回复：转基因食品的最大问题是慢性剧毒持久毒害人体健康

问题是我们连非转基因的种子都买不到了~不是吗？我们别无选择了！

《长期喂食转基因玉米NK603xMON810对于繁殖小鼠的生物学效应研究》
Biological effects of transgenic maize NK603xMON810 fed in long term reproduction studies in mice
作者：Dr. A. Velimirov, Dr. C. Binter, Univ. Prof. Dr. J. Zentek
摘要
在本研究中使用了三种设计，包括多代研究(MGS)、持续育种(RACB)的生殖评估和终生喂养研究(LTS)，均与实验鼠一起完成。测试饮食的不同之处在于，在加拿大的相同条件下生长，除了转基因NK603 x MON810玉米(GM)与非转基因玉米(ISO)的不同，其余都一样。MGS还包括一组在奥地利种植的非转基因玉米(REF)。
食物组成：
转基因组(GM)：33%的转基因玉米(NK603 x MON810)
对照组(ISO)：33%近等基因系玉米（非转基因天然玉米）
参考组(REF)：33%奥地利产本土非转基因玉米
饲料加工
饲料在饲料槽加工（tecniplast，hohenpreiß恩伯格，德国）作为餐饮食的造粒过程中避免在因为高温和压力导致蛋白质结构的变化。它已经表明，δ-内毒素是热不稳定（EPA 2003）。
父母的表现
第1代父母中，ISO组的1名雌性和GM组的3名雌性死亡，而ISO组的1名雌性在分娩前因不明原因死亡。
亲本繁殖
GM组与ISO相比，ISO组有更多的小鼠出现在N＞8。GM组原始一代和第二代出生幼崽较第三代更多。GM组幼崽出生的数量（除F2代）和断奶（所有人）都较低，幼崽死亡总是较高（转基因组生的少，死的还多）。所有数据都显示出高度的变化。在整个世代中，GM组的死亡率是ISO组的两倍（14.59%比7.4%）。

（分析：可以看到到转基因组第三代时，36.4%的小鼠不能生育，且每对小鼠仅能生育5.68只，相较第0代下降55%，生育数相比同代ISO组低20只，活到断奶数为5.23/对，死亡10只，死亡率0.71，是同代ISO的3.7倍，第1代死亡率是3.8倍，第2代死亡率是ISO组5倍。）
父母的生殖
在这20周内，我们进行4次RACB（通过不断的繁殖评估）。分配到ISO组和GM组各24对小鼠(雄雌各一)，所有4个ISO组的雌性(100%)分娩小鼠(表59)。在GM组，分娩量随着时间的推移而下降。在第4次，只发生了20次分娩(p = 0.055)。在GM组中出生的幼崽的平均数量一直较低，但在第三次分娩前并不显著。在第3组(p = 0.011)和第4组(p = 0.010)中，出生在GM组的幼崽数量明显减少，在第四胎(p = 0.025)中断奶。关于每一组的分娩总数，比在GM组(1035对844)中出生的幼崽要多。在断奶过程中，GM组的幼仔在第四胎中断奶的数量明显减少，但在整个世代断奶过程中，幼崽的数量减少了(只有在第三胎的p = 0.025)。

（分析：在同一窝小鼠多次不断繁殖试验可以看出，
1、到第4次生育时GM组已经有4组小鼠无法生育，16%无法生育率，而非转基因24队小鼠正常生育了4次毫无影响，GM组第3次时有4组小鼠未到断奶期（是否4组小鼠全死），GM组第4次时有1组未到断奶期
2、平均每队出生数，非转基因组全面领先转基因组，从第1次到第4次分别为(9比8.22、10.83比10.65、11.92比9.68、11.38比8.21，由0.78下降到0.18再到2.24最后竟达3.17只之多，下降竟达28%）
3、出生总数上，非转基因组出生总数同样领先转基因组，从第1次到第4次总数差距分别为（27只、15只、73只！、76只！），非转基因组4次的出生总数横向对比差距不大，生育总数平稳，转基因组出生总数则随时间推移下降明显，相比非转基因组，分别减少12.5%、6.76%、26%和28%。转基因组生育率比非转基因组低28%
4、断奶平均数，就是指幼崽从出生活到断奶的数字，非转基因组同样全面领先GM组，分别领先为（0.2、0.21、1.52、2.52只），死亡风险相对非转基因组分别高2.3%、2.1%、14.36%、26.35%！也就是说转基因组不光生的少，死的还多，生下来死亡风险比非转基因组高26.35%！
5、断奶总数方面，非转基因组领先只数为（13、15、47、62只），转基因组对比非转基因组死亡率高了6.5%、6.23%、18.5%和26.39%！）

楼主能做一个自己的总结吗？这些实验结果其实大多数人看不懂，也很少人去细细研究，我只知道，转基因挺可怕的，但却没有预防和阻止的办法，我们身边太多转基因了，而且是不被告知的

《苏云金芽孢杆菌不同δ-内毒素对斑马鱼的早期和成年生命阶段发展的遗传毒性评价》
Genotoxic evaluation of different δ-endotoxins from Bacillus thuringiensis on zebrafish adults and development in early life stages
作者：Cesar Koppe Grisolia a,∗, Rhaul Oliveira b, Inês Domingues b, Eduardo Cyrino Oliveira-Filho c,Rose Gomes Monerat c, Amadeu M.V.M. Soares
背景：利用苏云金芽孢杆菌毒素作为生物杀虫剂，在昆虫的生物防治和转基因植物中增加了它们在环境中的可用性。生态毒理学评价苏云金芽孢杆菌里的4种δ-内毒素cry 1Aa、cry 1ab、cry 1ac和cry2a进行了生态毒理学评价，探讨了对斑马鱼基因组和胚胎的不良影响。在100 mg/L浓度下暴露96小时后，Cry 1Aa提高了在成年斑马鱼外周血红细胞微核(MN)频率。暴露于二种混合物96小时后 (cry1Aa+cry 1Ac, 50:50 mg/L) 和 (cry 1 Aa + cry 2A, 50:50 mg/L)，也显示出显著增加MN频率。在胚胎幼年的研究中，所有的测试δ-内毒素都具有胚胎毒性和发育延迟特性，暴露于96小时剂量在25, 50, 100和150mg/L 。然而，每种毒素都呈现出不同的毒性反应模式，表明其毒理学评价应考虑特定的方法。
3结果
在实验中，在所有研究的苏云金芽孢杆菌esporo晶体菌株中，四个δ-内毒素中，只有cry 1 Aa增加了斑马鱼中的Mn频率(表1，p = 0.0009)。在二种混合物中进行评价时，cry 1Aa+ cry 1Ac和cry 1Aa+cry 2A的Mn频率显著增加(分别p = 0.0074和p = 0.0046)。表1显示了四个试验内毒素之间的所有可能的二元组合和影响微核MN的评价结果。
表1：四种δ-内毒素(或混合后)导致斑马鱼外周血红细胞微核MN频率增加的对照表

