时后，农达R先开始然后是G在睾丸间质细胞中诱导一个准时的凋亡现象。这些细胞的细胞核（图5）显示农达R（1%）24小时后染色质清晰。这是程序性细胞死亡的特性。单独草甘膦G（1%）或农达R浓度低于（0.05%）睾丸间质细胞，总是在24 小时，观察增加DNA压实。在睾丸间质细胞膜降解和胱门蛋白酶3/7测量，在24小时内还测量了hCG的存在或不存在，LH的人类同源基因（图6），生理刺激激素。因此，在hCG存在下，睾丸间质细胞的细胞毒性得到证实，但略有减少或延迟。关于内分泌干扰研究，农达R和草甘膦G在非细胞毒性剂量对细胞3b HSD活性没有影响（图7）然而，放射免疫法测定睾酮的产生，被1 ppm的草甘膦G和农达R抑制(图8)。这是没有的情况下对雄激素和雌激素受体（A和B）的mRNA表达水平（图9b–D）。相比之下，草甘膦G明显增加但准时（农达R带灯的趋势）的芳香化酶mRNA（图9a），在10 ppm水平。
图3：

图3。农达或草甘膦的影响（空的钻石）24小时后（左）或48小时（右）胱门蛋白酶3/7活性睾丸间质(a和b),sertoli+生殖细胞(c和d)，纯sertoli(e和f)和生殖细胞(g和h)。对胱门蛋白酶3/7测定的影响进行评估。所有条件与以前相似（参见图1图例），在三种不同的实验中，每种浓度的研究重复两到三次。结果在相对发光单元，相比未处理细胞(对照组1)。SEMs也在所有情况下显示 (阿诺瓦测试 p < 0.001 ⁄⁄⁄⁄; p < 0.005 ⁄⁄⁄; p < 0.01 ⁄⁄ and p < 0.05 ⁄).
图4：
图4，农达或单独草甘膦（空心钻石）1–24小时处理后胱门蛋白酶3/7活性在睾丸间质细胞动力学。农达(Bioforce)或单独草甘膦细胞毒性，通过胱门蛋白酶3/7活性像以前所有其他细节进行测量(参见图1的标题)每种浓度的研究在三种操作中重复两次。
图5：

图5，农达或单独草甘膦DAPI标记的细胞核染色质浓缩研究(a-d)和细胞方面(e和f)对初级睾丸间质细胞培养，在DMEM/Ham F12培养基24小时后的试验。染色质的明亮凝聚显示凋亡细胞（放大率400）。黄色箭头显示正常染色质凝聚，蓝色箭头显示致密染色质。DAPI标记（a）控制细胞，(b)用草甘膦1%处理的细胞，(c)农达 0.05%，(d)农达 1%，(e)控制组未染色细胞和(f)农达1%
图6：

图6：农达或单独草甘膦（空钻石）在培养基与睾丸间质细胞试验24小时后补充或不补充hCG（较大的符号）的影响。农达(Bioforce)和单独草甘膦的细胞毒性进行了评估，对间质细胞的原代培养，通过腺苷酸激酶(a)和胱门蛋白酶3/7(b)的活动，如前所述(见图1，3的说明)在三个不同的实验中，所有不同浓度的研究重复三次。SEMs也显示了。
图7：

图7：农达(Bioforce)和单独草甘膦在DMEM/Ham F12 培养基试验3β-HSD睾丸原代细胞活性24小时后。细胞暴露于不同剂量的农达(Bioforce)或等效的细胞毒性剂量草甘膦在DMEM/Ham F12 96-威尔斯板介质在32℃（5% CO2、95%空气）在24小时期间。农达和草甘膦在类似的PH值中使用。每个浓度的研究重复三次，三种不同的操作。SEMs在所有情况下所示（阿诺瓦测试 p < 0.001 ⁄⁄⁄; p < 0.01 ⁄⁄and p < 0.05 ⁄）
图8：

图8：农达(bioforce)和草甘膦对暴露于各种细胞毒性浓度24小时的睾丸间质细胞在原代培养中产生睾酮的研究。在32 C时在外源性物质的存在或不存在，采用放射免疫分析法测定原代睾丸间质细胞培养液中分泌睾酮的变化，每种浓度的操作在三种操作中重复三次。SEMs如图所示(阿诺瓦测试 p < 0.001 ⁄⁄⁄⁄; p < 0.005 ⁄⁄⁄; p < 0.01 and ⁄⁄ p < 0.05 ⁄)
图9：

图9：农达和草甘膦对芳香化酶、雌激素α、雌激素β及雄激素受体mRNA水平的影响。24小时在6-威尔斯板的睾丸间质细胞暴露在各种细胞毒性浓度的农达和草甘膦后，回收细胞颗粒，利用trireagent法(∑–奥德里奇)提取总RNA。每种浓度的操作在三种手法中重复三次。SEMs如图所示 (Anova test p < 0.001 ⁄⁄⁄⁄; p < 0.005 ⁄⁄⁄;p < 0.01 and ⁄⁄ p < 0.05 ⁄)