斑马鱼胚胎和幼虫的死亡率是在图2所示。在第一个48小时δ-内毒素似乎没有引起高死亡率在胚胎中，然而在72 小时和96 小时后死亡率高度增加(接近于100%！)，在浓度高于50 mg/L对计算所有内毒素（表2），（在72小时时死亡率分别接近60%、20%、40%、40%。在48小时死亡率为20%、20%、30%和30%）

胚胎发育的某些参数受内毒素的影响很大。在24小时，观察到缺乏耳石形成、眼色素沉着和尾部脱离的剂量依赖性反应（随着剂量增加，发病数增加）。由于这三个参数中的异常总是相关的，它们被视为一个单一的终点(图3)
图3：

(A) (灰色条)表明，除了cry2A外，对所有内毒素检查；100%的胚胎在最高浓度下暴露于24小时没有耳石、眼睛色素沉着或尾巴脱离。体色素沉着也证实，但没有发现异常反应的胚胎(未显示数据)。在48小时，有异常发育的胚胎(耳石器、眼色素沉着和尾部脱落)减少，特别是在第1Ab和2A中，复苏几乎完成(图3a)、黑条)。在Cry 1Aa和1Ac的胚胎中观察到缺乏体节的形成(在最高浓度的试验中分别为胚胎的96.9和81.3 %)。对于除cry 2A外的所有毒素，在暴露于某些浓度的胚胎中，胚胎心跳和尾循环都没有(见表2)。

在96小时δ-内毒素，Cry 1Ab和2A对暴露于最高浓度(150 mg/l)的幼鱼造成100%的死亡率。剩余的浓度会引起严重的行为干扰，其特征是缺乏对机械刺激(如用巴斯德吸管的软按压)的反应和保持平衡的困难(图3B)。对所有的δ-内毒素，特别是在Cry 1Aa和1Ab中的所有δ-内毒素，分别为32.1和36.9%的胚胎中观察到脊椎变形，在浓度为100 mg/L的表2时，对发育终点的总结分析，包括剂量反应参数的ec50值。
4讨论
由于没有关于这些δ-内毒素对斑马鱼的毒性和遗传毒性的数据，这项工作中选择的浓度是基于胚胎毒性研究。在100 mg /l时，四种内毒素引起严重的胚胎毒性(图3)作为一个指标，在成年鱼中也有一些不良反应。在这项工作中，Cry 1Aa的鱼类微核MN的数量表明了这种毒素的遗传毒性；此外，Cry 1Aa的存在确定了混合物的遗传毒性，如Cry 1Aa+Cry 1Ac和Cry 1Aa + Cry 2A，因为在单独评价时，Cry 1Ac和Cry 2A不会引起遗传毒性(表1)时。另一方面，二元混合的Cry 1Aa + Cry 1Ab，没有诱导斑马鱼中的Mn，即使存在δ-内毒素Cry 1Aa。然而，文献中的一些数据报告了鱼类红细胞Mn含量测定的低灵敏度，这可能导致低估遗传毒性。今后的工作应包括补充试验，如彗星试验，以便更准确地评估遗传毒性效应。经统计学分析，bt毒素具有显著的剂量效应关系，可能是对物种的具有诱变性。对Bt毒素的作用方式是通过对上皮细胞的细胞膜上的受体细胞的细胞毒活性，引起膜的破坏是其毒性本质。因此，在细胞内毒素可作为RNA聚合酶，DNA修复酶DNA转录的抑制作用。此外，细胞膜破裂而释放胞浆空泡微粒体酶，导致DNA的水解。这些会被认为是基因毒性作用机制。
与成年鱼相比，斑马鱼胚胎和幼虫的毒性试验表明，这些生命阶段的敏感性要高得多。这是特别令人担忧 的，因为物质的风险评估通常是基于成年鱼试验，低估风险评估。在胚胎尚未孵化的前两天，在这个测试中观察到的死亡率非常低，在最后2天(幼鱼)更明显。96小时- LC50值与δ-内毒素(87 mg/L)非常相似，但Cry 1ac ( 188 mg / l)的内毒素含量似乎少得多。与其他内毒素相比，Cry1Aa具有较低的毒性。尽管胚胎期死亡率低，但在此阶段，内毒素的作用已经可见，所有内毒素检查都证实了发育延迟。特别是对暴露于Cry的1Aa的生物体的影响，在计算了24小时对发育延迟23.5 mg/L的ec50。Cry 1Aa引起的反应在几乎所有的终点测试和孵化幼虫的脊椎变形率高的情况。相对而言，Cry 1Ab和2A也呈现类似的急性毒性水平(类似96 - LC50)，但具有较低的亚致死效应。在24小时观察到的发育延迟未在48小时得到验证，分析的许多数据没有受到影响。最后，Cry 1Ac在96小时的死亡率相对较低，且不规则的亚致死效应。在文献中没有发现关于支持对胚胎发育影响的结果的研究。所有的内毒素检查似乎是胚胎毒性，但具有不同的毒性，因为对终点的不同反应模式进行了分析。这一想法也得到了微核评估的支持，在这种遗传毒性中，即基因毒性只被δ-内毒素的Cry 1Aa引起。
最后，观察了对成年斑马鱼的遗传毒性以及胚胎毒性效应。此外，试验的每一种内毒素都有其特定的毒性，因此，不应该对Bt毒素进行一般性的风险评估，但可能考虑到它们的特殊性。内毒素和与其他化学物质之间的相互作用可能会发生，例如，在基因毒性反应中，Cry 1Aa和Cry 1Ab之间的相互作用。发表的著作还表明，Bt毒素可能与农药等化学物质协同作用

《在转基因大豆中鉴定巴西坚果过敏原》
Identification of a Brazil-Nut Allergen in Transgenic Soybeans
作者：JULIE A. NORDLEE, M.S., STEVE L. TAYLOR, PH.D., JEFFREY A. TOWNSEND, B.S., LAURIE A. THOMAS, B.S.,AND ROBERT K. BUSH, M.D.
背景。大豆的蛋白质部分中，蛋氨酸的相对缺乏降低了豆类的营养品质(大豆)。为了提高转基因大豆的营养品质，从巴西坚果( bertholletia)中引入富含甲硫氨酸的2s白蛋白。由于巴西坚果是一种已知的致敏性食物，我们评估了2s蛋白在转基因和非转基因大豆、巴西坚果和纯化的2s白蛋白中的蛋白质的过敏性，通过放射过敏原吸附试验测试(四个主题)和十二烷基硫酸钠-十二烷基硫酸钠凝胶电泳(9个)，用免疫印迹和放射自显影法测定了对巴西坚果过敏的人血清中的IGE。3个受试者还接受了大豆、转基因大豆和巴西坚果提取物的皮肤点刺试验，对来自巴西坚果过敏的4个受试者的混合血清进行了放射过敏原吸附试验，转基因大豆蛋白提取物抑制了IGE对巴西坚果蛋白的结合。在免疫印迹方面，9个受试者中的8个与巴西坚果纯化的2s白蛋白和巴西坚果和转基因大豆中类似分子量的蛋白质的血清IGE。对过敏源检测，三个受试者对巴西坚果和转基因大豆的提取物有阳性反应，对大豆提取物有不良反应。结论2s白蛋白可能是巴西坚果的主要过敏原，在本研究中分析的转基因大豆含有这种蛋白质。我们的研究表明，一种被称为致敏食物的过敏原可以通过基因工程转移到另一种食物中。(N EnglJ Med 1996;334:688-92.)
对坚果过敏是最常见的食物过敏症，过敏的巴西坚果是有据可查的。有关基因工程引入过敏性蛋白(去植物里)的研究已经引起人们的关注。通过重组DNA技术，将其他植物中富含硫蛋白的基因从其他植物中引入大豆是一种方法，来自巴西坚果种子(Bertholletia excelsa)的2S白蛋白被导入其他植物了，因为它分别由18%和8%的硫氨基酸蛋氨酸和半胱氨酸组成。来自巴西坚果的2S白蛋白基因已被引入大豆、9种烟草、油菜(Brassica napus)、豆科蚕豆(legume Vicia)和豆类(Phaseolus vulgaris)。我们的目标是确定来自巴西坚果的2S白蛋白在转基因大豆中是否能够将IgE与对巴西坚果过敏的人结合在一起。与过敏体质的人结合的蛋白质很可能是过敏原，因为直接超敏的机制是在敏感的肥大细胞表面的特异性蛋白质和特异性IgE的交叉连接，导致它们脱粒并释放出组胺和其他过敏性疾病的介质。
转基因大豆的提取物有效地与巴西坚果蛋白竞争，这些蛋白被绑定到固相，微晶纤维素，从受试者对巴西坚果过敏的血清中与IGE结合(图1)。转基因大豆提取物的抑制程度与原始巴西坚果提取物的抑制程度相似(图1)。在具有与转基因植物相同的遗传背景和类似蛋白质水平的非转基因大豆提取物中，没有遇到任何抑制作用。结果表明，转基因大豆提取物对大豆蛋白的抑制作用不是由于正常大豆蛋白或125I标记的抗人IGE的非特异性结合作用所致。用转基因大豆和巴西坚果提取物获得的平行抑制斜率表明这两种提取物中的IGE结合表位具有很大的相似性。
图1：三种蛋白对比（非转基因大豆▲、转基因大豆■和巴西大豆●）

来自9个对巴西坚果过敏受试者中的8个，IgE从巴西坚果(分子量9000 )中纯化的2s白蛋白，以及巴西坚果提取物中的9-KD蛋白(图2A和2B)。来自9个对巴西坚果过敏受试者中的7个的IGE也与含有2s白蛋白的转基因大豆蛋白结合，而这种蛋白不存在于非转基因大豆提取物(图2B)。其中两个受试者的血清对非转基因大豆中的蛋白质的结合非常弱，但这些蛋白质没有与2s白蛋白一起迁移。从对照组血清无粘结。对巴西坚果过敏的9个受试者中的5个血清中的IGE也与一些转基因大豆提取物中的大约12 KD的蛋白质结合(图2C)。在图2C的泳道1中看到的两个条纹最有可能是2s白蛋白的12 - KD蛋白中间体和成熟的9 -KD亚基。
图2：

除了2s白蛋白外，转基因大豆含有由两个细菌标记基因编码的蛋白质:新霉素磷酸转移酶和b-葡糖苷酸酶。纯化的新霉素磷酸转移酶和用十二烷基硫酸钠变性的b-葡萄糖醛酸酶的纯化，并没有对从巴西坚果过敏的血清中与IGE结合。这9个受试者的血清中有6个与其他巴西坚果蛋白结合在一起。这些其他蛋白质的特性是不知道的。在一种情况下，IGE没有将明显与2s白蛋白结合，而是识别出一种42 -KD蛋白(图2d)。在另一种情况下，IGE与2s白蛋白和42 -KD蛋白(未显示的数据)结合，尽管对2s白蛋白的结合强度更强；该学科的血清还识别了21、25、39和57KD的小的IGE结合蛋白，具有相对较弱的结合，在巴西坚果。在所有其他情况下，与其他巴西坚果蛋白的结合并不非常强烈，这些单独的反应没有一致的模式
对三名有巴西坚果过敏史的受试者(试验组)和三个无大豆过敏史的受试者(对照组)进行了皮肤点刺试验。所有三个(有过敏史的试验组)对转基因大豆和巴西坚果提取物都有阳性反应，比例从1 : 1000000到1 : 1000 (表1)。
表1:

（风团是医学术语，就是肿起来起过敏反应的点，比如15/35就是肿了15mm的点，笔者注）
一个代表性的反应如图3所示。所有三个人对组胺对照物均有阳性反应，对生理盐水稀释液和非转基因大豆提取物无反应。（肉眼可见的肿块，转基因大豆的过敏性和巴西坚果相同）
图3：

三个对照组对象对巴西坚果、转基因大豆和大豆或生理盐水稀释液的全强度提取物无反应，对组胺控制有阳性反应。(无图)
讨论
来自巴西坚果的2S白蛋白很可能是主要的过敏原。主要的过敏原是蛋白质，从超过50%的特定过敏原的患者中大量地与IgE结合。在这种情况下，对巴西坚果过敏的9名受试者中，有8人的血清可以识别出2S白蛋白作为巴西坚果的一种主要的IgE结合蛋白，而这一蛋白在8个实验对象中的7个中是最强的ige结合蛋白。这7个实验对象的Ig也与携带巴西坚果蛋白基因的转基因大豆中的2s白蛋白结合。此外，在对巴西坚果过敏的3个受试者中，用转基因大豆提取物进行皮刺测试呈阳性，而对非转基因大豆提取物的测试则呈阴性。需要口服挑战来确认2S白蛋白的过敏性;然而，他们会给这组被试者带来风险，他们中的大多数都在无意中对巴西坚果的食用有威胁生命的症状。
最近，Melo等人在动物实验的基础上得出结论:巴西坚果中的2S白蛋白并不是主要的过敏原。然而，一种蛋白质在动物体内诱导IgG1反应的能力并不总是能很好地反映出这种蛋白质在人类中诱导IgE反应的能力。我们认为我们的证据证明，将巴西坚果中的2S白蛋白命名为主要的巴西坚果过敏原，Ber e1。从包括大豆在内的新植物品种中提取的食物(即转基因)，可能含有Ber e1，应该被适当标注为提醒消费者。我们的研究结果表明，在通过基因工程改造(天然)作物品种的过程中，主要食物过敏原的(会)转移(到新的转基因生物中去)。
我们还检测到一些对巴西坚果过敏的受试者血清中IgE与其他巴西坚果和大豆蛋白的结合。从转基因大豆(图2C)中结合12-KD蛋白，可以解释如下事实:巴西坚果中的2S白蛋白由9-KD和3-KD亚基组成，由17-KD前体蛋白组成，由12-KD中间体组成。在转基因大豆中，这种处理往往是不完全的，导致12-KD中间体的积累(未公布的数据)。来自巴西坚果的42-KD蛋白是对巴西坚果过敏的9个受试者之一的主要过敏原。然而，这种过敏原不是主要的巴西坚果过敏原，因为在我们的研究中对巴西坚果过敏的大多数人都没有这种蛋白质的特异性IgE。在其他植物食品中，如花生和大豆，检测到大量的IgE离子结合蛋白，而对主要的IgE离子结合蛋白的鉴定可能也有问题。在动物食品中，例如虾和鳕鱼，可以检测到多种IgE离子结合蛋白，但一种主要的具有优势的IgE离子结合蛋白通常很容易识别。
如果从通常引起过敏的来源获得这些蛋白质，则应谨慎评估转基因食品中蛋白质的致敏性。仅使用目前可用的动物模型来预测人类的致敏性并不能产生准确的结果。诸如放射过敏原吸附试验、带有免疫印迹的凝胶电泳和皮肤点刺试验等技术可以识别来已知致敏源的转基因食品中可能的过敏原的IGE结合蛋白。这一战略将在评估转基因食品的致敏性不会有用，因为在这种食物中，捐赠者遗传物质来源的过敏原性是未知的。目前在植物生物技术领域的大多数应用属于后一类。

算了吧，现在都没完全验证出来，又在这造谣

兔子喂养转基因大豆:DNA片段和酶法分析评价代谢影响的检测
《Genetically modified soya bean in rabbit feeding: detection of DNA fragments and evaluation of metabolic effects by enzymatic analysis》
作者：R. Tudisco, P. Lombardi, F. Bovera, D. d’Angelo, M. I. Cutrignelli, V. Mastellone, V. Terzi, L. Avallone and F. Infascelli
摘要：利用聚合酶链反应(PCR)方法研究了转基因(GM)豆粕(提取溶剂)对家兔组织中DNA片段的存在。此外，通过测定血清、心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏的几种特异酶来评价其对细胞代谢的可能影响。利用在叶绿体trnL序列上设计的Clor1 / Clor2引物对tRNA Leu的叶绿体序列进行了明确的检测。血清中没有检测到酶水平的差异，但乳酸脱氢酶显著增加，主要是在肾脏和心脏中发现了LDH1等酶，而不是在肌肉中，这表明酶的局部产生有潜在改变。
本研究的目的是通过聚合酶链式反应( PCR)方法，对植物DNA片段在兔组织中的存在进行评价，以跟踪植物喂养的命运和转基因饮食对家兔器官特异性酶活性可能产生的健康影响。
试验结果
DNA片段检测
化学成分的常规豆粕和转基因豆粕是重叠的（表2）（表2只显示了几种成份，转基因大豆的豆粕木质素含量是非转基因1.9倍，38比20）

酶的活性
图5显示了心脏、骨骼肌、肾脏、肝脏和血清中酶活性的差异。在肾脏中检测到ALT，GGT和LDH的统计学差异（P<0.05）。而在心脏中，这种结果仅见于LDH。
图5：
表4显示了LDH同工酶在血清和组织中的相对分布。对照组和试验组之间动物的心脏LDH1、LDH2和肾脏LDH1均检测到显著性差异( p<0.05)，从而证实了这些组织中酶的显著增加。此外，尽管肝脏LDH的总活性没有显著差异，但在该器官中也有显著增加( LDH1 )和减少( LDH4)。
表4：

讨论：
对组织中酶活性的分析则有不同的结果。如图5所示，酶水平的显著差异主要涉及肾脏，在治疗动物中显示出更高水平的LDH、ALT和GGT。这样的结果似乎表明，即使血清水平不受影响，肾脏也发生了一些改变。更重要的是，心脏中LDH也显著地增加了，表明在体内两个最重要的器官中LDH的局部产生。LDH同工酶的相对分布证实了这一假设，它显示了心脏LDH1和LDH2和肾LDH1的显著差异。LDH1是在两个器官中优势同工酶，另外，在肝脏中也显示了这种同酶的显著增加和LDH4的减少，尽管在这个器官中总LDH活性没有明显的差异。这样的结果意味着，由于LDH是由M和H亚单位组成的四聚体酶，H和M亚单位的不同组合发生在肝脏(LDH - h4)。LDH-H1M3)。这一转变的原因尚不清楚，丙酮酸的底物特异性比alpha -羟基丁酸的更大，但更大的H亚单位被认为是一种更高的特异性，以降低alpha -羟丁酸对甲氧丁酸的影响。无论如何，这种转变支持了肝脏中某些代谢变化的假设。因此，从转基因家兔的三个器官中，LDH1的活性增加。这种增加的原因还没有得到充分的了解和证实，但这一结果表明，即使是在转基因家兔的LDH1等酶的本地生产中也发生了轻微的变化。此外，我们知道血清酶活性反映了每个组织对血清池的相对贡献。从血清中乳酸脱氢酶等酶的模式，与不同的组织模式比较，兔血清中乳酸脱氢酶活性最主要来源于骨骼肌，而骨骼肌是机体的主要质量组成部分。众所周知，肌肉中占主导地位的同工酶是LDH5，由于这些原因，血清中未检测到LDH1增加是可能的。而且，由于LDH1被认为参与了细胞代谢，因为它支持乳酸对丙酮酸的反应(Van Hall,2000)，我们的结果应该表明细胞代谢总体增加。这样的假设与其他作者一致，他们对转基因小鼠的某些核特性进行了显著的修改，表明其代谢率高，并有强烈的分子贩运(Malatesta et al .，2002)。不管怎样，应该额外考虑评估转基因食品的责任,这是一个事实，在多个器官中LDH的合成被改变了，这样的结果在今后的研究中必须加以考虑。
无论如何，我们的结果表明，准确的酶分析可以有助于检测饮食对细胞代谢的影响，即使在没有临床和生化标志的情况下。由于酶法的技术已经成熟，酶可以作为一种额外的工具来评估转基因喂养动物和人类健康的风险。

被吞贴了，重发
《检测在猪喂食转基因玉米Bt11后的胃肠道内容物中玉米固有和重组DNA片段及Cry1Ab蛋白》（就是猪吃转基因玉米后，检测胃里的食物有没有含转基因DNA片段蛋白等等)
Detection of corn intrinsic and recombinant DNA fragments and Cry1Ab protein in the gastrointestinal contents of pigs fed genetically modified corn Bt11.
作者：E. H. Chowdhury*, H. Kuribara†, A. Hino†, P. Sultana*, O. Mikami*, N. Shimada*,
K. S. Guruge*, M. Saito‡, and Y. Nakajima










饲料中偶然或机械的扩散可能会人为地将转基因引入环境中。对含Cry1Ab基因和Cry1Ab蛋白的粪便排泄进入土壤的碎片值得去更多的关注。无论是内在基因还是重组序列，玉米源脱氧核糖核酸DNA在胃肠道中有降解(不完全降解，笔者注)，但玉米脱氧核糖核酸DNA片段仍可用聚合酶链反应检测到。重组Cry1Ab蛋白有降解(不完全降解，笔者注)，而蛋白抗原性却得以保留下来。

《猪食物中转基因玉米的研究：猪体内摄入外源dna的命运》
Investigations on genetically modified maize (Bt-maize) in pig nutrition: fate of feed-ingested foreign DNA in pig bodies
作者：Tim Reuter · Karen Aulrich
摘要：
本文对饲喂含亲本对照玉米(12头)或转基因玉米(36头)的共计48头猪的摄入DNA的途径和命运进行了研究。猪从最初的24公斤被养肥到约108公斤。饲喂转基因玉米的动物在饲喂最后一次含玉米的饲粮后，以每组(6只)的形式在4、8、12、24、48和72小时后屠宰，那些在12小时内被屠杀的人没有得到更多的饲料，而那些在屠宰前保持更长时间的猪得到了一种以大麦和小麦代替玉米的饮食。对照组在4和8小时被屠宰，从组织和肠内容物中提取DNA，用PCR检测植物DNA和任何转基因材料的存在。在转基因玉米的最后一次喂食后，在肠内容物中检测到重组DNA长达48小时★。PCR扩增植物基因间隔物产生不同大小的片段，依赖于饲料来源。直肠样本的来源依赖于个体的个体传代率，分析表明粮食的物种特定的模式限制。在猪的组织样本中未检测到重组或玉米特异性DNA。相比之下，在被调查的猪组织中可以检测到植物DNA片段。
DNA是一种稳定的分子，可以在极端环境条件下存活和在数千年之后在有机残留物中被发现。无论研磨、碾磨、热处理和蒸汽压对商业饲料源的影响(所有非转基因食品)，不同的研磨处理方法对植物DNA没有任何可检测的破坏，只有在热处理温度100°C和150°C之间造成植物DNA的破坏,导致碎片小于100碱基对(bp)。Chiter等人还研究了确保植物组织中DNA（特别是从转基因材料）的充分碎片化所需的物理和化学条件，使之不可能稳定地转移到细菌肠道菌群的菌株中。他们还得出结论，95°C以上和加压蒸汽温度是必要的充分降解基因组DNA。(多长时间的95度，多高的压强?，笔者注）未经处理的，农场动物的饲料中含有植物DNA片段的容量大于21 kbp。在生物体内，胃肠道（GIT）经常暴露于外源DNA的不断流动的部分或完全消化的饲料成分，食入的外源性DNA在哺乳动物和家禽的胃肠道中不能被完全降解。
饲料是基于亲本玉米线(Prelude)或基因改良的玉米线(NX6262)表达Bt性状，两者都来自亲本系(Zea Mays L line CG 00256 - 176)。在喂养研究中，生产了两种种植者的饲料和两种精饲料。这些饲料都是1毫米大小的干燥颗粒，在生长饲料和育肥饲料各含有70%的父母或转基因玉米。
四十八头体重平均值为23.9·3千克的雌性猪分为单箱。猪随机分为两组。十二头猪（对照组）饲喂非转基因玉米饲料，36头猪(Bt组)饲喂转基因玉米。用生长饲料喂食到80公斤的体重，然后，用育肥饲料喂养至屠宰。猪圈的容量为96个单盒，有24个盒子，有4排。为了排除对照组和Bt组猪之间接触的可能性，在治疗组之间保留了一排盒子。
屠宰
对照组的猪被屠杀的最后体重在103.4±8.3千克和转基因组猪体重在111.5±7.9千克猪。对照组首先被屠宰，以排除Bt组猪对组织样本DNA检测的污染。为了研究饲料摄取后被喂食的DNA的命运，猪被分成不同的组。对照组的12只动物分为两组各6只，BT组分成六组，每组六只。对照组和Bt组的两个组在上午喂养后4和8小时分别屠宰。在最后一次以玉米为食的饲料喂养后，重新种植Bt组的猪被宰杀了12、24、48和72小时。剩余的Bt组的猪在最后一次饲喂含玉米的饲料后的12, 24, 48小时和72小时被宰杀，在饲喂后宰杀前，含转基因玉米的饲料被替换为45%的大麦和25%的小麦(非转基因)。
试验结果：
表2：各种基因名称引物对比表

PCR聚合酶链反应
玉米和饲料
PCR扩增表明玉米的叶绿体基因片段在玉米和含有玉米的饲料中可以检测到，无论是亲本对照还是转基因。利用从玉米中提取的DNA以及与引物对Rub 01/02或Ivr 1F/R组合 ，对提取的特定DNA片段的扩增。扩增出特定大小的基因片段有532 bp(Plant1-F/R)，140 bp(Rub 01/ 02)和226 bp(Ivr 1F/R)被放大(数据未显示)。在转基因Bt玉米和仅含Bt玉米的饲料中，引物对Cry 03/04（211 bp）的基因修饰是可以检测的，这表明可以排除亲本玉米和饲料中的任何偶然交叉污染。
肠道
为了探索胃肠中特定DNA片段的途径，在最后一次饲喂含玉米饲料后，在不同时间（每组6头）宰杀猪(4、8、12、24、48和72 h)。分别从每头猪的七段消化道（胃、三部分的小肠和结肠三部分）取食糜样品。为了检验被馈电的DNA片段的命运，使用了引物系统Plant1 F/ R,Cry 03/ 04和Rub 01/02。
从所有的猪中，直肠的内容用引物对Plant1 F/R检查。在最后一次喂食玉米饲料后，屠宰的所有动物(对照和Bt组)都可检测到玉米特异性的片段(532个bp)。此外，在最后一次喂食后24小时内，被宰杀猪的一段642个bp的碎片也被放大了。在两个Bt组经过48和72小时后屠宰，过渡阶段给予了大麦/小麦的饮食，未检测到玉米特异片段，只有642个bp大麦片段(图2C)被放大。
图2：

PCR法对Bt玉米的鉴定用引物对Cry 03/04，见图2B和表3。预期的211个bp片段可以在胃和小肠的内容中被放大，在屠宰4、8和12h的Bt组中，大多数猪的胃和小肠的含量可扩增出预期的211bp片段。在24小时后，Bt基因只能在胃(2 / 6)、结肠(3 / 6)和直肠(1 / 6)中检测到。此外,211bp微弱信号可以在猪的十二指肠,空肠和回肠内容物检测到(48 小时组)以及从同一组另一个猪一个直肠测到(48小时)。
表3：PCR检测BT组在不同时间屠宰时内容物的转基因DNA片段(211bp)

（分析：吃过转基因4小时后，几乎所有器官100%可测出转基因DNA片段，8小时后，胃直肠100%可测出转基因片段，盲肠回肠80%以上机率，12小时后，盲肠和结肠100%可测出转基因，（跟食物的蠕动有关，不排便就一直都能测出，排便了还能残留体内），48小时后仍可从4头猪的不同器官中检测出转基因成份）
组织检查
（表4是对小分子的天然叶绿体基因片段进入人体器官肌肉等进行检测的结果，结果发现140bp的叶绿体基因可以在猪的大部分器官上检出，猪的大脑未检测，事实证明小分子基因片段能进入各大器官，而不仅限于胃肠道，能否检出取决于设置分子的大小）
最初，引物对SW 01/02设计用于检测基因编码猪生长激素，用于确认从组织样本中提取的DNA的PCR扩增的可行性。从检测的所有组织样本中，获得了预期的108个bp扩增产物(结果未显示)。然后，对相同样品进行检测，分别是针对特定于玉米的转化酶基因片段(引物对IVR 1F/R)，用于Bt片段(引物Cry 03/04)，并对植物基因扩增引物对Plant1 F/R。为了测试具有较小分子大小的DNA片段更有可能通过胃肠的上皮细胞层的假设，使用了更敏感的引物系统rub 01/02。在此背景下，对每一个组织样本进行分析，以rubisco基因(叶绿素基因，非转基因，植物都有)片段为引物对Rub01/02。总共调查了每头猪的9个组织的432个样本，结果为144个阳性。检测到的rubisco片段在不同组织内分布不均匀。在62.5 %的卵巢标本中，在脾脏检出阳性率为12.5 %，血液和淋巴腺阳性率为16.6 %，肝脏和背最长肌的阳性率为54.2%。所有可检测碎片的结果汇总在表4中，选择结果如图2B所示。
表4：rubisco基因在身体各器官检出对照表

分析：在食用玉米72小时后，仍能在猪的肝、背长肌、卵巢、斜方肌60%~80%高概率的检测出DNA片段，事实证明，食物消化后的进入血液的DNA片段会游走在猪身上的任意器官、肌肉组织中！而游走DNA片段会对各器官组织起到何种作用？
检测极限
利用从参考玉米粉(丙烯酰胺，taufkirchen，德国，含2% Bt-176 )和引物对rub 01/02中提取DNA的PCR来确定目前方法检测的限度。测量的260 nm紫外线吸收表明DNA提纯含量在80 ng /µL。从玉米粉中提取的DNA随着水的增加而被稀释。图3所示的结果表明二磷酸核酮糖羧化酶基因片段(rubisco基因片段)在稀释0.001%时仍可清楚探测,对应0.8 pg /µL提取DNA。Bt基因检测在稀释至0.1%,对应80 pg /µL，使用参考玉米粉和引物对Cry 03/04提取的DNA(图3)。
图3：PCR检测极限图示

这个是PCR检测的极限，转基因低浓度反应非常灵敏，最低可以到0.08 纳克/微升
PCR产品的确认
PCR的特异性通过适当的限制性内切酶消化证实。通过HaeIII酶将扩增的Bt基因片段进行消化分解为162个bp和49个bp的两个片段。放大的Rubisco基因片段使用酶RsaI消化为86 bp和54 bp大小的片段，为了确认Plant1 F/R扩增产物，我们使用了酶AluI来对玉米特异性基因(532 bp)消化为193 bp和339 bp的两个片段，对大麦特异性基因(642 bp)切成189bp和453bp(图4)。
图4：酶切扩增不同组织内容物的凝胶电泳图

此外，Bt基因片段的扩增的特异性和扩增的Rubisco基因片段证实32P标记的寡核苷酸探针的Southern分析根据。

续上
讨论：
实验结果证明：研磨没有造成对植物DNA的任何重大破坏。此外，在大约196°C的条件下，在液氮中研磨玉米粒不会对玉米DNA造成任何严重的破坏。详细地说，从任何直肠内容中提取DNA的结果表明，到21 kbp的DNA检测量足够稳定，可以在消化道的酶活性活动中存活。此外，检测到的叶绿体DNA片段与玉米和大麦中特异性叶绿体基因的完整功能序列密切相关。这些结果表明，在猪的胃肠中，被饲料的DNA并没有完全降解。
猪体内的Bt基因片段(211 bp)的命运，在最后一次喂食含有转基因Bt玉米的饲料后，被观察到。喂食转基因玉米的Bt基因的211bp片段可以在长达24小时100个食糜样品中被检测到，而未出现在对照组的猪样本中。此外，在48小时后，在一头猪小肠和另一头猪的直肠内容物中检测到了bt基因片段。
使用描述的方法，在含有Bt玉米的猪饲料中，在组织样本中没有检测到基因片段，因为低于目前的检测范围(人为设置)。
通过对Plant1 F/ R扩增产品的检测得到的结果为在胃肠中保留Bt基因片段(或任何其他基因片段)提供了额外的证据。在24小时内，仅在直肠标本中就检测出532个bp的玉米特殊碎片。在这个组的一个样本中，除了特定于玉米的扩增外，还可以检测到大麦特异性。在48和72小时后，大麦特定642bp的片段被扩增，但不是特定于玉米的片段。这表明，含玉米的饮食超出了检测范围，在最后一次摄入后的24到48小时之间。
rubisco基因(叶绿素)片段的检测极限低至0.001%，在所有猪的不同组织中分布不均匀，除了2个Bt组未检出。两组之间的检测结果没有明显差异。通过比较不同组织间的可检测命，表明猪卵巢(每48个样本中有30个)含有更多的植物DNA片段和可放大的rubisco片段，然后是剩下的组织。（DNA片段会出现在雌性卵巢中！）这种分布可能是卵成熟过程中血液流动剧烈的结果。研究结果表明，只有小的DNA分子才能通过育肥猪的上皮细胞层。然而，进一步的研究似乎有必要确定DNA进入肠道的过程和位置，以及随后的外源DNA的代谢途径。（★小DNA是可以通过的！）
结论
所描述的饲料加工处理或有无液氮和碾磨，不会引起任何植物DNA的破坏。被摄取的DNA对胃肠道的机械(消化蠕动)和酶活性有一定的抵抗力，并没有完全降解。来自饲料的小DNA片段可以通过肠壁，进入猪的器官和组织。无论是转基因的还是亲本对照的，在猪肠壁外的器官和组织中，被喂食的DNA的转运是独立于饲料来源的。PCR和引物扩增植物特异性基因或基因片段可能是决定饲料通道率的实用工具。

《评估从苏云金芽孢杆菌Cry1Ia、Cry10Aa和Cry1Ba6重组孢子体复合物对瑞士小鼠的细胞毒性、遗传毒性和血液毒性》
Evaluation of Cytotoxicity, Genotoxicity and Hematotoxicity of the Recombinant Spore-Crystal Complexes Cry1Ia, Cry10Aa and Cry1Ba6 from Bacillus thuringiensis in Swiss Mice
摘要：苏云金芽孢杆菌(Bt)的杀虫性能长期以来一直被用作昆虫防治商业喷雾配方中的孢子结晶。最近，在许多不同的植物中都克隆出了一些BT-内毒素基因。对三种孢子晶体内毒素：Bt Cry1Ia、Bt Cry10Aa和Bt Cry1Ba6从苏云芽孢杆菌提取进行毒理学评价，以了解其对小鼠血液系统和遗传物质的不利影响。这三种孢子晶体对棉铃象鼻虫有毒性作用，是棉花作物中最具攻击性的害虫之一。Cry1Ia、Cry10Aa和Cry1Ba6对有一些血液学指标，特别是与Cry1Ia和Cry1Ba6有关，分别对红细胞和淋巴血统起作用。因此,尽管这种副作用的概况可以与其的高水平的暴露有关,这不是常见的环境,结果表明,这些Bt孢子晶体不是对老鼠无害的，表明每个孢子晶体内毒素表现出毒性特征，并可单独研究。
内毒素是由细菌释放出来的，在被昆虫的幼虫吸收后，在其中肠的碱性pH中裂开，变成有毒的。这些片段与幼虫的中肠内的细胞受体结合，导致细胞膜上的气孔，从而导致细胞死亡。再过几天，幼虫的肠子就会被分解，导致幼虫死于败血症或空洞症。Bt孢子晶体在整个生态系统中复制和分散的能力引起了人们的关注，这主要是由于它们在生物控制方面的广泛应用，以及现在在转基因植物上。因此，评估Bt与非目标生物之间的潜在相互作用是很重要的。
结果与讨论
表1显示的致突变试验结果。Cry10aa（1×109 孢子/kg）内毒素测试增加了微核的水平。
表1：
红霉素有关(表2),血红蛋白（HGB）和红细胞压积（HCT）与对照组相比，试验组在平均红细胞血红蛋白（MCH）显著降低（P＜0.01）。除了Cry1Ba6(4×108孢子/kg),试验组也减少了平均微粒血红蛋白浓度(MCHC)。Cry10Aa(5×109孢子/kg),Cry10Aa(1×1010孢子/kg),和所有Cry1Ba6试验组也显著降低平均微粒体积(MCV)值,而Cry1Ia(4×109孢子/公斤)增加红细胞分布宽度(RDW)以上引用值(p < 0.01)。（各项指标紊乱，笔者注）
表2：红血球参数对比

在白细胞像分析：与对照组相比，Cry10Aa（1×1010孢子／kg），淋巴细胞百分比显著降低；Cry1Ba6（4×108孢子／kg）和cry1ba6（2×109孢子／kg），显著降低中性粒细胞+单核细胞数目；和cry1ba6（4×109孢子／kg），两者均显著降低（表3）。
表3：白细胞参数

血小板计数方面：几乎所有的试验组平均血小板体积(MPV)和血小板值大细胞比率(P-LCR)显著增加，而Cry10Aa(1×109孢子/kg)和所有Cry1Ia试验组显著增强血小板分布宽度(PDW)(表4)。
表4：

《评估人类胃肠道中的转基因植物DNA的生存》
Assessing the survival of transgenic plant DNA in the human gastrointestinal tract
摘要：在人类饮食中加入转基因植物引起了人们对转基因植物可能从转基因植物转移到肠道菌群和肠上皮细胞的担忧。饮食中的转基因植物DNA在人体肠道内(存活的)持久性是未知的。在这里，我们研究在人类回肠造口术患者小肠转基因大豆的转基因EPSPS生存（即个人在回肠末端切除和食糜从身体转移到通过造口结肠造瘘袋）。通过小肠存活的转基因数量因人而异，在一个个体的气孔中恢复最多为3.7%。7名回肠造术者中有3人在参与这些实验前显示了从转基因大豆到小肠道菌群的低频率基因转移的证据。
人类对转基因植物的消费引发了一个问题，即转基因是否能被肠道微生物群所吸收。特别令人担忧的是基因可能转移抗生素耐药性，导致哺乳动物病原体的增加，这些病原体对抗菌剂有抗药性。在这里，我们评估了在食用转基因大豆的人类志愿者小肠内的转基因生存。虽然一小部分转基因DNA通过胃和小肠存活下来，但所有的转基因DNA都在结肠内降解。从转基因大豆到小肠道菌群的低频率基因转移有一些提示，但在受试者参与这些实验的过程中并未出现。
结果
DNA在回肠造口术患者中生存
为了评估胃和小肠中转基因DNA的存活情况，我们通过定量竞争(QC)PCR，给7个回肠造口术患者提供了一种含有转基因大豆的膳食，然后将其量化的目标DNA序列在消化系统中进行量化。在回肠造口术患者中，末端回肠是切除的，消化系统从身体转移到结肠造瘘袋。转基因大豆中的转基因大豆是EPSPS。总EPSPS结构为2,266碱基对(bp)，并编码5 -烯醇丙酮酸- 3 -磷酸合成酶(EPSPS)。PCR数据的例子和qc-PCR对EPSPS的量化，如图1所示，完整的qc - PCR数据集显示在表1中。
图1：人体肠道转基因EPSPS检测

解读：箭头位置180bp，在180bp亮灯就是转基因EPSPS反应阳性，表示转基因转移到受试者的肠道细菌中，亮灯的泳道有3/4/6/7/8/14/15/16/17/18/19/20/21/22/23/24，表明受试者1/4/6/7号转基因EPSPS呈阳性反应，受试者5号在180分钟和210分钟基本呈现阳性反应。
表1：在回肠造口术患者的小肠中的转基因EPSPS生存情况表

解读：通过表1可以看到，除了3号受试者在小肠中零星检测出片段以外，其他6个受试者在不同的时间均能在小肠检测出完整的转基因EPSPS，证明转基因EPSPS在小肠中成活，测出平均时长在120分钟之后，最长时间在360分钟时仍能测出小肠中完整的转基因EPSPS。
这顿饭喂给回肠造口术患者含有3×1012份转基因拷贝和消化标记PEG4000，来确定食物通过小肠的比例。超过60%的标记在六个受试者的食糜中被恢复(图2)。转基因(表1和图2)在所有七个受试者中被恢复,虽然通过食糜率和该核酸总回收率通过个人之间是高度可变的,从1011份转基因(或3.7%的180个基点epsps地区餐)在受试者4和受试者3中只有105份。
图2：

为了确定我们是否能检测到完整的EPSPS基因，我们受到食糜PCR扩增的引物对，整个开放阅读框。全长基因的检测样本中含有至少104份180bp片段每毫克干重的食靡(表1),但因为这样的DNA分子可能是由PCR- EPSPS重组的片段,谨慎对待全长基因完好无损的结论。
我们评估了转基因大豆的差别生存和在转基因大豆中的基因，凝集素基因Le111,12。Le1和EPSPS基因的持久性相似(图3)，表明转基因和大豆DNA的降解速度相近。
图3：le1和EPSPS基因降解速度对比

为了确定难消化的标记PEG 4000是否影响了回肠造口术患者小肠内的DNA存活，我们评估了这种聚合物的能力来抑制DNA活性。4%(wt / vol)，相当于在含有转基因大豆的膳食中PEG 4000的浓度，运输标记似乎略微提高了DNA降解率(图4略)。
人类的DNA在完整的胃肠道中存活
我们将含有转基因大豆的试验膳食喂给12名人类志愿者(完整的胃肠道)，并通过PCR对粪便中转基因的存在进行量化。对所有志愿者来说，90 - 98%的难消化的标记物在粪便中被发现，但没有检测到转基因。这并不是PCR抑制的结果，因为PCR在PCR中使用了400份transgene(数据未显示)，PCR扩增了一种180 bp的产品。因此，尽管转基因EPSPS基因可以通过胃肠蠕动者的小肠存活下来，但它在大肠内是完全降解的(虽然DNA碎裂了，但碎解后的小DNA仍可能通过肠道进入血液，运输到身体各器官组织中，有待实验证实，笔者注)。

细胞结构图：
光面内质网=滑面内质网
核染质=染色质

细胞核的结构图：可见多条染色质(绿色)

人类细胞染色质--X型，可见DNA双螺旋结构

再次重发；